一种可用于防治黄瓜花叶病毒的RNA分子及作物抗病毒制剂制造技术

本发明专利技术提供一种可用于防治黄瓜花叶病毒（CMV）的anti

【技术实现步骤摘要】
一种可用于防治黄瓜花叶病毒的RNA分子及作物抗病毒制剂


[0001]本专利技术涉及作物病毒病的保护和治疗，具体涉及一种可用于防治黄瓜花叶病毒病的抗病毒RNA分子及抗病毒制剂。

技术介绍

[0002]植物病毒病是危害损失较大、防治较难的一类病害，也被称为植物的“癌症”，成为世界性难题。植物病毒专化性强，某一种病毒只能侵染某一种或某些植物，但也有少数为害广泛，如烟草花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）。CMV在烟草植株内增殖和转移很快，24℃条件下侵染后，6h在叶肉细胞内出现，48h可再侵染，4d后即可显症。CMV可侵染36科双子叶植物和4科单子叶植物约124种植物，一旦发病，危害极大。一般化学药物很难破坏病毒粒子的结构，因此目前生产上主要以预防为主，尚无理想的药物可以用于植物病毒病的防控。

技术实现思路

[0003]本专利技术的一个目的在于针对现有技术的不足，提供一种抗CMV的anti
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CMV
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RNA，具有SEQ ID NO.1所示的RNA序列：SEQ ID NO.1：CGGUAGAUGCUAGAGAUCUUUUGCCUAUAUUGUUGUAACUCUCGCAGAUCUCCGGAUCUGCGAGAGUUACAACAAUAUAGGCUUUUGCCAUCCGGCAUACUUGUUCAUCUACACCGGUAGAUGCUAGAGAUCUUUUGCCUGUCUUAUUCUCAUCGUCGUGUCCCUCCGGGGACACGACGAUGAGAAUAAGACAGGCUUUUGGCGCCGCAUCUCGAUGGUCAGAAUCACCGGUAGAUGCUAGAGAUCUUUUGCCAACAGAAGCAACAACAUCCAAGCUCUCCGGAGCUUGGAUGUUGUUGCUUCUGUUGGCUUUUGGCCCAAGGAGAAGGUGCUGAUUGACACAAGGAGGCAGUGUCAAUCAGCACCUUCUCCUUGGGCCUUUUGAUCUCUAGCAUCUACCGGUGAUUCUGACCAUCGAGAUGCGGCGCCUUUUGAUCUCUAGCAUCUACCGGUGUAGAUGAACAAGUAUGCCGGAUGGCUUUUGAUCUCUAGCAUCUACCGGUGAUUAUCUCUAGCAUCUACCGGUGACUUUUGAUCUCUAGCAUAAGCCUCCAAUGCUAGAGAUCUUUUGCCUUGAACAUCAGAACGAGGGCGACCCUCCGGGGUCGCCCUCGUUCUGAUGUUCAAGGCUUUUGUCACCGGUAGAUGCUAGAGAUAAUCAC本专利技术的另一个目的在于提供一种作物抗病毒制剂，所述抗病毒制剂中至少包含anti
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CMV
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RNA。
[0004]本专利技术所述抗病毒制剂可抑制的病毒至少包括黄瓜花叶病毒（CMV）及其同属病毒。
[0005]在某些实施例中，所述抑制剂为包含所述anti
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CMV
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RNA的喷雾剂，通过喷雾来实现对CMV的有效预防和治疗。
[0006]本专利技术的有益效果主要体现在：1．施加anti
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CMV
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RNA的溶液能显著抑制CMV在植物上的增殖及感染毒力，可用于蔬菜作物的CMV的防治。
[0007]2．抗病毒制剂是基于SIGS技术防治作物病害，其主要优势在于RNA作为抗病毒因子，具有环境友好、专一性强、抗病毒效果良好等特性，是未来农药发展的主要方向之一。
附图说明
[0008]图1：anti
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CMV
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RNA的体外转录结果，其中，泳道M：DL2000分子量marker；泳道1：anti
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CMV
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RNA；图2：anti
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CMV
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RNA分子在烟草叶片上对CMV增殖的抑制效果。
[0009]具体实施方式：为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种可用于防治黄瓜花叶病毒的anti
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CMV
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RNA分子及作物抗病毒制剂的制备，包括以下步骤：1. 编码抗病毒RNA分子的DNA模板的合成：根据本专利技术提供的抗病毒RNA分子（SEQ ID NO.1所示）的序列，推导出其编码的DNA模板序列，并在模板序列上游插入T7启动子序列，将这条编码抑菌RNA分子的模板DNA序列送生物公司进行化学合成获得。
[0010]2. anti
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CMV
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RNA的体外转录合成：利用T7 RNA 体外转录试剂盒，按照操作说明获得anti
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CMV
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RNA分子，将其稀释成100 ng/μL，用于抗病毒实验。
[0011]对比例：大肠杆菌RNA，作为不能靶向灰霉病菌的阴性对照（NC
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RNA）。
[0012]验证试验：1．抗病毒RNA分子的体外转录通过T7体外转录试剂盒，得到目的RNA分子，通过凝胶电泳检测RNA的体外转录效率。结果见图1所示。由图1可知，本专利技术的抗病毒RNA分子，可通过体外转录制备。
[0013]．抗病毒RNA分子对CMV的抑制效果选取生长整齐一致的烟草，从下往上选择第4和第5片叶片通过注射接种CMV病毒，该CMV病毒带有eGFP标签，可表达绿色荧光蛋白。接毒后2d再喷洒100 ng/μL的抗病毒RNA溶液，继续培养5d，以浓度相同的大肠杆菌总RNA作为对照。在紫外下观察烟草第6、第7和第8片叶子的病毒侵染情况，结果如图2所示。
[0014]由图2可知，在喷洒大肠杆菌RNA的植株上，第6和第7片叶子的叶柄上绿色荧光表达明显，表明病毒已经侵染到这两片叶子。相反，喷洒本专利技术的实施例抗病毒RNA分子后，第6片叶柄上仅有轻微的绿色荧光，第7和第8两片叶子的叶柄完全没有GFP的表达，表明本专利技术的抗病毒RNA分子可以有效抑制病毒在植物体内的复制和移动，可以用于植物抗病毒防治。
[0015]综上，表明本专利技术提供的anti
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CMV
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RNA分子具有抗病毒的效果。成功解决了目前对CMV无药可用的困境。
[0016]上述实施例只是为说明本专利技术的应用效果，并不能以此限制本专利技术的保护范围。凡根据本专利技术的实质所做的等效变换或修饰，或利用本专利技术在其它植物上实施对CMV及其它相关病毒的防治，都应该涵盖在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可用于防治黄瓜花叶病毒的anti
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CMV
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RNA分子，其特征在于，具有SEQ ID NO.1所示的RNA序列。2.根据权利要求1所述的anti
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CMV
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RNA分子，其特征在于，通过以下方法得到：根据其编码的DNA模板序列，在模板序列上游插入T7启动子序列，合成DNA模板,体...

【专利技术属性】
技术研发人员：金伟波，陈强，吴方丽，杜志游，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：