用于诊断非小细胞肺癌的miRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于诊断非小细胞肺癌的miRNA及其应用，具体的，所述的miRNA包括hsa

【技术实现步骤摘要】
用于诊断非小细胞肺癌的miRNA及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及用于诊断非小细胞肺癌的miRNA及其应用。

技术介绍

[0002]肺癌是目前全世界癌症的头号杀手，具有高发病率和高死亡率。它是严重威胁人类生命和健康的重大疾病。肺癌被分为两大主要的临床病理类型：小细胞肺癌(占全部肺癌15％)和非小细胞肺癌(占全部肺癌的85％)。对于非小细胞肺癌，只有在疾病进展早期得到诊断的病例能够进行有效的手术切除治疗。尽管过去几十年中，肺癌的诊断、分期、外科手术治疗、研宄方面取得了重大的进步，但是考虑到五年生存率，相比乳腺癌的89％，结直肠癌的65％，以及前列腺癌的100％，肺癌的五年生存率始终保持在较低的16％。肺癌患者往往处于晚期时才被发现和确诊，丧失了最佳的治疗时机。如果能在较早时期发现肺癌的病变灶，将能有效的改善患者的预后。因此，提高肺癌患者预后的重中之重在于提高肺癌的早期诊断效率。
[0003]肺癌的发病较为隐匿，超过的病人在发现时就已经处于肺癌晚期，这就导致治疗性外科手术切除机会的大大减少，并且预后不良。这些患者在就诊时已发展至中晚期，甚至出现转移，严重影响临床治疗效果和患者的生存质量。目前，临床所使用肺癌筛查诊断方法主要是胸部射线检查、扫描等影像学技术。虽然这些影像资料对诊断起着重要作用，但也存在很多局限性，例如假阳性率高，无法检出隐性病灶、亚临床病灶和微小转移病灶。除此之外，对肺癌的诊断方法还包括支气管镜检查、穿刺活检等有创操作，这类方法耗时长，增加患者痛苦。因此，寻找无创、无福射、费用低廉、诊断快速且敏感性、特异性均高的筛查、诊断方法，是目前肺癌早期诊断的迫切需求。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是寻找一种敏感性、特异性高的诊断非小细胞肺癌的方法。
[0005]为实现该目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]本专利技术第一方面提供了一种能够检测样本中生物标志物的表达水平的试剂，所述的生物标志物包括hsa
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let
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7b和/或hsa
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miR
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25。
[0007]进一步，所述的生物标志物为hsa
‑
let
‑
7b和hsa
‑
miR
‑
25。
[0008]如本文中在诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括A和B两者；A或B；A(单独)；以及B(单独)。同样地，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。
[0009]术语“生物标志物”是指以可用于预测个体的癌症状态的不同浓度存在于个体中的生物分子。生物标志物可包括，但不限于，核酸、蛋白质及其变体和片段。生物标志物可以是包含编码该生物标志物的全部或部分核酸序列或这类序列的互补体的DNA。可用于本发
明的生物标志物核酸被认为包括包含任何目的核酸序列的全部或部分序列的DNA和RNA。
[0010]在本专利技术中，当采用生物标志物在个体中指示异常进程、疾病或其他病症或作为异常进程、疾病或其他病症的标志时，该生物标志物与在个体中指示正常进程、无疾病或其他病症或作为正常进程、无疾病或其他病症的标志的生物标志物的表达水平或值相比较，通常被描述为过表达的或低表达的。“上调”、“上调的”、“过表达”、“过表达的”和其任何变化形式互换地用来指大于在健康或正常个体中通常检测到的生物标志物的值或水平(或值或水平的范围)的生物样品中的生物标志物的值或水平。该术语还可指大于在特定疾病的不同阶段可检测到的生物标志物的值或水平(或值或水平的范围)的生物样品中的生物标志物的值或水平。
[0011]“下调”、“下调的”、“低表达”、“低表达的”和其任何变化形式互换地用来指小于在健康或正常个体中通常检测到的生物标志物的值或水平(或值或水平的范围)的生物样品中的生物标志物的值或水平。该术语还可指小于在特定疾病的不同阶段可检测到的生物标志物的值或水平(或值或水平的范围)的生物样品中的生物标志物的值或水平。
[0012]此外，与在个体中指示正常进程或无疾病或其他病症或作为正常进程或无疾病或其他病症的标记的生物标志物的“正常”表达水平或值相比较，过表达的或低表达的生物标志物还可称作“差异表达的”或称作具有“差异水平”或“差异值”。因此，生物标志物的“差异表达”还可称作标志物的“正常”表达水平的变化形式。
[0013]进一步，所述的试剂包括通过通过RT
‑
PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测样本中所述的生物标志物的表达水平的试剂。
[0014]进一步，所述的试剂包括：
[0015]特异性识别生物标志物的探针；或
[0016]特异性扩增生物标志物的引物。
[0017]在本专利技术中，术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严谨性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式包括(但不限于)：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。
[0018]“引物”是指能够互补地与模板结合并使逆转录酶或DNA聚合酶能够启动模板复制的具有自由3
’
羟基的核酸序列。引物是具有与特定基因核酸序列互补的序列的核苷酸，可以使用长度约7bp～50bp、优选约10bp～30bp的引物。其他的RT
‑
PCR试剂盒根据具体的实施方式可以包括试管或其他适合的容器、反应缓冲液、脱氧核苷酸(dNTP)、酶如Taq聚合酶和逆转录酶、DNA酶、RNA酶抑制剂、DEPC
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水、无菌水等。
[0019]本专利技术的引物或探针可以使用磷酰亚胺固相支持法或其他熟知方法化学合成。也可以使用本领域已知的许多手段修饰所述核酸序列。这些修饰的非限制性实例是甲基化、加帽、用天然核苷酸的一种或多种类似物进行的置换和在核苷酸之间的修饰，例如，修饰不带电荷的连接体(例如，磷酸甲酯、磷酸三酯、磷酰亚胺、氨基甲酸酯等)，或修饰带电荷的连接体(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)。
[0020]本专利技术第二方面提供了一种试剂盒，所述的试剂盒包含本专利技术第一方面所述的试剂。
[0021]进一步，所述的试剂盒还包含容器、使用说明书、阳性对照物、阴性对照物、缓冲剂、助剂或溶剂。
[0022]本专利技术第三方面提供了一种芯片，所述的芯片包含本专利技术第一方面所述的试剂。
[0023]所述的芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如，如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5
’
端含有氨基修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够检测样本中生物标志物的表达水平的试剂，其特征在于，所述的生物标志物包括hsa
‑
let
‑
7b和/或hsa
‑
miR
‑
25。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的生物标志物为hsa
‑
let
‑
7b和hsa
‑
miR
‑
25。3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的试剂包括通过通过RT
‑
PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测样本中所述的生物标志物的表达水平的试剂。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的试剂，其特征在于，所述的试剂包括：特异性识别生物标志物的探针；或特异性扩增生物标志物的引物。5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含权利要求1
‑
4任一项所述的试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包含容器、使用说明书、阳性对照物、阴性对照物、缓冲剂、助剂或溶剂。7.一种芯片，其特征在于，所述的芯片包含权利要求1
‑
4任一项所述的试剂。8.权利要求1
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4任一项所述的试剂、权利要求5或6所述试剂盒、或权利要求7所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张强，王新立，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：