用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用，本发明专利技术采用state

【技术实现步骤摘要】
用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤诊断领域，具体涉及用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用。

技术介绍

[0002]目前临床上研究和应用最广泛的免疫检查点抑制剂包括针对CTLA
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4、PD
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1和PD
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L1的单抗。检查点免疫治疗在一些肿瘤如黑色素瘤中有显著疗效，然而目前免疫检查点抑制剂和细胞治疗对包括胰腺癌等实体肿瘤的疗效甚微。以胰腺癌为例，在胰腺癌免疫治疗当中免疫检查点抑制剂(PD
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1、PD
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L1、CTLA
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4)开展的临床试验最多，然而诸多临床试验的结果显示从免疫治疗成功获益的胰腺癌患者几乎无效。
[0003]目前对免疫治疗检测的标准是通过免疫组化方式分析PD
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L1蛋白表达，很遗憾的是有近一半的PD
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L1表达阳性病人对免疫检查点治疗依然无反应。有研究表明不同空间区域实体肿瘤表现为不同的肿瘤微环境，从而导致肿瘤发病机制及治疗反应的不同。因而，深入了解实体肿瘤空间区域免疫微环境的差异和共性，是目前亟待解决的重大科学问题。现有证据证实肿瘤免疫和机体对肿瘤免疫治疗的反应受多种因素影响，包括肿瘤抗原和肿瘤突变等。高基因突变负荷(TMB
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High)实体瘤的免疫治疗设想是基于肿瘤突变可能产生免疫原性新抗原，新抗原增加和CD8
+
T细胞计数增加呈正相关，而CD8
+
T浸润肿瘤是免疫治疗效果好的基础。目前普遍观点认为，依据肿瘤微环境中免疫细胞的浸润和基因突变负荷(tumor mutationburden,TMB)等可以将肿瘤分为三大类：冷肿瘤
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免疫耐受型(cold tumor
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immune resistant)，热肿瘤
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免疫响应型(hot tumor
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immune responsive)，和完全无反应型(excluded tumor
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immuneresistant)。这类分型使得我们对肿瘤微环境有了进一步认识，并对免疫治疗疗效的监测有一定指导作用。然而在实际临床应用过程中，研究发现部分被认为是冷肿瘤的患者对免疫治疗响应较好，证实肿瘤微环境的复杂性和多样性。最近来自美国MD安德森癌症中心最新发表的研究质疑FDA加速审批的—免疫检查点抑制剂适应证之一的TMB
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High泛癌种。该研究的回顾性分析发现，并非所有TMB
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High癌种的CD8
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T细胞计数就会升高，因此TMB
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High或不适合作为预测所有癌症的免疫治疗疗效生物标志物。同样今年发表在NEJM上一篇 LETTER同样对TMB
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High的免疫治疗疗效预测价值提出了质疑。研究发现TMB的预测价值仍然仅仅体现NSCLC、头颈部鳞癌和黑色瘤上，其他癌种观察不到TMB
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High的预测价值。进一步证实在包括消化系统肿瘤等实体肿瘤中TMB
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High预测期免疫治疗疗效的证据尚不充分。缺乏准确预测肿瘤患者对免疫治疗疗效是导致免疫治疗效果不尽人意的重要原因，当前急需研发有临床指导价值的预测指标来帮助和指导临床医生对免疫治疗用药适应症、用药时机和患者预后做出准确判断。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术针对实体肿瘤免疫治疗适应症和疗效预测面临的难题和瓶颈，
过揭示实体肿瘤免疫微环境的空间区域免疫共性和特性，建立新型免疫微环境评分标准，研发了针对实体肿瘤治疗疗效和预后的新型监测模型，在生物医药特别是肿瘤免疫治疗领域有极大的应用前景和产业价值。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用，所述免疫检测点包括免疫标志物和免疫细胞，所述免疫标志物为TIM
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3和PD
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1；所述免疫细胞为 CD8
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T细胞。
[0007]本专利技术优选的，所述试剂包括TIM
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3、PD
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1和CD8的免疫试剂。
[0008]本专利技术优选的，所述免疫试剂为用于免疫荧光/免疫组织化学抗体或免疫胶体金标记。
[0009]本专利技术优选的，所述试剂包括特异识别TIM
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3、PD
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1和CD8的显色剂标记分子探针。
[0010]本专利技术优选的，所述显色剂标记分子探针为分别用不同荧光标记的TIM
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3分子探针、PD
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1 分子探针和CD8分子探针。
[0011]本专利技术优选的，所述荧光标记的TIM
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3分子探针为包括一抗和二抗，一抗为抗人TIM
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3 单克隆抗体，二抗为Opal多标荧光二抗，HRP polymer或HRP AP polymer；所述荧光标记的 PD
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1分子探针包括一抗和二抗，一抗为抗人PD
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1单克隆抗体，二抗为Opal多标荧光二抗， HRP polymer或者HRP AP polymer；所述CD8分子探针包括一抗和二抗，一抗为抗人CD8 单克隆抗体，二抗为Opal多标荧光二抗，HRP polymer或者HRP AP polymer。
[0012]本专利技术优选的，所述试剂还包括肿瘤标记试剂。
[0013]本专利技术优选的，所述肿瘤标记为PAN
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CK。检测PAN
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CK的试剂可以为免疫试剂，包括免疫荧光/免疫组织化学抗体或免疫胶体金标记。优选的，特异识别PAN
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CK的显色剂标记分子探针；更优选的，PAN
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CK分子探针包括一抗和二抗，一抗为鼠抗人PAN
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CK单克隆抗体 (Cell Signaling Technology,#4545)。
[0014]本专利技术优选的，所述试剂还包括脱腊剂、梯度乙醇溶液、封闭液、染料、DAPI染色剂和 TBST缓冲液。
[0015]本专利技术优选的，所述试剂的检测指标空间分布预测模型为LASSO
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COX模型和列线图 (nomogram)。
[0016]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用，本专利技术采用state
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of
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the
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art空间蛋白质组学分析技术和机器学习，分析实体肿瘤组织在免疫治疗前后肿瘤微环境中的免疫检查点TIM
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3和其他免疫检查点 PD
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1、PAN
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CK和C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测免疫检查点空间分布的试剂在制备肿瘤治疗和预后诊断产品中的应用，其特征在于：所述免疫检测点包括免疫标志物和免疫细胞，所述免疫标志物为TIM
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3和PD
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1；所述免疫细胞为CD8
+
T细胞。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂包括TIM
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3、PD
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1和CD8的免疫试剂。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述免疫试剂为用于免疫荧光/免疫组织化学抗体或免疫胶体金标记。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂包括特异识别TIM
‑
3、PD
‑
1和CD8的显色剂标记分子探针。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述显色剂标记分子探针为分别用不同荧光标记的TIM
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3分子探针、PD
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1分子探针和CD8分子探针。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述荧光标记的TIM
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3分子探针为包...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜红，王平，孔昊，谢带，黄子芮，吴淳炜，
申请(专利权)人：成都福实生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：