用于测量生物流体中未结合胆红素浓度的一步方法、试剂盒和系统技术方案

描述了荧光标记的蛋白质的鉴定和使用，这些蛋白质在结合胆红素时会发生荧光指数的变化。公开了在半胱氨酸或赖氨酸残基处标记的探针以及在半胱氨酸和赖氨酸二者处用两种不同的荧光团标记的探针。这些探针可用于确定流体样品中未结合的胆红素水平。样品中未结合的胆红素水平。样品中未结合的胆红素水平。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于测量生物流体中未结合胆红素浓度的一步方法、试剂盒和系统
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月30日提交的美国临时申请号62/894,553的权益，该申请的全部内容在此通过引用明确纳入。
[0003]关于联邦资助研发的声明
[0004]这项工作得到了美国国立卫生研究院的SBIR批准号R44HD080412的部分支持。因此，美国政府可能对本专利技术拥有某些权利。
[0005]对序列表的引用
[0006]本申请与名称为FFASC077WOSEQLIST.TXT的电子序列表一起提交，该电子序列表创建于2020年8月24日，其大小为40KB。电子序列表中的信息在此通过引用明确纳入。


[0007]本公开涉及未结合胆红素的测量。

技术介绍

[0008]胆红素是血红蛋白周转的产物，其难溶于水，因此主要与血浆中的白蛋白缔合。然而，总血浆胆红素的一小部分可溶于水相。这种未结合或游离的部分能够透过血脑屏障，并且在水平升高时具有神经毒性[Ahlfors CE，Wennberg RP，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于测量样品中游离胆红素的传感器，所述传感器包含：胆红素响应性探针，其用第一荧光团标记；和无响应探针，其用第二荧光团标记，其中所述第一和第二荧光团在相同波长激发，并且其中所述第一和第二荧光团在不同波长发射荧光。2.根据权利要求1所述的传感器，其中所述胆红素响应性探针包含第一细胞内脂质结合蛋白(iLBP)，其中所述第一iLBP具有包含SEQ ID NO：1的肽序列，包含：取代十四个可接近的赖氨酸的Arg(KR14，如SEQ ID NO：2所列出的)；具有如SEQ ID NO：3所列出的序列的C末端双His标签接头(C2XH11)；MGI的N末端添加；和包括单个半胱氨酸的不超过62个氨基酸取代和添加。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的传感器，其中所述胆红素响应性探针包含表1中列出的任意一种探针的序列。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的传感器，其中所述无响应探针包含第二iLBP，其中所述第二iLBP具有包含SEQ ID NO：1的肽序列，包含：位置72、73、74、126和131的取代；在位置27、31、33、54、73、74、76或98中任一处取代为Cys；不超过三个另外的氨基酸取代；和具有如SEQ ID NO：3所列出的序列的C末端双His标签接头(C2XH11)。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的传感器，其中所述无响应探针包含如表2中所列出的任意一种探针的序列。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的传感器，其中，所述第一荧光团和所述第二荧光团是不同的荧光团。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的传感器，其中，所述胆红素响应性探针包含附接所述第一荧光团的单个半胱氨酸。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的传感器，其中，所述无响应探针包括附接所述第二荧光团的单个半胱氨酸。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的传感器，其中，所述第一荧光团是附接到半胱氨酸取代的LICOR 700DX马来酰亚胺或LICOR 800CW马来酰亚胺。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的传感器，其中所述胆红素响应性探针被配置为结合胆红素的未缀合的IX
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α(Z，Z)异构体。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的传感器，其中，所述胆红素响应性探针被配置为与缀合的胆红素最低限度地结合(低于4mg/d1)。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的传感器，其中所述胆红素响应性探针被配置为不结合胆红素的Z，E或E，Z光异构体、光红素、脂肪酸、任何其他天然存在的血液成分和/或新生儿药物。13.根据权利要求12所述的传感器，其中，所述新生儿药物不是螺内酯。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的传感器，其中，所述无响应探针不与胆红素的未缀合的IX
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α(Z，Z)异构体或缀合的胆红素结合。
15.根据权利要求1
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14中任一项所述的传感器，其中所述无响应探针被配置为不与胆红素的Z，E或E，Z光异构体、光红素、脂肪酸、任何其他天然存在的血液成分和/或新生儿药物结合。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的传感器，其中，当所述第一荧光团为LICOR 700DX马来酰亚胺时，所述第二荧光团为附接至半胱氨酸取代的LICOR 800CW马来酰亚胺，和当所述第一荧光团为LICOR 800CW马来酰亚胺时，所述第二荧光团为LICOR 700DX马来酰亚胺。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的传感器，其中所述第一荧光团或所述第二荧光团附接至半胱氨酸取代并且其中所述半胱氨酸取代在SEQ ID NO：1的位置22、24、25、26、27、29、30、33、54、74、76、97或98处。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的传感器，其中，所述第一荧光团或所述第二荧光团的发射强度不受选自胆红素和血红蛋白的血液成分的吸光度的影响。19.根据权利要求1
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18中任一项所述的传感器，其中所述胆红素响应性探针或所述无响应探针还包含至少一个接头。20.组合物，其包含权利要求1
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19中任一项所述的传感器。21.包含游离胆红素(Bf)传感器的组合物，其中所述Bf传感器包含：第一细胞内脂质结合蛋白(iLBP)，其结合胆红素并用第一荧光团标记；和第二iLBP，其不结合胆红素并用第二荧光团标记，其中所述第二荧光团不附接至所述第一iLBP，其中所述第一荧光团和所述第二荧光团在相同的波长激发，其中所述第一荧光团和所述第二荧光团的发射波长不同，并且其中所述第二荧光团在胆红素存在下不改变其发射。22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述第一荧光团是LICOR 700DX马来酰亚胺和所述第二荧光团是LICOR 800CW马来酰亚胺，或者其中所述第一荧光团是LICOR 800CW马来酰亚胺和所述第二荧光团是LICOR 700DX马来酰亚胺。23.根据权利要求21
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22中任一项所述的组合物，其中在两个不同波长测量荧光指数比值的变化并用于确定未结合胆红素的浓度。24.根据权利要求21
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23中任一项所述的组合物，其中所述第一荧光团或所述第二荧光团的发射强度不受选自胆红素和血红蛋白的血液成分的吸光度的影响。25.固体基板，其包含根据权利要求1
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19中任一项所述的传感器或根据权利要求20
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24中任一项所述的组合物，其中所述胆红素响应性探针和/或所述无响应探针附接至所述固体基板。26.根据权利要求25所述的固体基板，其中所述固体基板是Ni
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聚苯乙烯、Ni
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胶乳或Ni
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琼脂糖珠。27.根据权利要求26所述的固体基板，其中所述Ni
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聚苯乙烯、Ni
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胶乳或Ni
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琼脂糖珠包含铁。28.根据权利要求25
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27中任一项所述的固体基板，其中所述胆红素响应性探针或所述无响应探针包含如SEQ ID NO：3所列出的取代7R 16R 20R 29R 37R 46R 50R 88R 92R 94R 100R 125R 129R和130R(KR14)。29.根据权利要求25
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28中任一项所述的固体基板，其中所述胆红素响应性探针和/或
所述无响应探针包含标签并且所述固体基板包含所述标签的受体。30.根据权利要求29所述的固体基板，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿兰，
申请(专利权)人：阿兰，
类型：发明
国别省市：