本发明专利技术公开了一种新的血清脂质代谢物组合及其作为标志物在制备卵巢上皮癌诊断试剂盒中的用途。所述血清脂质代谢物组合包括：神经酰胺Cerd18:1/16:0，磷脂酰乙醇胺PE 16:0p_18:1和未知代谢物m/z＝633.51。该血清脂质代谢物的组合可用于卵巢上皮性癌患者的辅助诊断，具有检测成本低，重复性好，较高的灵敏度和特异性的特点。同时，该脂质代谢物组合对早期卵巢上皮性癌的诊断也有良好的效果。卵巢上皮性癌的诊断也有良好的效果。卵巢上皮性癌的诊断也有良好的效果。
【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断卵巢上皮癌的血清脂质标志物组合物及试剂盒和其与应用
[0001]本专利技术涉及一种新的血清联合标志物在上皮性卵巢癌诊断中的应用。它属于分析化学、临床医学和医学领域。
技术介绍
[0002]卵巢癌是世界上发病率仅次于宫颈癌，子宫内膜癌和子宫体癌的妇科恶性肿瘤，但其死亡率却居于第一位(文献1：Amilcar Bet al.，Endometriosis-associated ovarian cancer，International Journal of Gynecological Cancer 28.7(2018)1251-1257.)。近年来，卵巢癌的发病率逐年提升，并且发病年龄有年轻化的趋势。卵巢癌具有多种亚型，其中卵巢上皮性癌占卵巢恶性肿瘤85％～90％(文献2：Williams et al.，Disease Etiology,Treatment,Detection,and Investigational Gene,Metabolite,and Protein Biomarkers，Journal of Proteome Research 6.8(2007)2936-2962.)。卵巢上皮性癌的发病机制至今尚未完全明确，且疾病早期特异性症状缺乏，导致大部分卵巢上皮癌患者首次诊断时已处于晚期。研究表明，Ⅲ，Ⅳ期EOC患者5年相对生存率仅为15％～45％，而Ⅰ期卵巢癌的5年相对生存率可达90％(文献3：Hensleyet al.，A step forward for two-step screening for ovarian cancer，Journal of Clinical Oncology 28.13(2010)2128-2130.)，因此，寻找早期诊断卵巢癌的方法或标记物，确定肿瘤分型、分期及预后评估是提高卵巢上皮癌患者五年生存率的研究重点。然而，目前基于阴道超声和血清癌抗原125水平的肿瘤筛查仍具有较高的误诊率(文献4：Screening for Ovarian Cancer:U.S.Preventive Services Task Force Reaffirmation Recommendation Statement，Annals of Internal Medicine 157.12(2012))，而其他报道的包括抗原抗体类，激素类，酶类和肽类等潜在卵巢癌生物标志物缺乏大规模样本验证，尚不能应用于临床卵巢上皮性癌的早期检测。临床迫切需要应用代谢生物标志物对高危人群早期卵巢上皮性癌进行检测。
[0003]脂质代谢紊乱是肿瘤发生的特征之一，脂质组学是研究病理变化和筛选疾病诊断生物标志物的一个有前途的工具。前人研究表明，卵巢癌患者也存在一定的脂质代谢紊乱。研究表明甘油磷脂、鞘磷脂、神经酰胺和三酰甘油酯等脂质类别在卵巢癌中有显著变化(文献5：Yan Houetal.，Differential plasma lipids profiling and lipid signatures as biomarkers in the early diagnosis of ovarian carcinoma using UPLC-MS，Metabolomics 12.2(2016)18；文献6；Braicu et al.，High-grade ovarian serous carcinoma patients exhibit profound alterations in lipid metabolism，Oncotarget 8.61(2017)102912-102922.；文献7：Zhaoetal.，High resolution mass spectrometry coupled with multivariate data analysis revealing plasma lipidomic alteration in ovarian cancer in Asian women，Talanta the International Journal of Pure&Applied Analytical Chemistry(2016))。然而，很少有
研究发现合适的生物标志物可用于卵巢癌诊断的临床试验。对卵巢上皮性癌患者的脂质组学研究和标志物筛查的研究不足，仍需进行全面深入的研究。
[0004]本专利技术利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术对卵巢上皮性癌患者，其中包括女性健康对照，良性卵巢癌患者及卵巢上皮癌患者(含早期卵巢上皮癌患者)的血清进行非靶向脂质组学分析。应用二元逻辑回归的分析方法，筛选出区分卵巢上皮性癌与非卵巢上皮性癌患者(良性卵巢癌患者+女性健康对照)的潜在组合生物标志物，包括神经酰胺Cer d18:1/16:0，磷脂酰乙醇胺PE 16:0p_18:1和未知代谢物m/z＝633.5074，该组合标志物可以有效诊断受试者中卵巢上皮性癌，且对早期卵巢上皮性癌诊断也有较好的效果。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是针对卵巢癌，尤其是卵巢上皮性癌，包括早期卵巢上皮性癌诊断的临床实际问题，提供一种可用于卵巢上皮性癌诊断的新型脂质代谢物联合生物标志物，并提供可用于上述组合的脂质代谢物的分析检测方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007](1)利用高效液相色谱-质谱联用的脂质组学技术对卵巢上皮性癌患者，其中包括女性健康对照，良性卵巢癌患者及卵巢上皮癌患者(含早期卵巢上皮癌患者)的血清进行了脂质组学分析。
[0008]基于超高效液相色谱质谱的脂质组学分析方法如下：
[0009]液相色谱条件：脂质分离系统为Waters ACQUITY超高效液相色谱系统(UPLC)(Waters，Milford，MA)，采用反相BEH-C8色谱柱(2.1
×
100mm，1.7μm，Waters，Milford，m A，U S.A.)。流速设定为0.30mL/min。柱温和样品室温度分别设定为55℃和10℃。洗脱溶液为：流动相A：乙腈/水＝6:4(v/v)；流动相B：异丙醇/水＝9:1(v/v)，流动相A、B中皆含10mmol/L乙酸铵。
[0010]质谱条件：质谱仪为AB SCIEX Triple TOF 5600系统(AB SCIEX，Framingham，MA)。分别采用电喷雾电离正负离子模式检测，扫描范围：m/z150-1600。质谱仪的工作参数如下：离子喷射电压5500v(ESI
±
)；去聚电压100v(ESI
±
)；碰撞能10v(ESI
±
)；界面加热器温度500℃(ESI
±
)。脂质代谢物的定量：用各脂质代谢物在色谱中的峰面积除以相应内标的峰面积得到每种代谢物的相对浓度值。其中神经酰胺Cer d18:1/16:0对应的内标是神经酰胺Cer d18:1/17:0，磷脂酰乙醇胺PE 16:0p_18:1对应的内标是磷脂酰乙醇胺PE15本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.血清脂质代谢物组合物，其中所述血清脂质代谢物组合包括：神经酰胺Cer d18:1/16:0，磷脂酰乙醇胺PE 16:0p_18:1和未知代谢物m/z＝633.51。2.根据权利要求1所述的血清脂质代谢物组合物，未知代谢物m/z＝633.51的获取过程为，(1)人血清样本的预处理：取40μL血清样本，加入300μL含内标0.17μg/mL神经酰胺Cer d18:1/17:0，0.67μg/mL磷脂酰乙醇胺PE 15:0/15:0和0.33μg/mL溶血磷脂酰胆碱19:0的甲醇溶液，然后旋转1分钟，再加入1mL甲基叔丁基醚，以充分提取脂质；之后加入300μL水，获得混合物，进行相分离，将混合物在10000g，4℃条件下离心10分钟；然后移取上清液，并分成两等份(每份400μL)，冷冻干燥；在LC-MS脂质组分分析之前，冻干样品在40μL的CH2Cl2/MeOH(2:1，v/v)的混合溶剂中重新溶解，并进一步用160μL含有5mM醋酸铵的ACN/IPA/H2O(65:30:5，v/v/v)稀释后在负离子模式下进样分析。然后取80μL负离子模式下的进样溶液，再加入80μL的含有5mM醋酸铵的ACN/IPA/H2O(65:30:5，v/v/v)的稀释剂，然后再在正离子模式下进样分析；(2)液相色谱条件：采用反相BEH-C8色谱柱，流速设定为0.30mL/min；柱温和样品室温度分别设定为55℃和10℃；洗脱溶液为：流动相A，乙腈/水＝6:4(v/v)；流动相B，异丙醇/水＝9:1(v/v)，流动相A、B中皆含终浓度为10mmol/L的乙酸铵；具体洗脱程序为：洗脱梯度起始于50％B(v/v)，维持1.5分钟后在7.5分钟内线性升至85％B，在0.1分钟内线性升至100％B，维持2分钟然后回到初始比例50％B平衡2分钟；收集1.15-1.30分钟的色谱流出组分，即为未知代谢物m/z＝633.51。3.一种诊断受试者或患者中卵巢上皮性癌的诊断试剂盒或诊断试剂，所述试剂盒或诊断试剂包括含有内标的提取溶液：提取溶液是包含内标0.17μg/mL神经酰胺Cer d18:1/17:0，0.67μg/mL磷脂酰乙醇胺PE 15:0/15:0和0.33μg/mL溶血磷脂酰胆碱19:0的甲醇溶液，甲基叔丁基醚及超纯水。4.根据权利要求3所述的诊断试剂盒或诊断试剂，还包括洗脱液，为：流动A相体积比为7:3-5:5乙腈/水溶液，流动B相体积比为9:1-...
【专利技术属性】
技术研发人员：许国旺，王宇婷，刘心昱，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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