一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其通过转基因技术获得两种丝胶茧系统，选取丝胶茧中丝胶含量较多的一种的丝胶茧为生物反应器，通过以Ser1为启动子，增强型绿色荧光蛋白EGFP为目的基因，构建转基因表达载体并且获得转基因家蚕。本发明专利技术根据利用piggyBac介导的家蚕遗传改良技术，利用转基因丝胶茧作为注射受体，在家蚕中部丝腺表达外源蛋白，使外源蛋白的提取和纯化更加容易，为探索开发利用丝胶茧受体表达重组蛋白提供素材基础。基础。基础。

【技术实现步骤摘要】
一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法


[0001]本专利技术属于生物材料
，具体涉及一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法。

技术介绍

[0002]近些年来，随着生物技术的蓬勃发展，特别是近年在家蚕基因组计划的推动下，人们对丝腺高效合成与分泌丝蛋白的分子机制有了深入了解，研究者们开始对蚕丝进行结构与功能化的改造，开发蚕丝的新用途。
[0003]2000年开始，研究人员利用piggyBac转座子介导，成功建立了家蚕转基因技术，该技术可以对家蚕以及蚕丝进行遗传改造，赋予蚕丝特定的生物学性能，使得蚕丝能够应用于更多领域。同时还发现，家蚕不仅能用于产丝织绸，其丝腺还是一个理想的生物反应器，可用于生产高附加值重组外源蛋白。
[0004]家蚕丝腺是一个天然蛋白生产工厂，能够高效的合成丝蛋白。迄今，利用转基因家蚕丝腺作为生物反应器，已经表达出了20多个重组蛋白，并且在转基因家蚕丝腺中表达的重组蛋白大都具有生物学活性，表明家蚕丝腺是生产重组蛋白的理想宿主。但是，当前的转基因丝腺表达系统存在重组蛋白表达量普遍较低的问题，难以在各个指定工业领域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其特征在于，其通过转基因技术获得两种丝胶茧系统，选取丝胶茧中丝胶含量较多的一种丝胶茧为生物反应器，通过以家蚕Ser1基因(SEQ ID NO.1)为启动子，增强型绿色荧光蛋白EGFP(SEQ ID NO.2)为目的基因，构建转基因表达载体并且获得转基因家蚕。2.依据权利要求1所述的转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S1，构建丝胶茧表达载体；步骤S2，胚胎显微注射与荧光筛选；步骤S3，中部丝腺特异表达载体构建；步骤S4，再一次进行胚胎显微注射与荧光筛选；步骤S5，通过对中部丝腺进行荧光观察和分子检测，验证重组蛋白表达成功；步骤S6，通过对茧壳形态和茧壳蛋白的分子检测，验证重组蛋白已经成功分泌。3.依据权利要求2所述的转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其特征在于，步骤S1进一步包括步骤S11,构建了以家蚕fibL基因[NCBI基因ID：M76430.1](SEQ ID NO.3)为启动子，BmY1314突变其第97位氨基酸位点(BmY1314S97A)(SEQ ID NO.4)为目的基因，终止信号为Ser1
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polyA(SEQ ID NO.5)，串联形成目的基因表达框，通过利用AscI将骨架载体pBac[3
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P3
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DsRed]和目的基因表达框切开，通过T4链接酶进行链接。4.依据权利要求2所述的转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其特征在于，步骤S1进一步包括步骤步骤S12，构建了以家蚕fibH基因[NCBI基因ID：NM_001113262.1](SEQ ID NO.6)为启动子，BmY1314突变其第97位氨基酸位点(BmY1314S97A)(SEQ ID NO.4)为目的基因，Ser1
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polyA(SEQ ID NO.5)为终止信号，串联形成目的基因表达框，通过利用AscI将骨架载体pBac[3
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P3
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ECFP]和目的基因表达框切开，通过T4链接酶进行链接。5.依据权利要求3所述的转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其特征在于，进一步包括获得转基因表达载体后，将其与辅助质粒分别以浓度450ng/μL等比例混合，通过Eppendorf显微注射仪注射，以多化性家蚕Nistari为注射受体，进行转基...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐汉福，刘荣鹏，王浩淼，马艳，唐艺芸，胡杰，欧瑶，马静文，向仲怀，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：