一种肺炎支原体检测装置及检测方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，提供一种肺炎支原体检测装置及检测方法，包括外壳、进出样模块、反应容器、供料模块、加热模块、荧光检测模块和控制模块，利用本申请实施例所提供的检测装置，可以将扩增产物与LbCas12a

【技术实现步骤摘要】
一种肺炎支原体检测装置及检测方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体而言，涉及一种肺炎支原体检测装置及检测方法。

技术介绍

[0002]肺炎支原体是最小的原核微生物，无细胞壁，具有高度的多态性，也是引起非典型肺炎和社区获得性肺炎(CAP)的常见病原体。临床症状主要表现为咳嗽、发热、咽喉痛和肌肉痛，与其他呼吸道病原体如金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、流感病毒和SARS
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CoV
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2相似，极易误诊。
[0003]传统的肺炎支原体的鉴定包括分离培养、免疫学检测和分子生物学检测。分子生物学是检测肺炎支原体最重要的方法，包括聚合酶链反应(PCR)、实时荧光定量PCR(qPCR)和等温扩增技术等。qPCR是早期快速检测肺炎支原体核酸的主要方法，能进行相对和绝对定量，且比普通PCR具有更高的灵敏度和特异性，但其对仪器、环境和实验室人员的要求较高。为了实现肺炎支原体的早期快速诊断，亟待提供一种肺炎支原体检测方法及检测装置。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种肺炎支原体检测装置及检测方法，以至少部分地解决上述的技术问题。
[0005]根据本专利技术的第一方面，提供一种肺炎支原体检测装置，包括外壳、进出样模块、反应容器、供料模块、加热模块、荧光检测模块和控制模块，其中：
[0006]所述进出样模块、所述反应容器、所述供料模块、所述加热模块、所述荧光检测模块和所述控制模块均设置于所述外壳内，所述反应容器具备加热腔，所述供料模块的供料泵伸入所述加热腔内，所述加热腔的进出样开口设置于所述外壳上，所述进出样模块能够通过所述进出样开口进入并放置于所述加热腔内，所述反应容器的外壁与所述加热模块相互贴合；
[0007]所述进出样模块包括多个反应管，所述反应容器的外壁及所述反应管均由透明材料制成；
[0008]所述供料模块通过供料泵为所述进出样模块加料，所述荧光检测模块正对所述反应容器及所述进出样模块；
[0009]所述控制模块与所述供料模块、所述加热模块、所述荧光检测模块均相连。
[0010]优选地，所述加热模块至少具备35℃和37℃两个恒温温度。
[0011]优选地，所述供料泵包括中空的伸缩臂和泵体，所述伸缩臂通过所述泵体与所述供料模块的储藏罐相连，所述泵体用于通过所述伸缩臂将药剂从储藏罐内泵出。
[0012]优选地，所述供料模块至少用于分步添加所述正向引物、所述反向引物和所述LbCasa
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gRNA复合物。
[0013]优选地，所述反应容器还包括保护盖，所述保护盖与所述加热腔形状配合并能够
封闭所述进出样开口。
[0014]根据本专利技术的另一方面，提供一种利用如上所述的肺炎支原体检测装置进行肺炎支原体检测方法，包括下列步骤：
[0015]在所述进出样模块(2)内通过ERA扩增样本序列，所述样本序列包括靶序列或目的序列，得到扩增产物；
[0016]选取gRNA序列，基于所述gRNA序列制备LbCas12a
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gRNA复合物，所述LbCas12a
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gRNA复合物包含荧光探针；
[0017]通过所述供料模块(4)向所述进出样模块(2)内添加所述LbCas12a
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gRNA复合物，在所述进出样模块(2)内将所述扩增产物与所述LbCas12a
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gRNA复合物混合并进行扩增循环，若所述荧光检测模块(6)判断存在荧光效应，则判断所述样本中存在肺炎支原体。
[0018]优选地，所述ERA扩增样本序列包括：
[0019]选取正向引物和反向引物，通过ERA扩增所述样本序列，所述正向引物的序列至少如SEQ ID No.3或SEQ ID No.4任一所示，所述反向引物的序列至少如SEQ ID No.5或SEQ ID No.6任一所示。
[0020]优选地，所述gRNA的序列为多个。
[0021]优选地，所述gRNA序列至少如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2任一所示。
[0022]优选地，所述基于所述gRNA序列制备LbCas12a
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gRNA复合物包括：
[0023]将150nM的LbCas12a与60nM的所述gRNA在5
×
NEBuffer 2.1中37℃预孵育10分钟；
[0024]以300nM的终浓度加入F
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Q探针，即得到所述LbCas12a
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gRNA复合物。
[0025]通过本申请实施例所提供的肺炎支原体检测装置，通过在进出样模块内添加待测样本，并利用控制模块控制供料模块和加热模块向内部加入LbCas12a
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gRNA复合物等其他配合药剂及加热促进反应，即可利用透明的反应管和反应容器及荧光检测装置快速判断是否存在肺炎支原体，有效提高了肺炎支原体检测的便捷性和可推广性。
[0026]根据本申请实施例的肺炎支原体检测方法，可在短时间内完成肺炎支原体的检测。其中，等温扩增仅需15分钟，虽然荧光检测系统在20分钟左右达到平台期，但扩增结果可在5分钟内判断，因此改肺炎支原体检测方法仅需30分钟即可检测是否存在肺炎支原体序列。此外，肺炎支原体序列的提取可以在25分钟内完成，因此从样品提取到肺炎支原体序列检测耗时约1小时，能满足快速检测的需要。
附图说明
[0027]通过阅读参照以下附图所作的对非限制性实施例的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
[0028]图1是根据本专利技术的肺炎支原体检测方法的示意图；
[0029]图2是根据本专利技术的肺炎支原体检测装置的示意图。
具体实施方式
[0030]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅用于解释相关专利技术，而非对该专利技术的限定。为了便于描述，附图中仅示出了与专利技术相关的部分。
[0031]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0032]如图2所示，本专利技术还提供一种肺炎支原体检测装置，包括外壳1、进出样模块2、反应容器3、供料模块4、加热模块5、荧光检测模块6和控制模块7，其中：
[0033]进出样模块2、反应容器3、供料模块4、加热模块5、荧光检测模块6和控制模块7均设置于外壳1内，反应容器3具备加热腔31，供料模块4的供料泵40伸入加热腔31内，加热腔31的进出样开口310设置于外壳1上，进出样模块2能够通过进出样开口310进入并放置于加热腔31内，反应容器3的外壁与加热模块5相互贴合；
[0034]进出样模块2包括多个反应管20，反应容器3的外壁30及反应管20均由透明材料制成；
[0035]供料模块4通过供料泵40为进出样模块2加料，荧光检测模块6正对反应容器3及进出样模块2；
[0036]控制模块7与供料本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肺炎支原体检测装置，其特征在于，包括外壳(1)、进出样模块(2)、反应容器(3)、供料模块(4)、加热模块(5)、荧光检测模块(6)和控制模块(7)，其中：所述进出样模块(2)、所述反应容器(3)、所述供料模块(4)、所述加热模块(5)、所述荧光检测模块(6)和所述控制模块(7)均设置于所述外壳(1)内，所述反应容器(3)具备加热腔(31)，所述供料模块(4)的供料泵(40)伸入所述加热腔(31)内，所述加热腔(31)的进出样开口(310)设置于所述外壳(1)上，所述进出样模块(2)能够通过所述进出样开口(310)进入并放置于所述加热腔(31)内，所述反应容器(3)的外壁与所述加热模块(5)相互贴合；所述进出样模块(2)包括多个反应管(20)，所述反应容器(3)的外壁(30)及所述反应管(20)均由透明材料制成；所述供料模块(4)通过供料泵(40)为所述进出样模块(2)加料，所述荧光检测模块(6)正对所述反应容器(3)及所述进出样模块(2)；所述控制模块(7)与所述供料模块(4)、所述加热模块(5)、所述荧光检测模块(6)均相连。2.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述加热模块(5)至少具备35℃和37℃两个恒温温度。3.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述供料泵(40)包括中空的伸缩臂(400)和泵体(401)，所述伸缩臂(400)通过所述泵体(401)与所述供料模块(4)的储藏罐(41)相连，所述泵体(401)用于通过所述伸缩臂(400)将药剂从储藏罐(41)内泵出。4.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述供料模块(4)至少用于分步添加所述正向引物、所述反向引物和所述LbCas12a
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gRNA复合物。5.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置，其特征在于，所述反应容器(3)还包括保护盖(32)，所述保护盖(32)与所述加热腔(31)形状配合并能够封闭所述进...

【专利技术属性】
技术研发人员：何军，邓仲良，胡海洋，胡茜盼，苏晓玲，
申请(专利权)人：南华大学附属南华医院，
类型：发明
国别省市：