银杏叶提取物在制备靶向衰老细胞、抑制肿瘤或延长寿命的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了银杏叶提取物(GLE)在制备靶向衰老细胞、抑制肿瘤或延长寿命的药物中的应用。本发明专利技术人致力于研究筛选靶向作用于肿瘤微环境及有助于增强化疗药物抑瘤效果、清除衰老细胞或抑制细胞衰老的药物，在此揭示了银杏叶提取物通过靶向作用于肿瘤微环境、清除衰老细胞，在与化疗药物联合应用后，可以通过清除衰老的基质细胞而促进肿瘤的抑制，促进效果极其显著。对于衰老相关分泌表型(SASP)，所述GLE也能靶向清除其中的衰老细胞，从而抑制该SASP。并且，所述GLE还能显著延长动物寿命，显著延长老年生存期，提高动物生存质量。提高动物生存质量。

【技术实现步骤摘要】
银杏叶提取物在制备靶向衰老细胞、抑制肿瘤或延长寿命的药物中的应用


[0001]本专利技术属于细胞生物学和肿瘤学领域；本专利技术人致力于研究筛选靶向作用于肿瘤微环境及有助于增强化疗药物抑瘤效果、清除衰老细胞或抑制细胞衰老的药物，在此揭示了银杏叶提取物在制备抑制细胞衰老、抑制肿瘤或延长寿命的药物中的应用。

技术介绍

[0002]细胞衰老是指真核细胞的一种相对稳定且通常不可逆的细胞周期停滞的状态，在这种状态下增殖细胞会对促生长刺激产生耐受，通常由DNA损伤等胁迫性信号所引起。细胞的复制性衰老，是指正常细胞在大约30
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50次分裂(即“Hayflick极限”)后会停止连续分裂。复制性衰老本质上由端粒渐进缩短所诱导。在每一轮的DNA复制中，端粒都会逐渐缩短，最终达到一个临界长度，阻止进一步复制，从而停止细胞分裂。较短的无帽端粒会引起DNA损伤应答，从而直接触发衰老。
[0003]衰老细胞主要通过三种途径参与机体的各种生理和病理过程：(1)衰老细胞基因表达和形态改变逐步累积可影响相应组织的功能；(2)衰老细胞限制干细胞和未分化祖细胞的再生潜能，导致细胞再生能力下降；(3)衰老细胞不仅表现为生长周期停滞，还通过自分泌和旁分泌途径释放大量的细胞因子、趋化因子、生长因子和蛋白酶等，影响邻近细胞和组织的微环境，导致和加速衰老及相关疾病，近年大量研究表明在这一过程中SASP起到核心的病理作用。此外，衰老细胞分泌的这些因子还会影响周围的正常细胞，而抑制SASP则能够延缓机体衰老。典型的SASP因子包括肿瘤坏死因子<br/>‑
α(TNF
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α)、白细胞介素6(IL
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6)、白细胞介素8(IL
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8)、白细胞介素1a(IL
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1a)、基质金属蛋白酶(MMP)、粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)和纤溶酶原激活物抑制因子
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1(PAI1)等，这些因子促进免疫系统激活，导致组织微环境中衰老细胞等异常因素被机体清除，发挥肿瘤抑制功能。然而，十分矛盾的是，SASP尚可通过特定分泌因子(如VEGF，ANGPTL4)促进血管生成、细胞外基质重塑或上皮
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间质转化(EMT)的因子来促进肿瘤发展。此外，衰老诱导的慢性炎症可引起系统性免疫抑制，这种慢性炎症还可促进衰老相关的组织损伤和变性、器官功能失调和癌症等多种衰老相关疾病的发生和发展。
[0004]表观遗传学近年在SASP研究领域取得不少进展。Sirtuins是一种代谢相关、NADH依赖的去乙酰化酶，在不同模型中已发现SIRT1有寿命延长的效应。衰老细胞中SIRT1通过脱乙酰化IL
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6和IL
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8启动子区组蛋白H3K9和H4K16实现对SASP因子的表达抑制，当敲除SIRT1后，细胞衰老期间这些区域乙酰化水平高于对照组细胞。microRNAs是一类高度保守的单链非编码RNA，长度大约为20～26个核苷酸，在真核细胞中调节基因的表达。研究结果表明，miR
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146、miR
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34、miR
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21和miR
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183等可以调节衰老细胞SASP，并能够有效地抑制炎性细胞因子的过度生成。miR
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146a/b可以降低人脐静脉内皮细胞中IL
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1受体相关激酶的产生；相反抑制miR
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146a/b可以提高IL
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1受体相关激酶的活性，激活转录因子NF
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κB，诱导IL
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6和IL
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8产生。
[0005]表观遗传改变通过影响DNA损伤修复、端粒长度和代谢途径或激活衰老相关基因和miRNAs的表达而影响衰老。多种证据表明染色质状态的改变与细胞衰老的控制密切相关。细胞可以感觉到不同的衰老刺激，这些刺激会激活信号通路，驱动染色质状态的改变。然而，衰老信号引起这种改变的途径仍然很大程度上是未知的。因此，从表观遗传角度揭示细胞衰老及其特定表型发生发展的调控机制，从进而揭示具有靶向价值的关键分子及其信号通路，是将来衰老生物学和老年医学的一个新兴方向，亟需深入开展相关探索，为临床医学提供重要科学依据和潜在的干预措施。
[0006]随着全球人口老龄化的日益加剧，人们对“主动健康、延缓衰老”的兴趣与日俱增，主要是基于一系列靶向衰老的基本机制可以延缓多种衰老相关慢性或非传染性疾病的发生或加剧的科学证据。因此，细胞衰老作为预防或治疗多种衰老相关疾病和提高健康寿命的潜在靶点已获得诸多关注。
[0007]延缓衰老的药物主要是通过短暂性阻断生存途径(衰老细胞抗凋亡途径SCAPs)选择性清除衰老细胞，该生存途径可保护衰老细胞免受环境中凋亡诱导信号的调控。临床前研究表明有一类药物，即Senolytics有望将来应用于延缓、预防或治疗多种衰老相关的疾病。
[0008]尽管越来越多的实验支持靶向细胞衰老可以同时治疗多种衰老相关疾病，但还有待严谨的人体临床试验以帮助人们更好地评估延缓衰老药物的益处和风险。尽管国际已知的多种SASP抑制剂均可显著减弱SASP，但本质上不会杀死衰老细胞。为了在药理学上减轻衰老细胞的负担，科学家们正在开发“Senolytics”(衰老细胞清除药物)这种性质的小分子、多肽和抗体来选择性地清除衰老细胞。研究者们自2015年发现senolytic药物以来，在鉴别其他小分子senolytic药物及其作用方面取得了相当大的进展。研究发现首个senolytic药物的文章是基于衰老细胞抵抗凋亡的假说，尽管衰老细胞会产生促凋亡SASP因子来触发自身死亡。
[0009]事实上，有研究表明在衰老细胞中促凋亡途径确实上调。因此，衰老细胞依赖于衰老相关的抗凋亡途径(SCAPs)来减轻SASP对自身的伤害，这一假说得到了验证。SCAPs是通过生物信息学方法(基于辐射诱导衰老的人前脂肪细胞的表达谱)来鉴定的。有研究通过体外RNA干扰实验发现衰老细胞对SCAPs具有依赖性，并将SCAPs确认为衰老细胞的致命弱点。这一研究发现最终促成了SCAP网络中潜在的senolytic靶点的发现以及第一种senolytic药物的发现，其中senolytic药物包括达沙替尼(dasatinib)(一种FDA批准的酪氨酸激酶抑制剂)和槲皮素(quercetin)(一种存在于许多水果和蔬菜中的黄烷醇)的组合(D+Q)。此外，有研究将BCL
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2家族中一种对抗凋亡的蛋白(BCL
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XL)鉴定为SASP组分。在这一发现之后，第三种senolytic药物navitoclax也被鉴定出来，它是一种BCL
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2家族抑制剂。
[0010]衰老细胞存活所需的SCAP在细胞类型之间有所不同。例如，衰老的人类原代脂肪祖细胞存活所需的SCAPs与衰老的人类胚胎静脉内皮细胞(HUVECs)中的SCAPs不同。这本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.银杏叶提取物的应用，用于与化疗药物联合制备特异性靶向清除肿瘤微环境中衰老细胞及抑制肿瘤的组合物；其中，所述的化疗药物为给药后诱发肿瘤微环境发生衰老相关分泌表型的化疗药物。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为在基因毒药物处理后肿瘤微环境中产生衰老相关分泌表型的肿瘤，和/或为在基因毒药物后产生耐药性的肿瘤；较佳地，所述的肿瘤包括：前列腺癌，乳腺癌，肺癌，结直肠癌，胃癌，肝癌，胰腺癌，膀胱癌，皮肤癌，肾癌，食管癌、胆管癌、脑癌；或所述衰老相关分泌表型为DNA损伤导致的衰老相关分泌表型；较佳地，所述的DNA损伤为化疗药物造成的DNA损伤。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的化疗药物为基因毒药物；更佳地包括：米托蒽醌，阿霉素，博莱霉素。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述化疗药物为米托蒽醌，米托蒽醌与银杏叶提取物的重量比例为1:20～80；较佳地，米托蒽醌与银杏叶提取物的重量比例为1:30～70；更佳地，米托蒽醌与银杏叶提取物的重量比例为1:40～60；或所述化疗药物为博莱霉素，博莱霉素终浓度30～70ug/mL，较佳地40～60ug/mL更佳地45～55ug/mL；且银杏叶提取物终浓度200～550uM，较佳地250～500uM，更佳地300～420uM；或所述化疗药物为博莱霉素，博莱霉素终浓度30～70ug/mL，较佳地40～60ug/mL更佳地45～55ug/mL；且银杏叶提取物终浓度700～5000uM，较佳地750～4000uM，更佳地750～3500uM；所述化疗药物为阿霉素，阿霉素与银杏叶提取物的重量比例为1:4～16；较佳地，阿霉素与银杏叶提取物的重量比例为1:6～14；更佳地，阿霉素与银杏叶提取物的重量比例为1:8～12。5.银杏叶提取物的应用，用于：制备抑制衰老的组合物；或制备延长寿命或延长晚年生存期的组合物；或制备特异性靶向清除肿瘤微环境中衰老细胞的组合物，或制备抑制衰老相关分泌表型的组合物；较佳地，所述银杏叶提取物特异性靶向诱导肿瘤微环境中衰老细胞进入死亡程序。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，银杏叶提取物的浓度为200～5000uM；较佳地250～4000uM；更佳地300～3500uM；和/或所述银杏叶提取物的制备方法包括两步提取法：(1)混合酶催化酶解；(2)有机溶剂萃取；较佳地，(1)中，所述的酶包括纤维素酶、果胶酶、木质素酶和蛋白酶，银杏叶粉碎后混悬在水中，加入混合酶制剂进行8～20小时充分酶解，过滤后得到酶解物；较佳地，(2)中，将所述酶解物与乙醇溶液混合后加热回流、提取；较佳地，步骤(2)之后，还包括：对提取物经过基于膜分离技术的超滤浓缩纯化，再经低温真空浓缩，得到银杏叶提取物终产品。7.一种用于特异性靶向清除肿瘤微环境中衰老细胞以及抑制肿瘤的药物组合物或药盒，包括：银杏叶提取物，以及化疗药物；其中，所述的化疗药物为给药后诱发肿瘤微...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书二一页序列表五页附图一八页，
申请(专利权)人：汤臣倍健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：