一种新型抗菌素释缓系统、制备方法及其应用技术方案

一种新型抗菌素释缓制备方法及其应用，包括固态万古霉素纳米微球PLGA

【技术实现步骤摘要】
一种新型抗菌素释缓系统、制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及领域，尤其涉及一种新型抗菌素释缓系统、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]交通事故等高能量损伤所致感染性骨缺损发病率极高，治疗十分棘手。Gafur的一份早前研究显示，由于大量的机动车交通事故、骨科手术及一些枪弹伤，骨与软组织感染性疾病的发病率明显增加，1982年至2002年期间骨髓炎发病率增加了2.8倍。Johnson的一项回顾性研究发现，所有开放性的III型战伤骨折都有感染，37％的患者骨折延迟愈合或骨缺损，在延迟愈合的患者中14％最后面临截肢。感染性骨缺损的修复仍然是目前研究的重点和难点。单纯的植骨术很可能因感染未控制而失败，因此患者往往不能进行一期植骨，而须彻底清创，待感染因素消除、伤口愈合、血运重建后再进行二期植骨修复骨缺损。此种治疗方法需多次手术，增加患者的痛苦，延长治疗时间，耗费较多的医疗资源及社会财力。
[0003]由于存在感染和骨缺损双重病变，感染性骨缺损治疗棘手,已成为困扰骨科医师的难题之一。其特点为软组织缺损、肌肉萎缩、多处窦道、骨缺损、骨外露、邻近关节僵硬、多重耐药菌感染、肢体不等长、复杂畸形等，从而导致肢体功能受到严重影响。传统治疗方法是经反复手术清创,待感染控制后二期手术植骨治疗骨不连或骨缺损,其临床治疗周期长、肢体功能障碍重、再次骨不连及感染发生率高。同时对于本病来说，治疗骨缺损的植骨时机，其把握度亦十分困难。近年来随着外固定技术、显微外科技术、生物材料技术及骨组织工程技术等的发展,感染性骨缺损的治疗取得明显进步,但是仍有其不足之处。如何寻求一种同时兼备缓释抗炎、成骨活性、骨传导作用、可降解吸收的一期治疗手段，是目前临床亟需解决的难题和挑战。

技术实现思路

[0004]为了解决上述相关领域中的不足，本专利技术提供一种新型抗菌素释缓系统、制备方法及其应用。
[0005]本专利技术的一种新型抗菌素释缓系统、制备方法及其应用是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种新型抗菌素释缓系统，包括万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统和BMSCs
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PLGA
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PTMAC支架。
[0007]进一步地，所述万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统包括盐酸万古霉素、蒸馏水、PLGA二氯甲烷溶液、2.5％PVA溶液、多孔块状PTMC。
[0008]10.进一步地，所述BMSCs
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PLGA
‑
PTMAC支架包括盐酸万古霉素、蒸馏水、PLGA二氯甲烷溶液、2.5％PVA溶液、多孔块状PTMC、第3代MSCs、DMEM
‑
F12培养液。
[0009]一种新型抗菌素释缓系统的制备方法，包括：
[0010]步骤1，制备PLGA
‑
PTMAC多孔支架；
[0011]步骤2，制备万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统；
[0012]步骤3，培养BMSCs；
[0013]步骤4，制备BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架；
[0014]步骤5，混合所得到的万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统和BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架，即得到所述新型抗菌素释缓系统。
[0015]进一步地，所述PLGA
‑
PTMAC多孔支架是通过以下步骤得到的：
[0016]取PLGA颗粒(丙交酯∶乙交酯＝75∶25，相对分子质量30
×
104)、PTMC颗粒(PLGA∶PTM C＝7∶3)溶于氯仿中，配成10％的溶液，待聚合物完全溶解后，加入直径200
‑
300μm的氯化钠颗粒，充分搅拌混匀后，超声脱泡，浇注于调平的聚四氟模具中，浇注后静置24
‑
48h，脱模后再静置24
‑
48h，然后在真空干燥箱中真空干燥24h，最后将材料置于去离子水中浸泡并不时搅动，每4
‑
6h换1次水，连续48h，取出后漓干水，空气干燥48h，真空干燥48h。
[0017]进一步地，所述万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统是通过以下方法得到的：
[0018]取一定量的盐酸万古霉素，用蒸馏水溶解作为内水相，与PLGA二氯甲烷溶液混合，超声乳化制成初乳；
[0019]将初乳快速均匀地滴加到浓度为2.5％PVA溶液20mL中，高速搅拌2min得复乳，并将其用100mL蒸馏水稀释，低速搅拌(400rpm)6h，离心水洗3次，预冻24小时，冷冻干燥24小时即可；
[0020]将多孔块状PTMC加工成直径10mm、厚3mm的圆盘状，电子分析天平称重，60钴辐照消毒备用；
[0021]按10∶1的质量比向PTMC中加入万古霉素PLGA纳米微球混悬液，真空吸附后，用冻干机进行材料的冻干，制成万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC材料，每块材料约含万古霉素0.1g，备用。
[0022]进一步地，所述BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架是通过以下方法得到的：
[0023]将PLGA
‑
PTMC多孔支架切成5mm
×
5mm
×
3mm大小的片状，浸泡于体积分数为75％的乙醇中24h，以D
‑
hank's液反复清洗去除乙醇；将培养至第3代MSCs消化、重悬后调整浓度为5
×
108/L；每支架接种100μL细胞悬液，分别放置于6孔培养板中；4h后加入DMEM
‑
F12培养液8mL，于37℃、体积分数为5％的CO2培养箱中培养，每3d更换培养液1次，共培养2周，备用。
[0024]进一步地，所述BMSCs是通过以下方法进行培养的：
[0025]取3月龄新西兰大耳白兔10只(体重约1.5
‑
2.0kg)，徒手侧身固定于桌面，于一侧坐骨结节处新洁尔灭(1：15)消毒，戴无菌手套，铺无菌洞巾，2％利多卡因由表皮至骨膜浸润麻醉，12号骨穿针刺破骨皮质有一明显突破感，用内含2ml PBS与3000u肝素的20ml注射器抽取骨髓2
‑
10mL，于超净工作台内将骨髓轻轻加于与骨髓稀释液等体积的percoll(密度为1.073g/ml)细胞分离液面上，水平离心机2500r/min离心20min，用吸管小心吸取血清与分离液之间交界面的云雾状单核细胞层，加入PBS漂洗，800r/min离心5min，共三次，弃上清，最后加入DMEM/F12(1:1)完全培养基3ml吹打重悬细胞，接种于25cm2培养瓶中，5％CO2、37℃、饱和湿度孵箱培养，48小时后更换培养基，弃除未贴壁细胞，以后每3
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型抗菌素释缓系统，其特征在于，包括固态万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统和液态BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架。2.如权利要求1所述的一种新型抗菌素释缓系统，其特征在于，所述万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统包括：盐酸万古霉素、蒸馏水、PLGA二氯甲烷溶液、2.5％PVA溶液、多孔块状PTMC。3.如权利要求1所述的一种新型抗菌素释缓系统，其特征在于，所述BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架包括：盐酸万古霉素、蒸馏水、PLGA二氯甲烷溶液、2.5％PVA溶液、多孔块状PTMC、第3代MSCs、DMEM
‑
F12培养液；。4.一种基于权利要求1
‑
3任一项所述的新型抗菌素释缓系统的制备方法，其特征在于，包括：步骤1，制备PLGA
‑
PTMAC多孔支架；步骤2，制备万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统；步骤3，培养BMSCs；步骤4，利用步骤2、3所获得的产物，经处理后制备BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架；步骤5，混合所得到的万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统和BMSCs
‑
PLGA
‑
PTMAC支架，即得到所述新型抗菌素释缓系统。5.如权利要求4所述的一种新型抗菌素缓释系统的制备方法，其特征在于，所述PLGA
‑
PTMAC多孔支架是通过以下步骤得到的：取丙交酯∶乙交酯＝3∶1，相对分子质量30
×
10
4的
PLGA颗粒、PTMC颗粒，其中二者质量比为PLGA∶PTM C＝7∶3；溶于氯仿中，配成10％的溶液，待聚合物完全溶解后，加入直径200
‑
300μm的氯化钠颗粒，充分搅拌混匀后，超声脱泡，浇注于调平的聚四氟模具中，浇注后静置24
‑
48h，脱模后再静置24
‑
48h，从而得以达到充分获得产物的目的，然后在真空干燥箱中真空干燥24h，最后将材料置于去离子水中浸泡并不时搅动，每4
‑
6h换1次水，连续48h，取出后漓干水，空气干燥48h，真空干燥48h，以上步骤能够最大化的减少杂质对于产物的影响。6.如权利要求4所述的一种新型抗菌素缓释系统的制备方法，其特征在于，所述万古霉素纳米微球PLGA
‑
PTMC缓释系统是通过以下方法得到的：取一定量的盐酸万古霉素，用蒸馏水溶解作为内水相，与PLGA二氯甲烷溶液混合，超声乳化制成初乳；万古霉素用量为100mg/kg；将初乳快速均匀地滴加到浓度为2.5％PVA溶液20mL中，高速搅拌2min得复乳，并将其用100mL蒸馏水稀释，400rpm低速搅拌6h，离心水洗3次，预冻24小时，冷冻干燥24小时，即可制得所需多孔块状PTMC；将所得多孔块状PTMC加工成直径10mm、厚3mm的圆盘状，电子分析天平称重，60钴辐照消毒备用；向PTMC中加入万古霉素PLGA纳米微球混悬液，其中PLGA纳米微球混悬液与PTMC的质量比10∶1的，真空吸附后，用冻干机进行材料的冻干，制成万古霉素纳米微球PLGA
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PTMC材料，每块材料含万古霉素0.1g，备用。7.如权利要求4所述的一种新型抗菌素缓释系统的制备方法，其特征在于，所述BMSCs
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PLGA
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵振群，龚瑜林，白锐，赵爱青，王文选，王勇，孟晨阳，姜博雍，
申请(专利权)人：赵振群，
类型：发明
国别省市：