一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK及其应用，属于肿瘤诊断技术领域，其核苷酸序列如图1所示，为POLK mRNA第1

【技术实现步骤摘要】
一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK及其应用


[0001]本申请涉及肿瘤诊断
，尤其涉及一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK及其应用。

技术介绍

[0002]DNA聚合酶kappa(POLK)是参与跨损伤DNA合成(TLS)的特殊的DNA聚合酶，属于Y家族DNA聚合酶的一种。POLK基因位于5号染色体长臂l区3带3亚带(5q13.3)，全长87.5kb，编码具有870个氨基酸的蛋白Polk。POLK通过系列的调控机制使DNA在损伤的情况下复制，以维持基因组的完整性，同时通过单键及双键断裂修复影响体内氧化应激作用。缺乏POLK基因功能拷贝的人细胞系基因组完整性受损，氧化损伤过程受到影响，故其在DNA的修复过程和氧化损伤过程中发挥重要作用。POLK基因是跨损伤DNA合成相关通路的一个关键基因，当该基因失调后，会发生DNA断裂、染色体异常等一系列使基因组不稳定的事件，并且与肿瘤进展有关。有研究发现POLK基因的遗传变异与非小细胞肺癌患者铂类药物的化疗疗效、不良反应以及预后相关。尽管如此，目前对POLK的探索并不能完全揭示该基因参与肿瘤发生发展过程的多样性，总的来说，以往对POLK基因的研究主要集中在探讨DNA损伤修复和氧化应激功能上，而对POLK基因产生的非编码RNA的研究鲜有报道。
[0003]只有不到2％的人类基因组序列是蛋白质编码基因，而人类转录组大多数序列是非编码RNA，即没有编码蛋白质的能力。circRNA是一类由mRNA前体反向剪接形成的不具有5
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poly(A)尾的单链闭合的新型非编码RNA分子。随着RNAseq技术和生物信息学分析技术的不断更新和完善，大量的circRNA被发现广泛表达于真核生物中，例如在真核细胞中就有近10％的基因转录可以剪接产生circRNA并发挥生物学功能。circRNA在真核细胞中发挥着广泛的生物学功能，例如作用于miRNA“海绵”、蛋白质“海绵”、调节mRNA的稳定性、调节亲本基因转录，此外，有研究表明部分circRNA具有翻译功能蛋白的能力。多项研究表明，circRNA在肿瘤的发生发展和侵袭或转移中起着至关重要的作用。
[0004]肺癌(lung cancer)和肝癌(liver cancer)是目前我国死亡率最高的两种恶性肿瘤，同时也是肿瘤转移最常见的两大转移性癌种。吸烟仍然是诱发肺癌的主要原因，近年来二手烟和三手烟也逐渐成为肺癌的诱发因素。乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)是诱发肝癌的主要危险因素，同时过量饮酒和黄曲霉毒素也是导致肝癌风险增加的重要原因。但肺癌和肝癌的具体病理机制尚不清楚。肺癌和肝癌的诊断主要依靠影像学诊断、血清肿瘤标志物检查和组织活检。由于早期肺癌和肝癌缺乏特异性症状，大多数患者在没有定期筛查的情况下直到晚期才确诊，预后一般较差且不可逆。手术是早期肺癌和肝癌患者的推荐治疗方法。对于晚期患者，放疗和化疗是主要的治疗手段然而，放疗和化疗往往会产生严重的副作用，使患者无法耐受。近年来，分子靶向治疗和免疫治疗日益流行，但只适用于某些特定类型的癌症患者，迫切需要探索更具体、更有效的癌症诊断和治疗方法。由于靶向治疗在肺癌中的应用更为突出和成熟，因此我们最终选择肺癌进行深入探究。
[0005]近年来，circRNA被广泛报道参与非小细胞肺癌的发生发展。circRNA主要以吸附miRNA或编码蛋白的方式促进非小细胞肺癌进程。Botai Li等人发现circNDUFB2通过去稳定IGF2BPs和激活抗肿瘤免疫从而抑制非小细胞肺癌的进展。Daishi Chen等人发现hsa_circ_100395调控miR
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1228/TCF21通路来抑制肺癌进展。另外，Yongsheng Zhao等人也认为circCDR1as通过靶向miR
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641/HOXA9轴调控非小细胞肺癌细胞的干性和顺铂耐药。但总的来说，大多数circRNA在非小细胞肺癌的过程和发病机制中的具体作用仍不清楚。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK及其应用。
[0007]根据本专利技术实施例的第一方面，提供了一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK，所述circPOLK的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008]根据本专利技术实施例的第二方面，提供了一种用于诊断肿瘤发生的试剂盒，包括与第一方面所述circPOLK特异性互补配对的分子探针或用于扩增权第一方面所述的circPOLK的引物对。
[0009]根据本专利技术实施例的第三方面，提供第一方面所述circPOLK在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
[0010]进一步地，所述肿瘤包括肝癌和肺癌。优选的，所述肿瘤包括非小细胞肺癌。
[0011]进一步地，所述肿瘤包括原发瘤和转移瘤。
[0012]根据本专利技术实施例的第三方面，提供一种用于预防和/或治疗肿瘤的药物，所述药物以第一方面所述circPOLK为活性成分。
[0013]进一步地，所述肿瘤包括结肝癌和肺癌。
[0014]进一步地，所述肿瘤包括原发瘤和转移瘤。
[0015]本申请的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：
[0016]由上述实施例可知，本申请首次公开POLK mRNA第1
‑
3外显子反向剪接形成的环状RNA(circPOLK)，circPOLK的表达具有明显的人鼠进化保守性，同时还具有耐受RNA酶R消化及放线菌素D处理的特点。circPOLK在肿瘤组织和细胞中表达上调，且circPOLK高表达的肿瘤患者预后较差，circPOLK的表达水平与非小细胞肺癌患者淋巴结转移和远处转移呈正相关；本专利技术相关实验均证明：无论是稳定表达circPOLK的肿瘤细胞系，还是内源circPOLK敲除细胞系，均可以证明circPOLK高表达显著促进非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭，而对细胞凋亡、增殖和克隆形成能力无显著影响。相比于正常患者，肺癌患者血液外泌体中circPOLK呈现高表达，肺癌细胞能经外泌体分泌circPOLK促进血管细胞的迁移和侵袭能力。因此，本专利技术基于这一新型环状RNA(circPOLK)核酸序列，可以为肿瘤治疗，尤其是转移瘤的临床治疗或预防方面提供一种新的药物靶点，为提前诊断肿瘤的发生提供了新的思路和策略。
[0017]应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本申请。
附图说明
[0018]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
[0019]图1为本专利技术实施例提供的circPOLK反向剪接位点序列的Sanger测序图；
[0020]图2为本专利技术实施例提供的circPOLK反向剪接的扩增产物聚丙烯酰胺凝胶图；
[0021]图3为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK，其特征在于，所述circPOLK的核苷酸序列如图1所示。2.一种用于诊断肿瘤发生的试剂盒，其特征在于，包括与权利要求1所述circPOLK特异性互补配对的分子探针或用于扩增权利要求1所述circPOLK的引物对。3.权利要求1所述circPOLK在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。4.根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张翀，李杨玲，曾玲晖，刘也涵，凌世生，董文坤，
申请(专利权)人：杭州安旭生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：