一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用，涉及免疫检验技术领域。封闭剂包括如下重量百分数计的封闭剂原料：92％

【技术实现步骤摘要】
一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫检验
，具体而言，涉及一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用。

技术介绍

[0002]抗原与抗体间的亲和力使二者可进行特异性结合，免疫检测技术的基本原理即根据抗原、抗体结合形成免疫复合结构后的现象及性状特点，对样本中的待测物进行定性、定位或定量的检测。近年来由于其特异性高、快速、易标准化操作等优势在生物医学、食品检测及环境监测等领域得以快速发展。在侧向免疫层析、胶乳增强比浊、化学发光等当下主流的免疫诊断技术中，微球均有极广泛的应用场景。对免疫反应中作为标记物或载体的微球进行抗体偶联修饰，在抗原
‑
抗体特异性反应后，按照不同方法学可对待测物进行分析，实现定性定量检测。不同的免疫检测方法中，抗体偶联的微球复合物通常被认为是能影响检测灵敏度、重复性、稳定性等性能的关键因素之一，而抗体偶联微球复合物多余反应位点的封闭和后续保存是提升微球复合物甚至检测结果性能的重要步骤。因此开发出一种有效封闭的封闭剂和稳定保存的保存剂，来减少免疫反应过程中的非特异性干扰，提升检测技术的灵敏度、重复性、稳定性极具现实意义。
[0003]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂、保存剂及其应用以解决封闭有效性和保存稳定性的技术问题。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]本专利技术提供了一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：92％
‑
98.09％的缓冲液、1％
‑
5％的蛋白质、0.2％
‑
2％的氨基酸、0.01％
‑
0.1％的大分子聚合物、0.05％
‑
0.5％的表面活性剂和0.1％
‑
0.5％的防腐剂；
[0007]缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液、HEPES、MOPSO和DIPSO缓冲液中的至少一种；蛋白质选自牛血清白蛋白、酪蛋白和凝胶中的至少一种；氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸和N,N,N
‑
三甲基甘氨酸中的至少一种；大分子聚合物选自CE210和CE510中的至少一种。
[0008]本专利技术提供了一种降低非特异性吸附、提高检测灵敏度的封闭剂，该封闭剂不仅能提升检测的灵敏度、稳定性，还能改善试剂的变异系数。
[0009]专利技术人发现，要降低微球的非特异性吸附、减少假阳性信号，需要考虑如何将微球表面未反应的活性位点进行充分封闭。上述封闭剂中的CE210或CE510可以增加信号区分度，可能原因是带有氨基基团的链状聚乙二醇能够改善荧光微球固相表面上的蛋白构象，使抗体的方向倾向于“直立”在微球表面，提高了免疫结合反应效率从而实现灵敏度的改善。
[0010]专利技术人发现，蛋白质和氨基酸的组合封闭方式可改善检测的变异系数。大分子聚合物可以改善低值区分度。
[0011]在一种可选的实施方式中，上述氨基酸选自甘氨酸，甘氨酸可以改善高值重复性，减小测试结果的变异系数，但是单一使用甘氨酸作为封闭剂会使低值测试的变异系数增大。结合低、高值精密度测试结果考虑，专利技术人发现选用蛋白质和甘氨酸的组合封闭方式可改善检测的变异系数。
[0012]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述表面活性剂选自吐温
‑
20、吐温
‑
80、S9和Triton X
‑
100中的至少一种；
[0013]防腐剂选自如下至少一种的物质：1,2
‑
己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、叠氮化钠、ProClin300和脱氢乙酸钠。
[0014]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述蛋白质选自牛血清白蛋白和酪蛋白，且封闭剂中含质量百分数计的1
‑
1.5％的牛血清白蛋白和0.25％
‑
0.5％的酪蛋白；
[0015]专利技术人发现，相较于单独的BSA封闭，氨基酸等小分子的封闭剂的引入未能明显改善非特异性吸附带来的背景信号。然而BSA、酪蛋白的联合封闭能够在不影响低值区分度和检测灵敏度的前提下实现背景信号的显著降低。因此，BSA、酪蛋白的联合封闭起到了明显降低背景信号，提高检测灵敏度和低值区分度的作用。
[0016]酪蛋白的引入可显著降低测试非特异性吸附，在灵敏度和精密度两方面都有较好的表现。
[0017]在一种可选的实施方式中，封闭剂包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.09％的缓冲液、1％的牛血清白蛋白、0.25％的酪蛋白、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的表面活性剂和0.1％的防腐剂。
[0018]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述缓冲液的浓度为10
‑
100mM。
[0019]本专利技术还提供了一种抗体偶联微球复合物的保存剂，其包括如下质量百分数计的原料：72％
‑
95％的缓冲液、2％
‑
5％的糖类、1％
‑
5％的醇类、0.5％
‑
2％的蛋白质、1.5％
‑
15％的稳定剂、0.1％
‑
0.5％的防腐剂和0.05％
‑
0.5％的表面活性剂；
[0020]糖类为海藻糖、蔗糖、壳聚糖、甘露糖和葡聚糖中的至少一种；醇类为山梨醇、甘露醇和丙三醇中的至少一种；蛋白质为酪蛋白钠、牛血清白蛋白、NBS和凝胶中的至少一种；稳定剂为Biolipidure
‑
802、Surmodics
‑
SC01和SC02中的至少一种。
[0021]若要保持抗体偶联微球的复合物甚至检测试剂的稳定性，需要考虑的不仅是如何保护抗体蛋白的活性和构象，还需考虑如何稳定微球复合物在溶液中的单分散状态，通常微球表面带电荷的功能基团有利于使整个微球保存体系趋向于稳定状态，可以避免聚集的发生。
[0022]专利技术人提供了一种保存剂，保存剂中添加的糖类、蛋白质、醇类、稳定剂主要作为保护剂起到保护蛋白活性并稳定其构象的作用，从而减缓信号衰减的趋势。然而随着时间的推移，仅仅添加上述的糖类、蛋白质、醇类、稳定剂无法保证试剂的长期稳定。而用两性离子缓冲液替换原有PBS体系后，可以极大程度上提高试剂的37℃加速稳定性和室温稳定性。猜测由于HEPES结构中的磺酸根基团能够稳定蛋白质的天然结构，从而最大程度的起到了稳定试剂检测性能的作用。
[0023]高分子聚合物和醇类的氢键起到提高体系亲水性、稳定单分散微球体系、避免或
减少微球沉降团聚的情况出现。将上述保存剂用于抗体偶联微球复合物的保存，可获得良好的热稳定性和室温/冷藏稳定性。
[0024]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述表面活性剂为吐温
‑
20、吐温
‑
80、S9、Triton X
‑
100中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，其包括如下重量百分数计的封闭剂原料：92％
‑
98.09％的缓冲液、1％
‑
5％的蛋白质、0.2％
‑
2％的氨基酸、0.01％
‑
0.1％的大分子聚合物、0.05％
‑
0.5％的表面活性剂和0.1％
‑
0.5％的防腐剂；所述缓冲液选自磷酸缓冲盐溶液、HEPES、MOPSO和DIPSO缓冲液中的至少一种；所述蛋白质选自牛血清白蛋白、酪蛋白和凝胶中的至少一种；所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸和N,N,N
‑
三甲基甘氨酸中的至少一种；所述大分子聚合物选自CE210和CE510中的至少一种。2.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述表面活性剂选自吐温
‑
20、吐温
‑
80、S9和Triton X
‑
100中的至少一种；所述防腐剂选自如下至少一种的物质：1,2
‑
己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、叠氮化钠、ProClin300和脱氢乙酸钠。3.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述蛋白质选自牛血清白蛋白和酪蛋白，且所述封闭剂中含质量百分数计的1
‑
1.5％的牛血清白蛋白和0.25％
‑
0.5％的酪蛋白；优选地，所述封闭剂包括如下重量百分数计的封闭剂原料：98.09％的缓冲液、1％的牛血清白蛋白、0.25％的酪蛋白、0.5％的甘氨酸、0.01％的CE210、0.05％的表面活性剂和0.1％的防腐剂。4.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述缓冲液的浓度为10
‑
100mM。5.一种抗体偶联微球复合物的保存剂，其特征在于，其包括如下质量百分数计的原料：72％
‑
95％的缓冲液、2％
‑
5％的糖类、1％
‑
5％的醇类、0.5％
‑
2％的蛋白质、1.5％
‑
15％的稳定剂、0.1％
‑
0.5％的防腐剂和0.05％
‑
0.5％的表面活性剂；所述糖类...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐思桐，王佩瑞，蒋鑫，白婷，郑翠，伍健聪，杨博，郇恪，
申请(专利权)人：上海艾瑞德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：