恒温核酸扩增反应管制造技术

本实用新型专利技术公开了一种恒温核酸扩增反应管，所述反应管包括管体、管盖、和穿刺部件。本实用新型专利技术的恒温核酸扩增反应管，能有效避免气溶胶污染，显著增加检测结果的精准性，具有很好的应用前景。好的应用前景。好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
恒温核酸扩增反应管


[0001]本技术涉及医学检测工具
，尤其涉及一种恒温核酸扩增反应管。

技术介绍

[0002]重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)是基于重组酶聚合酶介导的扩增原理，模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合(重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶)对DNA模板进行特异性扩增，是一种恒温核酸扩增技术，可在接近体温条件下实现快速特异性扩增(25℃
‑
42℃，5
‑
30min)，作为一种等温技术减少了对高精度昂贵仪器、稳定电力供应设施及高级别实验室的依赖，只需要一个恒温装置就可完成，且可通过荧光分析装置判别是否存在扩增产物，具有对设施和操作要求均较为简单的特点，已广泛应用于生命科学研究、医学检测、农业、食品安全、转基因检测等多个领域。
[0003]为了进一步提高RPA的检测灵敏度，有研究者提出了巢式RPA检测方法(nestRPA)(Wanqiu Huang,Dachuan Lin,Cuini Wang,Chaohui Bao,Zhaoqi Zhang,Xinchun Chen,Zheng Zhang,Jian Huang#.The determination of release from isolation of COVID
‑
19patients requires ultra
‑
high sensitivity nucleic acid test technology.J Infect.2020Jul 2；S0163
‑
4453(20)30456
‑
4.doi:10.1016/j.jinf.2020.06.075.)，nestRPA的基本原理是：先用外引物扩增目的基因第一片段，然后用内引物扩增完全位于第一扩增片段内的目的基因第二片段。为了消除酶的荧光信号影响，在第一次的RPA反应体系中不包含荧光探针。在第二次RPA反应中，加入荧光探针。经实验证实nestRPA具有超高灵敏度，将为新冠病毒、流感病毒、猪瘟病毒等各种病毒的尽早发现提供有力的技术支撑。但是，nestRPA要经两次RPA反应，第一次RPA反应完之后，需打开反应管盖子，加入第二次RPA反应所需的内引物和探针等，再盖上反应管盖子进行第二次RPA反应，直至反应结束检测结果。其中，在第一次RPA反应完之后打开反应管盖子的过程中，容易产生核酸气溶胶污染，导致假阳性结果。因此，急需开发一种可以“一管法”完成nestRPA的反应管，在第一次RPA反应完之后无需打开反应管盖子，就可进行第二次RPA反应。

技术实现思路

[0004]本技术要解决目前用于巢式RPA检测的反应管容易产生核酸气溶胶污染的技术问题，提供一种恒温核酸扩增反应管，该反应管能有效避免巢式RPA检测过程中的开盖操作，防止污染，使检测结果更加精准。
[0005]为了解决上述技术问题，本技术通过如下技术方案实现:
[0006]在本技术的一个方面，提供了一种恒温核酸扩增反应管，所述反应管包括管体、管盖、和穿刺部件，该穿刺部件设置于管体入口处内侧。
[0007]优选的，所述穿刺部件为空心圆锥体形状，在其圆锥侧面上设有多个孔洞，以利于液体离心后下沉管底。
[0008]所述管盖的开口可用封口膜密封，所述封口膜包括耐热薄膜型封口膜。
[0009]所述管盖的顶端可开设有加样口。
[0010]所述管盖在其底部预先密封可刺破封口膜的前提下，管盖内部可通过管盖顶端的加样口加入反应液体。
[0011]在本技术的另一个方面，提供了另一种实施方式的恒温核酸扩增反应管，所述反应管包括管体、管盖、和穿刺部件，该穿刺部件设置于管盖的顶端。
[0012]优选的，所述穿刺部件为穿透管盖顶端的钉子形部件，可于管盖顶端外侧推动该穿刺部件。
[0013]所述管盖内可加入液体如PCR反应体系等，管盖的开口可用封口膜封住。
[0014]本技术恒温核酸扩增反应管，通过独特的结构设计，使巢式RPA检测在第一次RPA反应完之后无需打开反应管盖子，就可进行第二次RPA反应，有效避免了气溶胶污染，显著增加了检测结果的精准性。
附图说明
[0015]下面结合附图和具体实施方式对本技术作进一步详细的说明。
[0016]图1是本技术恒温核酸扩增反应管的立体结构示意图；
[0017]图2是本技术恒温核酸扩增反应管的分解示意图；
[0018]图3是本技术恒温核酸扩增反应管的外观示意图；
[0019]图4是本技术恒温核酸扩增反应管另一种实施方式的立体结构示意图；
[0020]其中，在图1
‑
4中：
[0021]1‑
管体，2
‑
管盖，3
‑
穿刺部件，4
‑
穿刺部件圆锥侧面上的孔。
具体实施方式
[0022]如图1
‑
2所示，本技术恒温核酸扩增反应管，包括管体1、管盖2、和穿刺部件3，该穿刺部件3设置于管体1入口处内侧。在本技术的一个具体实施方式中，穿刺部件3为空心圆锥体形状，在其圆锥侧面上设有多个孔4(见图3)。使用本技术反应管进行巢式RPA检测时，第一次RPA反应的反应体系加在管盖2内，并用封口膜(parafilm)封住管盖2开口，然后将其置于恒温扩增仪中39℃条件下进行第一次RPA反应。当第一次RPA反应结束，在管体1中预先加入第二次RPA反应所需的除反应模板外的成分，再将封有封口膜的管盖2盖入管体1中，此时设置于管体1入口处内侧的穿刺部件3会刺破管盖2开口处的封口膜，使管盖2内的第一次RPA反应产物通过穿刺部件3圆锥侧面上的孔4全部流入管体1中，作为第二次RPA反应的模板，然后，混合、离心，在荧光
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等温扩增仪中39℃条件下进行第二次RPA反应，最后检测荧光结果。由于采用本技术恒温核酸扩增反应管，巢式RPA检测在第一次RPA反应结束之后，无需打开反应管盖子即可进行第二次RPA反应，有效避免了因开盖操作引起的气溶胶污染，显著增加了检测结果的精准性。
[0023]在本技术的另一个具体实施方式中，管盖2的顶端开设有加样口。使用本技术反应管进行巢式RPA检测时，先将管盖2下面开口用封口膜密封，再从管盖2顶端的加样口加入第一次RPA反应的反应体系，封上加样口，然后将其置于恒温扩增仪中39℃条件下进行第一次RPA反应。当第一次RPA反应结束，在管体1中预先加入第二次RPA反应所需的除反
应模板外的成分，再将封有封口膜的管盖2盖入管体1中，此时设置于管体1入口处内侧的穿刺部件3会刺破管盖2开口处的封口膜，使管盖2内的第一次RPA反应产物通过穿刺部件3圆锥侧面上的孔洞4全部流入管体1中，作为第二次RPA反应的模板，然后，混合、离心，在荧光本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述反应管包括管体(1)、管盖(2)、和穿刺部件(3)，该穿刺部件(3)设置于管体(1)入口处内侧，所述穿刺部件(3)为空心圆锥体形状，在其圆锥侧面上设有多个孔洞(4)。2.一种恒温核酸扩增反应管，其特征在于，所述反应管包括管体(1)、管盖(2)、和穿刺部件(3)，该穿刺部件(3)设置于管盖(2)的顶端，所述穿刺部件(3)为穿透管盖(2)顶端的钉子形部件，可于管盖(...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄婉秋，黄健，
申请(专利权)人：黄婉秋，
类型：新型
国别省市：