一种可防粘连的肌腱材料及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种可防粘连的肌腱材料及其制备方法。所述肌腱材料由调节性T淋巴细胞外泌体与肌腱组成，通过将T淋巴细胞外泌体与肌腱复合后经冻干制备而成。本发明专利技术制备的复合Treg细胞外泌体的肌腱组织暴露于体液中，可充分获得营养物质，可加快植入腱细胞长入肌腱组织中，缩短肌腱组织再生重建的时间，Treg细胞可大规模培养，Treg细胞外泌体获取容易，Treg细胞外泌体与肌腱材料冻干后，可于冷藏条件或室温条件下长时间保存，货架有效期长，制备的肌腱材料使用方便，无需物理隔离。无需物理隔离。无需物理隔离。

【技术实现步骤摘要】
一种可防粘连的肌腱材料及其制备方法


[0001]本专利技术属于组织工程再生医疗产品
，具体涉及一种可防粘连的肌腱材料及其制备方法。

技术介绍

[0002]肌腱损伤是一种常见的运动损伤，一般需要以外科手术进行修补或缝合。由于肌腱的血供较差，肌腱损伤后难以自愈，术后约40％的患者会发生不同程度的肌腱粘连，严重影响了患者功能的康复。当前的研究认为，肌腱粘连是机体一种无菌性纤维增生炎症反应，机体在物理、化学和生物等各种因素刺激下，释放组胺、缓激肽等血管活性物质及细胞因子，使得局部毛细血管通透性增加，导致充血、水肿并形成炎性渗出，渗出液中含有的纤维蛋白、多核细胞和炎性细胞等刺激肌腱周围组织中的成纤维细胞增殖并产生胶原纤维，从而形成粘连。
[0003]目前，物理隔离是临床最常用的降低肌腱粘连的方法之一，市面上最常见的有硅胶膜、透明质酸膜、几丁质膜、聚乳酸膜、生物羊膜、自体或异体筋膜等(周秀军.不同生物材料预防肌腱损伤后粘连的评价[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(21):3915
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3918；康东.可吸收生物材料在肌腱损伤重建中的防粘连作用[J].中国组织工程研究，2016，20(21)：3185
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3192.)，如专利202010574129.9公开的为壳聚糖修饰的胶原蛋白膜，专利202110906851.2公开的为新鲜羊膜负载药物来昔布，专利202110264223.9则为聚乳酸与I型胶原蛋白按一定比例、分层次复合的膜，这些膜产品具有一定的防止肌腱粘连的作用，但膜与机体黏附性较差，手术时经常需要缝合，固定包裹操作繁琐；同时，这些膜主要通过物理屏障作用，将肌腱周围渗出的纤维蛋白、多核细胞和炎性细胞与肌腱隔离，阻碍了腱周成纤维细胞分泌胶原纤维与肌腱的粘连，发挥防粘连作用，此外，物理隔离反而不利于肌腱组织获取营养物质，延长肌腱组织的再生重建过程。
[0004]另外，也有一些研究者使用间充质干细胞外泌体(姚之肖.人脐带间充质干细胞外泌体对肌腱修复的作用及相关机制研究.上海交通大学博士学位论文,2020年6月.)或巨噬细胞外泌体(崔昊旻.巨噬细胞外泌体mi RNA介导肌腱粘连的机制研究.上海交通大学博士学位论文,2019年5月.)开展了肌腱防粘连的机制性研究，但是众所周知的是，脐带间充质干细胞常作为局部组织免疫微环境的调节，并不具有免疫调节的靶向性；而迄今为止，巨噬细胞在肌腱粘连的形成过程中的角色仍然是一个有争议的话题，一些研究认为巨噬细胞缺少才可以显著改善组织愈合的治疗，减少腱周粘连形成；一些关于巨噬细胞与器官纤维化的研究也表明，巨噬细胞缺失可以显著改善器官愈合，有效防止纤维化基本的发生发展，进一步验证了巨噬细胞是多种组织愈合中的不利因素，因此，使用巨噬细胞外泌体干预肌腱粘连可能并非是一个比较好的选择。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种可防粘连的肌腱材料及其制备方法。
[0006]一种可防粘连的肌腱材料，所述肌腱材料由调节性T淋巴细胞(regulotary T cell，Treg)外泌体与肌腱组成，通过将T淋巴细胞外泌体与肌腱复合后经冻干制备而成。
[0007]所述T淋巴细胞外泌体用量为1
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)个/每g肌腱，肌腱为脱细胞肌腱和/或非脱细胞肌腱。
[0008]所述肌腱来源于人，非人灵长类动物，猪、马、牛、羊等动物。
[0009]所述肌腱经深低温冷冻处理和/或经脱细胞处理，其中深低温处理的温度低于
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20℃，脱细胞处理方法包括但不限于物理、化学和/或生物学方法。
[0010]所述调节性T淋巴细胞的表面抗原为CD4、CD25和/或Foxp3抗原，来源于人、非人灵长类动物、猪、牛、羊马等的外周血、脐带血、骨髓血或脾脏。
[0011]所述调节性T淋巴细胞外泌体膜表面表达CD4、CD25和CD73抗原，外泌体粒径介于10～500nm之间。
[0012]一种可防粘连的肌腱材料的制备方法，按照如下步骤进行：
[0013](1)去除肌腱材料的脂肪和筋膜，以75％酒精消毒后，经深低温冷冻至少4周，或经脱细胞处理后再深低温冷冻至少24h；
[0014](2)将冷冻的肌腱置于冷冻干燥机中，冻干36～72h；
[0015](3)将调节性T淋巴细胞外泌体悬浮于无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中，按1g肌腱复合1
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)个外泌体的比例，将调节性T淋巴细胞外泌体悬浮液均匀施加于冻干肌腱，4～25℃条件下静置至少2h，然后深低温冷冻至少24h；
[0016](4)将步骤(3)制备的复合调节性T淋巴细胞外泌体的肌腱置于冷冻干燥机中，冻干36～72h，即得可防粘连的肌腱。
[0017]所述深低温冷冻的温度低于
‑
20℃。
[0018]本专利技术的有益效果：Treg细胞外泌体可诱导植入肌腱组织部位的免疫耐受，解除肌腱组织植入局部的无菌性炎症反应，使得肌腱周围组织中的成纤维细胞不会过度增殖并分泌过多胶原纤维等细胞外基质。Treg细胞外泌体可减少炎性细胞浸润，减少成纤维细胞以及来自内膜的内在肌腱细胞被募集至损伤部位，避免形成无序的细胞外基质。复合Treg细胞外泌体的肌腱组织暴露于体液中，可充分获得营养物质，可加快植入腱细胞长入肌腱组织中，缩短肌腱组织再生重建的时间。Treg细胞可大规模培养，Treg细胞外泌体获取容易，Treg细胞外泌体与肌腱材料冻干后，可于冷藏条件或室温条件下长时间保存，货架有效期长，制备的肌腱材料使用方便，无需物理隔离。
附图说明
[0019]图1为Treg细胞表面抗原检测。
[0020]图2为Treg细胞外泌体形态。
[0021]图3为Treg细胞外泌体粒径分布。
[0022]图4为Treg细胞外泌体膜表面抗原表达。
[0023]图5为术后4周各组腱鞘缺损区大体观察；
[0024]图中，A：Treg
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Exos组；B:生物羊膜组；C：MSC
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Exos组；D：对照组。
[0025]图6为术后4周各组腱鞘缺损区组织学观察(HE染色，
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100)；
[0026]图中，A：Treg
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Exos组；B:生物羊膜组；C：MSC
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Exos组；D：对照组。
具体实施方式
[0027]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0028]实施例1 Treg细胞外泌体的制备
[0029](1)诱导细胞原代培养：无菌采集人外周血，密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞，按照8
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106/ml的密度加入预先使用抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可防粘连的肌腱材料，其特征在于，所述肌腱材料由调节性T淋巴细胞外泌体与肌腱组成，通过将T淋巴细胞外泌体与肌腱复合后经冻干制备而成。2.根据权利要求1所述可防粘连的肌腱材料，其特征在于，所述T淋巴细胞外泌体用量为1
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)个/每g肌腱，肌腱为脱细胞肌腱和/或非脱细胞肌腱。3.根据权利要求1所述可防粘连的肌腱材料，其特征在于，所述肌腱来源于人，非人灵长类动物、猪、马、牛、羊。4.根据权利要求1所述可防粘连的肌腱材料，其特征在于，所述肌腱经深低温冷冻处理和/或经脱细胞处理，其中深低温处理的温度低于
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20℃。5.根据权利要求1所述可防粘连的肌腱材料，其特征在于，所述调节性T淋巴细胞的表面抗原为CD4、CD25和/或Foxp3抗原，来源于人、非人灵长类动物、猪、牛、羊、马的外周血、脐带血、骨髓血或脾脏。6.根据权利要求1所述可防粘连的肌腱材料，其特征在于，所述调...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘永进，韩丽伟，胡先同，郝丽芳，赵子腾，李金，衷鸿宾，
申请(专利权)人：北京鑫康辰医学科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：