用于制造装置的方法、装置和试剂盒制造方法及图纸

本发明专利技术涉及用于制造装置的方法、装置和试剂盒。提供了用于制造装置的方法，其中将已知量的试剂可靠地固定在反应场中，其可以在室温下储存，并且使用其可以正确评价实时PCR设备的性能。该方法是用于制造具有至少一个孔的装置的方法，其中至少一个孔中特定拷贝数的核酸被固定在反应场中，该方法包括用酶提取核酸的核酸提取步骤以及通过在5℃至45℃下干燥使酶失活的干燥失活步骤。失活的干燥失活步骤。

【技术实现步骤摘要】
用于制造装置的方法、装置和试剂盒


[0001]本专利技术涉及用于制造装置的方法、装置和试剂盒。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2020年11月30日提交的日本专利申请号2020
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198798和2021年6月10日提交的日本专利申请号2021
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097383的优先权，其内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0004]PCR或qPCR(定量PCR)用于对核酸进行定性和定量评价。例如，通过检查特定基因的存在，可以识别品种、评价遗传疾病或评价病毒的存在与否。到目前为止，仪器的性能保证和用于保证结果的测量系统的质量控制都是通过仪器加热块的温度测量和用户对仪器的管理来进行的。
[0005]近年来，由于PCR还被用于转基因作物/食品(GMO)的否认试验(denial test)和再生医学领域的病毒污染否认试验，因此，例如，要求试验结果的可靠性，并且有必要保证测量系统本身具有足以承受否认测试的准确度并保持该准确度。
[0006]例如，专利文献1描述了一种装置，其中至少一个孔中的核酸被定义为特定拷贝数。

技术实现思路

[0007]然而，在传统装置中，由于已知数量的DNA以溶液的形式提供，存在由于DNA劣化而导致有效期短的问题。此外，由于溶液的移动，例如，在运输期间，可以认为DNA附着在反应场以外的地方，因此不能展现出期望的性能。
[0008]为解决这些问题，可以考虑采用冷藏储存(
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20℃或以下储存)和冷藏运输；然而，存在需要维持和管理冻结状态的问题。
[0009]本专利技术提供了一种用于制造装置的方法，其中已知量的试剂可靠地固定在可以在室温下储存的反应场中，并且利用该方法可以正确地评价实时PCR装置的性能。
[0010]本专利技术的用于制造装置方法是一种制造具有至少一个孔的装置的方法，其中至少一个孔中的特定拷贝数的核酸被固定在反应场中，该方法包括用酶提取核酸的核酸提取步骤和通过在5℃至45℃下干燥使酶失活的干燥失活步骤。
[0011]根据本专利技术的用于制造装置的方法，可以提供一种用于制造装置的方法，其中已知量的试剂可靠地固定在可以在室温下储存的反应场中，并且使用该方法可以正确评价实时PCR装置的性能。
附图说明
[0012]图1是显示DNA复制细胞的频率与荧光强度之间的关系的一个实例的图。
[0013]图2是显示电磁阀式喷射头的一个实例的示意图。
[0014]图3是显示压电式喷射头的一个实例的示意图。
[0015]图4是显示图3中的压电式喷射头的改进实例的示意图。
[0016]图5A是显示施加到压电元件的电压的一个实例的示意图。图5B是显示施加到压电元件的电压的另一实例的示意图。
[0017]图6A至6C是显示液滴状态的一个实例的示意图。
[0018]图7是显示使液滴依次降落在孔内的分配装置的一个实例的示意图。
[0019]图8是显示液滴形成装置的一个实例的示意图。
[0020]图9是显示用于控制图8的液滴形成装置的机构的硬件块的视图。
[0021]图10是显示用于控制图8的液滴形成装置的机构的功能块的视图。
[0022]图11是显示液滴形成装置的操作的一个实例的流程图。
[0023]图12是显示液滴形成装置的改进实例的示意图。
[0024]图13是显示液滴形成装置的另一个改进实例的示意图。
[0025]图14A和图14B是显示其中飞行的液滴含有两个荧光颗粒的情况的视图。
[0026]图15是显示在颗粒彼此不重叠的情况下的亮度值Li与实际测量的亮度值Le之间的关系的视图。
[0027]图16是显示液滴形成装置的另一个改进实例的示意图。
[0028]图17是显示液滴形成装置的另一个实例的示意图。
[0029]图18是显示用于对穿过微流路的细胞进行计数的方法的一个实例的示意图。
[0030]图19是显示用于获取喷射头的喷嘴单元附近的图像的方法的一个实例的示意图。
[0031]图20是显示概率P(＞2)与平均细胞数的关系的图。
[0032]图21A是显示装置的一个实例的透视图。图21B是沿图21A中箭头方向的b
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b'线截取的剖视图。
[0033]图22是显示性能评价装置的硬件配置的一个实例的框图。
[0034]图23是显示性能评价装置的功能配置的一个实例的框图。
[0035]图24是显示性能评价程序处理的一个实例的流程图。
[0036]图25A是显示实验实施例1中的目标扩增产物的Cq值的面内分布的表。图25B是显示实验实施例1中扩增反应的评价结果的表。
[0037]图26A是显示实验实施例1中的加热温度与Cq Ave之间的关系的图。图26B是显示实验实施例1中的加热温度与Cqσ之间的关系的图。
[0038]图27是显示基于泊松分布分散的拷贝数与变异系数CV之间的关系的图。
[0039]图28A是显示实验实施例5中对照样品(参考)和不溶性载体样品的扩增产物的理论拷贝数的表。图28B是显示对照样品和不溶性载体样品的扩增产物的Cq值的面内分布的表。
[0040]图29是显示实验实施例5中的对照样品(参考)的理论拷贝数与Cq值之间的关系的校准曲线。
具体实施方式
[0041]在下文中，根据本专利技术的一个实施方式的制造装置的方法、装置和试剂盒(以下，可以分别简称为“本实施方式的制造方法”、“本实施方式的装置”和“本实施方式的试剂盒”)将根据需要参考具体实施方式和附图进行描述。这些实施方式和附图仅为便于理解本
专利技术而举例，并不用于限制本专利技术。也就是说，以下所述的构件的形状、尺寸、布置等可以在不脱离本专利技术的主旨的范围内进行变更和改进，并且本专利技术也包括其等同物。
[0042]进一步地，在所有附图中，相同的构成元件由相同的附图标记表示，并且不再重复描述。
[0043]在本说明书中，所使用的所有技术和科学术语与本领域技术人员通常理解的含义相同，除非另有说明。本说明书中提及的所有专利、申请和其他出版物和信息通过引用以其整体并入本文。此外，在本说明书中引用的出版物与本说明书中的描述之间存在冲突的情况下，以本说明书中的描述为准。
[0044]<用于制造装置的方法>
[0045]本实施方式的用于制造装置的方法是一种用于制造具有至少一个孔的装置的方法，其中至少一个孔中特定拷贝数的核酸固定在反应场中，该方法包括用酶提取核酸的核酸提取步骤和通过在5℃至45℃下干燥使酶失活的干燥失活步骤。
[0046]由于本实施方式的制造装置的方法是用于制造具有至少一个孔的装置的方法，其中至少一个孔中特定拷贝数的核酸被固定在反应场中，该方法包括用酶提取核酸的核酸提取步骤和通过在5℃至45℃下干燥使酶失活的干燥失活步骤，因此可以制造其中核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制造装置的方法，所述装置具有至少一个孔，其中将所述至少一个孔中特定拷贝数的核酸固定在反应场中，所述方法包括：用酶提取核酸的核酸提取步骤；以及通过在5℃至45℃下干燥使所述酶失活的干燥失活步骤。2.根据权利要求1所述的用于制造装置的方法，其中将所述核酸固定到所述反应场是固定到所述孔的底表面。3.根据权利要求1所述的用于制造装置方法，其中将所述核酸固定到所述反应场是固定到与所述反应场接触的不溶性载体。4.根据权利要求1所述的用于制造装置的方法，其中将所述核酸固定到所述反应场是将固定到不溶性载体的所述核酸添加到所述反应场。5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于制造装置的方法，其中所述干燥是在减压下干燥。6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于制造装置的方法，其中所述核酸被并入到细胞核中的核酸中。7.根据权利要求1至6中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：海野洋敬，中泽聪，米川侑希，桥本路缘，布藤聪，大西真理，里兹蒂安，
申请(专利权)人：株式会社理光，
类型：发明
国别省市：