一种基于同位素内标-QuEChERS-UPLC-MS法检测中药饮片丙烯酰胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于同位素内标

【技术实现步骤摘要】
一种基于同位素内标
‑
QuEChERS
‑
UPLC
‑
MS法检测中药饮片丙烯酰胺的方法


[0001]本专利技术涉及药物分析检测
，具体涉及一种同位素内标
ꢀ‑
UPLC
‑
MS/MS联用QuEChERS法检测“浙八味”等道地药材中丙烯酰胺含量的方法。

技术介绍

[0002]丙烯酰胺(Acrylamide,AM)是一种不饱和酰胺，如下所示：
[0003][0004]德国研究人员于1949年首次研发上市，主要用于合成聚丙烯酰胺，作为黏合剂、增强剂、絮凝剂或者食品包装材料而广泛使用。作为一种水溶性物质，AM极易被人体消化道、皮肤等其他组织吸收，在体内外均表现有致突变致癌性。1994年，国际癌症研究中心 (International Agency for Research on Cancer，IARC)将其列为二类致癌物。2002年瑞典科学家在油炸马铃薯中首次发现丙烯酰胺的存在，由此开启了食品、水质和材料等领域对AM毒性和产生机制的广泛和深入的研究。之后陆续发现了AM的危害主要有神经毒性、基因毒性和生殖毒性等。其中，神经毒性研究广泛而深入，并且有对人类确诊病例的研究，如Lars Hagmar，Chen JH等分别通过对病例的统计学分析和细胞实验验证了AM的神经毒性及毒理作用。同时对AM的产生机制研究表明，以还原糖和天冬酰氨酸等氨基酸通过美拉德反应生成AM，为其主要产生途径。
[0005]我国也已颁布AM相关的食品国家标准，但仍未规定具体品种的限量要求。而中药饮片中AM的检测技术、残留水平、限量标准以及风险评估研究均处在刚刚起步阶段，除了河北大学2010年前后有过相关的硕士研究生论文外，至今国内外有关中药中AM研究报道较少。中药材大多来源于植物，且很多是“药食同源”品种，类似于食品的高淀粉高蛋白品种较多，大多需经过高温炮制后使用，因此高温炮制工艺带来的AM残留风险客观存在，需要引起研究人员和监管部门的重视。
[0006]浙江道地中药材资源丰富，自古以来以“浙八味”(浙贝母、杭白菊、白术、浙麦冬、杭白芍、延胡索、玄参、温郁金)为代表的中药材享誉中外。2018年，浙江省确定铁皮石斛、衢枳壳、乌药、三叶青、覆盆子、前胡、灵芝、西红花为新“浙八味”道地药材培育品种，其中白术、白芍、杭白菊、温莪术、浙贝母、延胡索等均以炒制品为习用品，由此引发诸如高温炒制工艺是否会造成中药材和饮片中AM 残留哪些炮制品种AM残留风险较高等疑问。
[0007]因此，有必要对新老“浙八味”为代表的中药材和饮片的AM含量进行检测，以期为AM这一新兴的中药材和饮片中有害物质控制及相关指导原则的制定提供技术支持。

技术实现思路

[0008]本专利技术所要解决的技术问题是克服
技术介绍
的技术缺陷，提供一种基于同位素内标
‑
QuEChERS
‑
UPLC
‑
MS法检测中药饮片丙烯酰胺的方法。本专利技术以收集的新老“浙八味”为代表的中药材和饮片生品和炮制品共计247批次样品为研究对象，通过优化的QuEChERS法建立了简便通用的净化方法，并通过UPLC
‑
MS/MS对丙烯酰胺的含量进行了检测，方法简便、准确且重复性好，为丙烯酰胺这一新兴的中药材和饮片中有害物质控制及监测提供技术支持。
[0009]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
[0010]一种基于同位素内标
‑
QuEChERS
‑
UPLC
‑
MS法检测中药饮片丙烯酰胺的方法，包括如下步骤：
[0011](1)内标贮备溶液的制备：
[0012]精密量取
13
C3丙烯酰胺内标对照品溶液，加乙腈制成每1mL含 10μg的溶液，作为内标贮备溶液；
[0013](2)对照品贮备液的制备：
[0014]取丙烯酰胺对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1mL含1mg 的溶液，作为对照品贮备液；
[0015](3)系列对照品溶液的制备：
[0016]分别精密量取上述内标贮备溶液及对照品贮备液适量，用乙腈稀释并摇匀制成质量浓度分别为5、10、50、200、500、5000、10000μg
·
L
‑1含内标质量浓度为100μg
·
L
‑1的系列对照品溶液；
[0017](4)供试品溶液的制备：
[0018]取药材样品粉末2g，精密称定，置50mL离心管中，加无水硫酸镁4g、氯化钠0.5g、水10mL、乙腈10mL及内标溶液200μL，涡旋混匀，置摇床上剧烈振荡30分钟；离心10分钟，取上清液1mL，置预置有PSA0.2g的离心管中，涡旋混匀，离心，取上清液，即得供试品溶液；
[0019](5)线性回归方程的获得：
[0020]分别精密量取上述系列浓度对照品溶液各1μL，注入液相色谱质谱联用仪，测定相应丙烯酰胺及其内标的峰面积，以各标准系列工作液的丙烯酰胺进样浓度为横坐标，以丙烯酰胺定量离子对和
13
C3丙烯酰胺内标定量离子对的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程；
[0021](6)样品的检测：
[0022]取供试品溶液进行超高效液相色谱
‑
串联质谱检测；
[0023](7)丙烯酰胺浓度测定：
[0024]采用同位素内标法定量：根据试样中丙烯酰胺定量离子对和
13
C3 丙烯酰胺内标定量离子对色谱峰的面积，采用步骤(5)的线性回归方程，计算得到丙烯酰胺的浓度。
[0025]优选地，所述步骤(4)中，所述振荡时的频率为450次/分钟。
[0026]优选地，所述步骤(4)中，所述离心10分钟时的离心频率为 4000转/分钟。
[0027]优选地，所述步骤(5)和步骤(6)中，所述色谱条件为：
[0028]色谱柱为Phenomenex Kinetex C18色谱柱(100
×
2.1mm， 1.7μm；柱温：40℃；以甲醇(A)
‑
0.1％甲酸(B)为流动相，按下表的梯度比例进行梯度洗脱，流速：1.0mL
·
min
‑1；
Isotope Laboratories，1 mg
·
mL
‑1)；Cleanert PSA(天津博纳艾杰尔科技有限公司，粒径：40～60 μm)；药材及饮片购自上药凯仑(杭州)医药有限公司、浙江英特中药饮片有限公司、杭州华东中药饮片有限公司和亳州市良心药业销售有限公司。
[0041]2实验方法
[0042]2.1色谱条件与系统适用性实验
[0043]色谱柱为Phenomenex Kinetex C18色谱柱(100
×
2.1mm，1.7μm；柱温：40℃；以甲醇(A)
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于同位素内标
‑
QuEChERS
‑
UPLC
‑
MS法检测中药饮片丙烯酰胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)内标贮备溶液的制备：精密量取
13
C3丙烯酰胺内标对照品溶液，加乙腈制成每1mL含10μg的溶液，作为内标贮备溶液；(2)对照品贮备液的制备：取丙烯酰胺对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品贮备液；(3)系列对照品溶液的制备：分别精密量取上述内标贮备溶液及对照品贮备液适量，用乙腈稀释并摇匀制成质量浓度分别为5、10、50、200、500、5000、10000μg
·
L
‑1含内标质量浓度为100μg
·
L
‑1的系列对照品溶液；(4)供试品溶液的制备：取药材样品粉末2g，精密称定，置50mL离心管中，加无水硫酸镁4g、氯化钠0.5g、水10mL、乙腈10mL及内标溶液200μL，涡旋混匀，置摇床上剧烈振荡30分钟；离心10分钟，取上清液1mL，置预置有PSA0.2 g的离心管中，涡旋混匀，离心，取上清液，即得供试品溶液；(5)线性回归方程的获得：分别精密量取上述系列浓度对照品溶液各1μL，注入液相色谱质谱联用仪，测定相应丙烯酰胺及其内标的峰面积，以各标准系列工作液的丙烯酰胺进样浓度为横坐标，以丙烯酰胺定量离子对和
13
C3丙烯酰胺内标定量离子对的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程；(6)样品的检测：取供试品溶液进行超高效液相色谱
‑
串联质谱检测；(7)丙烯酰胺浓度的测定：采用同位素内标法定量：根据试样中丙烯酰胺定量离子对和
13
C3丙烯酰胺内标定量离子对色谱峰的面积，采用步骤(5)的线性回归方程，计算得到丙烯酰胺的浓度。2.如权利要求1所述的一种基于同位素内标
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑成，周颖，方翠芬，王荣，赵维良，陈碧莲，
申请(专利权)人：浙江省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：