【技术实现步骤摘要】
基于核酸外切酶Ⅰ和嵌合适配体无标记荧光检测汞离子
[0001]本专利技术属于生物传感器
，以小檗碱作为荧光探针，利用小檗碱和汞离子的嵌合适配体，通过核酸外切酶Ⅰ降低荧光信号背景，建立了无标记荧光适配体检测汞离子的生物传感方法，具有良好的特异性和灵敏度，并应用于自来水中汞离子的检测，为无标记检测汞离子提供了一种、快速、简单和低成本的新方法。
技术介绍
[0002]汞是重金属污染物中的一种，广泛存在于空气、水和土壤中。汞在自然界中存在形式多样，包括金属汞，有机汞和无机汞。无机汞中的水溶性汞离子会通过食物链富集，进入人体后，水溶性汞离子会发生甲基化作用形成甲基汞，即使很少的浓度也会对人体造成不可逆的伤害。传统汞含量检测的方法包括原子吸收光谱法，电感耦合等离子体质谱法，原子荧光光谱法，酶联免疫吸附法和高效液相色谱法等。这些方法的检出限很低，但是需要大型仪器和专业人员进行操作，检测成本较高。因此，需要开发简单、灵敏、经济的方法检测汞含量。
[0003]核酸适配体是通过配体富集系统进化(SELEX)技术在体外筛选出的寡核苷...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.基于核酸外切酶Ⅰ和嵌合适配体无标记荧光检测汞离子，其特征在于，以小檗碱作为荧光探针，利用小檗碱和汞离子的嵌合适配体，通过核酸外切酶Ⅰ降低荧光信号背景，其步骤如下：步骤一、将2μM嵌合适配体序列aacataaatattaaattatgtaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaattctttcttctttc与1.5μM互补序列gtttgttgtttgtt分别在95℃加热5min，然后快速冷却至0℃，在15℃放置20min，备用；步骤二、将10μL 2μM嵌合适配体，10μL 1.5μM互补序列，30μL不同浓度的Hg
2+
，100μL 20mM Tris
‑
HCl缓冲液60μM MgCl2，75mM NaCl，pH 7.5混匀，在25℃金属浴中反应25min，形成t
‑
Hg
2+
‑
t的错配结构；步骤三、在步骤二的反应液中加入30μL 1mM小檗碱溶液，在25℃金属浴中反应25min，使小檗碱与其适配体序列结合；步骤四、在步骤三的反应液中加入20μL核酸外切酶Ⅰ的缓冲液和0.4μL 10U/μL核酸外切酶Ⅰ，在37℃反应20min后，于80℃灭酶15min；步骤五、在步骤四的反应液中加入100μL Tris<...
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