一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法技术

一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，包括如下步骤：步骤一：将赭曲霉毒素A含量分别为1

【技术实现步骤摘要】
一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法


[0001]本专利技术属于葡萄中赭曲霉毒素A领域，具体地说是一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法。

技术介绍

[0002]赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是由多种曲霉属和青霉属真菌产生的一种次级代谢产物，主要污染粮谷类农作物，在多种粮食及制品中都检出过赭曲霉毒素A。人和动物进食被赭曲霉毒素A污染的食物后，会导致体内赭曲霉毒素A的蓄积，而且代谢缓慢。赭曲霉毒素A主要危及人和动物肾脏，具有高度致癌、致畸、致突变的作用，并被认为与人类的巴尔干肾病和泌尿系统肿瘤有关，国际癌症研究机构已将其定位2B类致癌物。联合国粮农组织和世界卫生组织建议赭曲霉毒素A的周摄入量不超过100ng/kg体重，我国目前还没有关于人群赭曲霉毒素A膳食摄入量的评价研究，但食品安全国家标准规定了谷物等粮食及制品中赭曲霉毒素A的限量标准为5ug/kg。现有赭曲霉毒素A的国标检测中有关于葡萄酒的相关标准，但是对于葡萄中的赭曲霉毒素A的检测方法缺少相关统一标准，目前我方培育出的葡萄品种在送样到山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所进行检测分析时，对于葡萄中赭曲霉毒素A的检测方法采用的是检测辣椒中赭曲霉毒素A的国标检测方法，但是葡萄和辣椒中的成分存在巨大差异，葡萄采用辣椒检测的前处理方式以及检测方法能会出现误差，影响最终检测结果的准确性。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，用以解决现有技术中的缺陷。
[0004]本专利技术通过以下技术方案予以实现：
[0005]一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，包括如下步骤：
[0006]步骤一：将赭曲霉毒素A含量分别为1
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100μg/kg的空白样品，进行液相色谱检测；
[0007]步骤二：以空白样品中赭曲霉毒素A的浓度(x,μg/kg)为横坐标，对应色谱峰峰面积(y)为纵坐标，绘制基质标准工作曲线，进行回归计算，其线性方程为y＝0.1621x+0.3173，线性范围为1
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100μg/kg，线性相关系数r为0.9994；
[0008]步骤三：取待测葡萄样品进行液相色谱检测，将待测葡萄样品检测后得到的赭曲霉毒素A的色谱峰面积代入回归方程，得到样品中赭曲霉毒素A的浓度。
[0009]如上所述的一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，所述的步骤一和步骤三中的液相色谱检测具体操作包括如下步骤：
[0010]步骤一：将葡萄样品破碎，称取10.0g破碎后的葡萄样品置于50mL离心管，加入10mL乙腈甲酸混合溶液，手动震荡1min，再依次加入1.0g氯化钠、4.0g无水硫酸镁，手动震荡1min，然后在8000r/min的离心速度下离心处理5min，取1mL上清液移入另一装有150mg无水硫酸镁和80mg石墨粉的2mL离心管中，手动震荡1min，然后再12000r/min的离心速度下离
心处理5min，用带有过滤器的1mL注射器抽取上清液过滤，得待检测液；
[0011]步骤二：待检测液进行HPLC检测，HPLC检测条件为：色谱柱为：3.0mm
×
150mm，2.7μm的Poroshell120 EC
‑
C
18
色谱柱；流动相：流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈，采用梯度洗脱；柱温：30℃；进样量：10μL；检测器：FLD；激发波长Ex：334nm；发射波长Em：460nm。
[0012]如上所述的一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，所述的步骤一中乙腈甲酸混合溶液中乙腈和甲酸的体积比为99：1。
[0013]如上所述的一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，所述的步骤一种的过滤器中的滤膜为0.22μm滤膜。
[0014]如上所述的一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，所述的步骤二梯度洗脱的操作为：0
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5min：流动相A：50％，流动相B：50％，流量为0.5mL/min；5
‑
10min：流动相A：30％，流动相B：70％，流量为0.5mL/min；10
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15min：流动相A：10％，流动相B：90％，流量为0.5mL/min；15
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18min：流动相A：50％，流动相B：50％，流量为0.5mL/min。
[0015]如上所述的一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，标准储备液：所述的取赭曲霉毒素A标准品1.0mg置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为100mg
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L
‑1的赭曲霉毒素A标准溶液，4℃下避光保存。
[0016]如上所述的一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，所述的空白样品的选取：选取健康的阳光玫瑰葡萄作为空白样品，经检测该样品中无待测样品，使用此空白样品进行加标回收试验和基质标准工作曲线的绘制。
[0017]本专利技术的优点是：本专利技术通过对葡萄破碎后的处理方法以及对液相色谱条件的摸索，选择效果优异且价格相对低廉的石墨粉作为净化材料，并摸索出相应的液相色谱条件，并通过采用基质标准工作曲线定量的方式，消除了基质效应的影响，最终得出能够准确检测出葡萄中赭曲霉毒素A方法，从而填补了现有领域的空白，为以后葡萄中赭曲霉毒素A的准确检测提供了方法。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1是本专利技术实施例的样品测定色谱图；
[0020]图2是本专利技术实施例的提取溶剂的优化选择对比图；
[0021]图3是本专利技术实施例的提取溶剂的优化选择对比图；
[0022]图4是本专利技术实施例的提取溶剂的优化选择对比图；
[0023]图5是本专利技术绘制的基质标准工作曲线。
具体实施方式
[0024]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员
在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]实施例
[0026]1.1主要材料与设备
[0027]Agilent1260 InfinityⅡ液相色谱仪及工作站，配备真空脱气装置，二元泵，自动进样装置，柱温箱及荧光检测器(美国安捷伦公司)，Centrifuge 5424R离心机(德国艾本德本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以石墨粉为净化材料的检测葡萄中赭曲霉毒素A的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一：将赭曲霉毒素A含量分别为1
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100μg/kg的空白样品，进行液相色谱检测；步骤二：以空白样品中赭曲霉毒素A的浓度(x,μg/kg)为横坐标，对应色谱峰峰面积(y)为纵坐标，绘制基质标准工作曲线，进行回归计算，其线性方程为y＝0.1621x+0.3173，线性范围为1
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100μg/kg，线性相关系数r为0.9994；步骤三：取待测葡萄样品进行液相色谱检测，将待测葡萄样品检测后得到的赭曲霉毒素A的色谱峰面积代入回归方程，得到样品中赭曲霉毒素A的浓度；所述的步骤一和步骤三中的液相色谱检测具体操作包括如下步骤：步骤一：将葡萄样品破碎，称取10.0g破碎后的葡萄样品置于50mL离心管，加入10mL乙腈甲酸混合溶液，手动震荡1min，再依次加入1.0g氯化钠、4.0g无水硫酸镁，手动震荡1min，然后在8000r/min的离心速度下离心处理5min，取1mL上清液移入另一装有150mg无水硫酸镁和80mg石墨粉的2mL离心管中，手动震荡1min，然后再12000r/min的离心速度下离心处理5min，用带有过滤器的1mL注射器抽取上清液过滤，得待检测液；步骤二：待检测液进行HPLC检测，HPLC检测条件为：色谱柱为：3.0mm
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150mm，2.7μm的Poroshell120 EC
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色谱柱；流动相：流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈，采用梯度洗脱；柱温：30℃；进样量：10μL；检...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭亚芸，史红梅，高欢欢，王哲，梁红敏，高德艳，
申请(专利权)人：山东省葡萄研究院，
类型：发明
国别省市：