一种基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法及应用技术

本发明专利技术涉及酶活性测定技术领域，具体涉及一种基于荧光检测的聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）水解酶活性高通量测定方法及其应用。一种基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法，（1）将PET水解酶与荧光蛋白融合表达，在反应前测定细胞裂解液中荧光值，以确定酶的浓度；（2）制备PET

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法及应用


[0001]本专利技术涉及酶活性测定
，具体涉及一种基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法及应用。

技术介绍

[0002]塑料制品凭借着其良好的耐酸碱等优良特性被广泛应用于制造业，但同时这使得其难以被有效降解，仅通过热机械的手段降低其机械性能并进一步焚烧填埋无法实现真正意义上的循环利用。该过程所产生的塑料废物的积累会导致环境污染并进一步威胁生态系统，据欧盟统计局统计，2019年全球塑料总产量几乎达到3.7亿吨，其中中国产量占全世界总产量的31％。虽然目前已经有通过化学和物理技术处理塑料废物的方法，但是通过这些方法加工产生的副产品同样会对环境造成污染。所以，利用微生物降解塑料已成为当前的研究热点。对苯二甲酸乙二醇酯(PET)作为市场广泛应用的塑料材质之一，作为一种聚酯型塑料，其降解的关键一步是PET水解酶催化的酯键水解。鉴于PET水解酶重要的研究和应用价值，近年来有关该酶的人工改造成为一个热点。目前的PET水解酶改造主要是基于酶的结构对目标蛋白进行单点或多点氨基酸突变，将所有突变本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法，其特征在于，包括：（1）将PET水解酶与荧光蛋白融合表达，在反应前测定细胞裂解液中荧光值，以确定酶的浓度；（2）制备PET
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FDL膜，所述PET
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FDL膜为包埋了荧光素二月桂酸酯的PET 膜；（3）将细胞裂解液与PET
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FDL膜在甘氨酸缓冲液中于反应；反应结束后，测定产物中荧光值，以确定产物浓度；（4）计算产物中的荧光值与反应前细胞裂解液中荧光值的比值，即为PET水解酶的比酶活。2.根据权利要求1所述的基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法，其特征在于，所述步骤（1）中，荧光蛋白的荧光最大发射波长应与荧光素最大发射波长相差大于100 nm。3.根据权利要求1所述的基于荧光检测的PET水解酶活性高通量测定方法，其特征在于，所述步骤（2）中，PET
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FDL膜的制备方法是：将FDL与PET塑料按照质量配比0.25~1 μg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李盛英，徐子萍，刘琨，马莉，陈月星，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：