一种蛞蝓的提取方法及其抗结直肠癌应用技术

一种蛞蝓的提取方法及其抗结直肠癌应用，包括如下步骤：称取蛞蝓，捣成碎末；蛞蝓碎末加水混合超声15min，静置24h；进行固液分离，残渣再次加水浸润10h，然后固液分离；采用0.22μm超滤器进行滤，采集滤液；冷冻干燥机内干燥，研钵研磨，蛞蝓水提物。采用以上步骤后，本发明专利技术具有如下优点：通过对蛞蝓研磨、超声混合多次的过滤再高速冷冻离心机离心，最后经过冷冻干燥机干燥研磨成粉末状，使得蛞蝓更加容易对人体吸收；采用直肠癌HCT116细胞株接种于裸小鼠，对蛞蝓进行了抗肺癌试验，通过六组试验数据，蛞蝓对人结直肠癌HCT116裸鼠移植瘤有显著的抑制生长作用，高效且毒性低。高效且毒性低。

【技术实现步骤摘要】
一种蛞蝓的提取方法及其抗结直肠癌应用


[0001]本专利技术涉及蛞蝓
，具体是指一种蛞蝓的提取方法及其抗结直肠癌应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌是全球最常见消化道恶性肿瘤之一，严重危害着人类的生命健康，据统计，全 球每年约90万人死于结直肠癌，是第四大致命癌症。结直肠癌占所有癌症诊断的11％，死 亡率更居是全球第二。在我国，男性结直肠癌的发病率和死亡率均比女性高约25％左右。年 龄、遗传和环境因素在结直肠癌的发生发展中起着重要作用，除此之外还包括肥胖、缺乏锻 炼、吸烟及长期控制不佳的慢性炎症等。针对结直肠癌的治疗多采用手术、化疗、靶向治疗 或其他综合治疗手段进行干预。药物治疗方面，无论是治疗结直肠癌的经典药物5－氟尿嘧 啶(5
‑
fluorouracil,5
‑
FU)，还是广谱抗癌药如盐酸伊立替康、环磷酰胺，均存在一定的不良反 应，依然影响患者的生活质量。近年来，随着中医药的不断发展壮大，中药成为开发抗结直 肠癌的重要来源，尤其是开发疗效好，不良反应小的药物，成为临床亟需解决的问题。
[0003]故采用有效的制药方法，制备高效、毒性低的抗结直肠癌药物成为医药研究者的重要目 标。
[0004]蛞蝓，一种对结直肠癌的抑制有特异性、毒性低的中药，对各期结直肠癌患者均有针对 性，目前对蛞蝓成分仍缺乏基础研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决上述技术问题，提供一种蛞蝓的提取方法及其抗结直肠癌应用。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：
[0007]一种蛞蝓的提取方法，包括如下步骤：
[0008]S1：称取解冻的蛞蝓1kg，捣成碎末；
[0009]S2：蛞蝓碎末加水混合超声15min，静置24h；
[0010]S3:S2步骤中的混合体进行固液分离，残渣再次加水浸润10h，然后固液分离；
[0011]S4：将S3步骤中的最终提取物，采用0.22μm超滤器进行滤，采集滤液；
[0012]S5：滤液加入到冷冻干燥机内－40℃冷冻干燥36h，干燥后获得疏松块状蛞蝓水提 物，经过研钵研磨，过2号筛，获得粒径均匀粉末状的蛞蝓水提物。
[0013]作为改进，所述的S2步骤中水和蛞蝓碎末的比例为10：1。
[0014]作为改进，包括实验动物、人癌细胞株、实验药物和实验分组，所述的实验动物选用SPF 级BALB/c
‑
nu的裸小鼠，所述的人癌细胞株为结直肠癌HCT116，所述的实验药物包括蛞蝓 水提物、复方环磷酰胺、复方斑蝥胶囊、生理盐水，所述的实验分组分为生理盐水制成的模 型对照组M、蛞蝓水提物高剂量组、蛞蝓水提物中剂量组、蛞蝓水提物低剂量组、蛞蝓水提 物和复方斑蝥胶囊组、复方环磷酰胺对照组、复方斑蝥胶囊对照组，所述的蛞蝓水提物对其 抗结直肠癌应用步骤如下：
[0015]①
：首先把结直肠癌HCT116细胞株接种于裸小鼠右前肢皮下而建立，接种量为1
ꢀ×
107；
[0016]②
：培养裸小鼠的结直肠癌HCT116，细胞培养镜下观察汇合度在90％以上后进行消化 传代、待培养足够的细胞数后，消化后用PBS与基质胶按1：1的比例稀释细胞，在无菌条 件下，每次混匀后取200μl接种于各组裸小鼠右前肢皮下；
[0017]③
：蛞蝓水提物高剂量组、蛞蝓水提物中剂量组、蛞蝓水提物低剂量组、蛞蝓水提 物和复方斑蝥胶囊组对裸小鼠每天灌胃一次，连续15天，复方环磷酰胺对照组每两天灌 胃一次，连续7天，复方斑蝥胶囊对照组每天灌胃一次，连续灌胃15天，模型对照组M 同时给予等量生理盐水，每天灌胃一次；
[0018]④
：裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤长短径，使用测量肿瘤长径a、短径b的方 法，动态观察蛞蝓抗肿瘤的效应，肿瘤长短径的测量次数为每周两次，同时称重裸小鼠 重量，第15天称重测量肿瘤长短径后，均于药后1.5小时后麻醉眼球取血，取血后完整 剥离出肿瘤组织，称瘤重，计算各组平均瘤重和肿瘤体积，计算肿瘤抑制率。
[0019]作为改进，所述的蛞蝓水提物高剂量组的含量为670mg/kg、蛞蝓水提物中剂量组的 含量为335mg/kg、蛞蝓水提物低剂量组的含量为167.5mg/kg、蛞蝓水提物和复方斑蝥胶 囊组的含量为(167.5mg+250mg)/kg、复方环磷酰胺对照组的含量为25mg/kg、复方斑 蝥胶囊对照组的含量为250mg/kg。
[0020]作为改进，所述的肿瘤体积的计算公式：1/2
×
a
×
b2，所述的肿瘤抑制率＝(模型组平均瘤 重－治疗组平均瘤重)/模型组平均瘤重
×
100％，且实验数据均以表示，由SPSS 23.0 数据处理软件进行单因素方差分析。
[0021]作为改进，所述的裸小鼠的性别为雌雄各一半。
[0022]采用以上步骤后，本专利技术具有如下优点：
[0023]1：通过对蛞蝓研磨、超声混合多次的过滤再高速冷冻离心机离心，最后经过冷冻干燥机 干燥研磨成粉末状，使得蛞蝓更加容易对人体吸收；
[0024]2：采用直肠癌HCT116细胞株接种于裸小鼠，对蛞蝓进行了抗肺癌试验，通过蛞蝓水提 物高剂量组、蛞蝓水提物中剂量组、蛞蝓水提物低剂量组、蛞蝓水提物和复方斑蝥胶囊组四 组试验数据，分别和复方环磷酰胺对照组、复方斑蝥胶囊对照组和模型对照组M，针对试验 裸小鼠进行分析直肠癌的移植瘤，蛞蝓对人结直肠癌HCT116裸鼠移植瘤有显著的抑制生长 作用，高效且成为毒性低的抗结直肠癌药物。
附图说明
[0025]无
具体实施方式
[0026]下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明。
[0027]结合上文，一种蛞蝓的提取方法，包括如下步骤：
[0028]S1：称取解冻的蛞蝓1kg，捣成碎末；
[0029]S2：蛞蝓碎末加水混合超声15min，静置24h；
[0030]S3：S2步骤中的混合体进行固液分离，残渣再次加水浸润10h，然后固液分离；
[0031]S4：将S3步骤中的最终提取物，采用0.22μm超滤器进行滤，采集滤液；
[0032]S5：滤液加入到冷冻干燥机内－40℃冷冻干燥36h，干燥后获得疏松块状蛞蝓水提 物，经过研钵研磨，过2号筛，获得粒径均匀粉末状的蛞蝓水提物。
[0033]所述的S2步骤中水和蛞蝓碎末的比例为10：1。
[0034]一种蛞蝓水提物对其抗结直肠癌应用，包括实验动物、人癌细胞株、实验药物和实 验分组，所述的实验动物选用SPF级BALB/c
‑
nu的裸小鼠，所述的人癌细胞株为结直肠 癌HCT116，所述的实验药物包括蛞蝓水提物、复方环磷酰胺、复方斑蝥胶囊、生理盐水， 所述的实验分组分为生理盐水制成的模型对照组M、蛞蝓水提物高剂量组、蛞蝓水提物 中剂量组、蛞蝓水提物低剂量组、蛞蝓水提物和复方斑蝥胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛞蝓的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：称取解冻的蛞蝓1kg，捣成碎末；S2：蛞蝓碎末加水混合超声15min，静置24h；S3:S2步骤中的混合体进行固液分离，残渣再次加水浸润10h，然后固液分离；S4：将S3步骤中的最终提取物，采用0.22μm超滤器进行滤，采集滤液；S5：滤液加入到冷冻干燥机内－40℃冷冻干燥36h，干燥后获得疏松块状蛞蝓水提物，经过研钵研磨，过2号筛，获得粒径均匀粉末状的蛞蝓水提物。2.根据权利要求1所述的一种蛞蝓的提取方法，其特征在于：所述的S2步骤中水和蛞蝓碎末的比例为10：1。3.根据权利要求1所述的一种蛞蝓水提物对其抗结直肠癌应用，其特征在于：包括实验动物、人癌细胞株、实验药物和实验分组，所述的实验动物选用SPF级BALB/c
‑
nu的裸小鼠，所述的人癌细胞株为结直肠癌HCT116，所述的实验药物包括蛞蝓水提物、复方环磷酰胺、复方斑蝥胶囊、生理盐水，所述的实验分组分为生理盐水制成的模型对照组M、蛞蝓水提物高剂量组、蛞蝓水提物中剂量组、蛞蝓水提物低剂量组、蛞蝓水提物和复方斑蝥胶囊组、复方环磷酰胺对照组、复方斑蝥胶囊对照组，所述的蛞蝓水提物对其抗结直肠癌应用步骤如下：
①
：首先把结直肠癌HCT116细胞株接种于裸小鼠右前肢皮下而建立，接种量为1
×
107；
②
：培养裸小鼠的结直肠癌HCT116，细胞培养镜下观察汇合度在90％以上后进行消化传代、待培养足够的细胞数后，消化后用PBS与基质胶按1：1的比例稀释细胞，在无菌条件下，每次混匀后取200μl接种于各组裸小鼠右前肢皮下；

【专利技术属性】
技术研发人员：张美玉，杜丹丹，陈之，薛武更，
申请(专利权)人：中国中医科学院医学实验中心，
类型：发明
国别省市：