一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及检测制剂技术领域，尤其涉及一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法。所述检测粉剂由以下原料组成：粘附肽、链霉亲和素荧光素复合物、冻干保护剂、C2～C4的醇溶液、渗透剂、稳定剂、抗猝灭剂，所述C2～C4的醇溶液浓度为95％～98％。本发明专利技术通过使用叔丁醇溶液为整体的溶液，叔丁醇性质较为稳定，避免在冻干过程中产生杂质，从而影响荧光试剂的使用效果；其次，产品中含水量较低，有利于长期存放保存。有利于长期存放保存。

【技术实现步骤摘要】
一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及检测制剂
，尤其涉及一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]荧光检测法是一种已有较多应用的快速检测真菌方法。市场上流通的荧光检测真菌试剂盒，主要成分为荧光试剂、促溶剂和背景染料。目前常用的荧光试剂为Calfluor White(CFW),能与真菌细胞壁内的几丁质成分结合，在紫外的激发下发生蓝色荧光。但CFW特异性结合能力较差，可以与大部分真菌结合，需要另外人工判断菌属，同时淬灭时间短，能使背景组织发出明亮的荧光，影响真菌与背景的判断。所以CFW一般需要联合背景染料以去除背景干扰，利用促溶剂分解待测样品角质层。后来市场上出现利用重组几丁质酶标联的荧光素试剂盒检测真菌，此类方法提高了特异性和稳定性，但是生物酶较容易失活不易保存，而且几丁质酶检测法是广谱真菌检测方法，不能特异性识别白念珠菌。
[0003]其次，现有的的荧光检测试剂均为溶液形式，使用和存储过程容易发生降解，同时溶液形式的检测试剂也不适应长途运输，溶液剂比粉剂重量大，从而增了运输成本及风险。因此，将溶液剂制备成冻干粉剂可以有效解决上述问题，但是，现有的荧光检测液的冻干粉剂的制备存在几个方面的不足：冻干工艺不够成熟，在实际大规模冻干过程中，冻干粉剂合格率不高，对生产成本产生重要影响；2.冻干粉剂中水分难以去除，结构容易塌陷萎缩；3.冻干周期长，使得实际冻干产能较低，能耗过大。
[0004]基于上述情况，本专利技术提出了一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法，可有效解决以上问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种白色念珠菌检测粉剂，所述检测粉剂由以下原料组成：粘附肽、链霉亲和素荧光素复合物、冻干保护剂、C2～C4的醇溶液、渗透剂、稳定剂、抗猝灭剂，所述C2～C4的醇溶液浓度为95％～98％。
[0007]优选地，所述冻干保护剂包括蔗糖、麦芽糊精、乳糖、β
‑
环糊精、食盐、淀粉的其中一种或两种以上的组合。
[0008]优选地，所述冻干保护剂为β
‑
环糊精。
[0009]优选地，所述C2或C4的醇溶液包括乙醇溶液、正丁醇溶液，异丁醇溶液，仲丁醇溶液，叔丁醇溶液的其中一种。
[0010]优选地，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明异硫氰酸中的其中一种。
[0011]优选地，所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺中的其中一种。
[0012]优选地，所述稳定剂为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠中的至少一种。
[0013]优选地，所述抗淬灭剂为丙三醇、抗坏血酸中的至少一种。
[0014]优选地，所述检测粉剂由以下重量份的原料组成：粘附肽5～15份、链霉亲和素异硫氰酸荧光素复合物80～90份、β
‑
环糊精200～400份、98％叔丁醇溶液1000～1400份、二甲基乙酰胺200～300份、磷酸二氢钾120～160份、丙三醇50～150份。
[0015]本专利技术还提供一种白色念珠菌检测粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0016](1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育30～40min，得到复合物的叔丁醇溶液；
[0017](2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β
‑
环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置1～2h，去除不溶物，得到预冻液；
[0018](3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至5℃～
‑
10℃，并在该温度区间维持30～40min；
[0019](4)冻结及降压：在半小时内降温至
‑
15℃～
‑
25℃，并在该温度区间维持30～40min，随后调整真空度为5～10Pa，维持2～2.5h；
[0020](5)升华：升温至
‑
5℃～
‑
10℃，并在该温度区间维持2.5～3h；随后调整真空度为25～30Pa，维持2.5～3h；
[0021](6)解析干燥：升温至20～25℃，调整真空度至15～20Pa，维持2～2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0023]1.本专利技术通过使用叔丁醇溶液为整体的溶液，叔丁醇性质较为稳定，避免在冻干过程中产生杂质，从而影响荧光试剂的使用效果；其次，产品中含水量较低，有利于长期存放保存。
[0024]2.本专利技术通过使用β
‑
环糊精作为冻干保护剂，相较于使用蔗糖作为保护剂，能大大加快产品的重新形成溶液剂的速度，且冻干效果好，成型率高。
[0025]3.本专利技术原材料在国内充足，价格适宜，使其规模化生产没有太高的成本限制；同时，制备方法简单，总体生产成本不高，有利于工业的大规模生产。
具体实施方式
[0026]实施例1
[0027]按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
[0028](1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育30min，得到复合物的叔丁醇溶液；
[0029](2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β
‑
环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置1h，去除不溶物，得到预冻液；
[0030](3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至5℃，并在该温度区间维持40min；
[0031](4)冻结及降压：在半小时内降温至
‑
15℃，并在该温度区间维持40min，随后调整真空度为5Pa，维持2.5h；
[0032](5)升华：升温至
‑
5℃，并在该温度区间维持2.5h；随后调整真空度为25Pa，维持3h；
[0033](6)解析干燥：升温至20℃，调整真空度至15Pa，维持2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
[0034]实施例2
[0035]按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
[0036](1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育40min，得到复合物的叔丁醇溶液；
[0037](2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β
‑
环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置2h，去除不溶物，得到预冻液；
[0038](3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至
‑
10℃，并在该温度区间维持30min；
[0039](4)冻结及降压：在半小时内降温至
‑
25℃，并在该温度区间维持30min，随后调整真空度为10Pa，维持2h；
[0040](5)升华：升温至
‑
10℃，并在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述检测粉剂由以下原料组成：粘附肽、链霉亲和素荧光素复合物、冻干保护剂、C2～C4的醇溶液、渗透剂、稳定剂、抗猝灭剂，所述C2～C4的醇溶液浓度为95％～98％。2.根据权利要求1所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述冻干保护剂包括蔗糖、麦芽糊精、乳糖、β
‑
环糊精、食盐、淀粉的其中一种或两种以上的组合。3.根据权利要求2所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述冻干保护剂为β
‑
环糊精。4.根据权利要求1所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述C2或C4的醇溶液包括乙醇溶液、正丁醇溶液，异丁醇溶液，仲丁醇溶液，叔丁醇溶液的其中一种。5.根据权利要求1所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明异硫氰酸中的其中一种。6.根据权利要求1所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺中的其中一种。7.根据权利要求1所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述稳定剂为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠中的至少一种。8.根据权利要求1所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述抗淬灭剂为丙三醇、抗坏血酸中的至少一种。9.根据权利要求1
‑
8所述的白色念珠菌检测粉剂，其特征在于，所述检测粉剂由以下重量份的原料组成：粘附肽5～15份、链霉亲...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈强，
申请(专利权)人：湖北思欧维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：