猕猴桃AaPG18基因及针对该转基因的单果验证方法技术

本申请属于基因工程技术领域，具体涉及一个猕猴桃AaPG18基因及针对该转基因的单果验证方法。猕猴桃AaPG18基因序序列如SEQ ID No.1所示。所述转基因猕猴桃的单果验证方法，以转基因瞬时表达系统为技术基础，首先构建重组的pBI121

【技术实现步骤摘要】
猕猴桃AaPG18基因及针对该转基因的单果验证方法


[0001]本申请属于基因工程
，具体涉及一个猕猴桃AaPG18基因及针对该转基因的单果验证方法。

技术介绍

[0002]基因工程技术开发过程中，适时对转基因后生物体进行检测和验证，是改进和调整相关转基因技术操作的重要组成部分。但实际操作中，因为生物对象不同，针对转基因后生物体的检测和验证方式也有明显不同。
[0003]对于常用的模式植物例如拟南芥等而言，由于其生长周期短、易于繁殖，因此，对于目的基因的功能验证往往可以通过本物种转基因和突变体同义弥补得以实现。但对于生长周期长、生长速度慢的多年生植物例如果树研究而言，受限于遗传转化体系的固有的概率性和随机性缺陷、以及突变体系构建的困难性等因素，常规的转基因操作后的目的基因功能验证方法，很难在果树等植物中直接应用。
[0004]实际转基因功能验证中，瞬时表达系统是一种快速验证转基因是否成功、验证目的基因功能的验证方法。其技术原理为：在将外源基因导入植物细胞后，转移至细胞中的外源DNA和宿主细胞染色体DNA不发生整合，外源DN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.猕猴桃AaPG18基因，其特征在于，该基因序列长度为1191bp，序列如SEQ ID No.1所示。2.权利要求1所述猕猴桃AaPG18基因在猕猴桃新品种培育中应用，其特征在于，猕猴桃AaPG18基因与猕猴桃果实软化成熟相关。3.针对权利要求1所述猕猴桃AaPG18基因的转基因猕猴桃的单果验证方法，其特征在于，该方法以转基因瞬时表达系统为技术基础，针对猕猴桃单果进行转基因目的验证，具体包括如下步骤：（一）构建过表达重组载体以植物双元表达载体pBI121为载体，构建重组的pBI121
‑
AaPG18过表达载体，具体步骤包括：（1）获得目的基因首先，提取猕猴桃单果果实总RNA，并反转录为cDNA备用；随后，针对目的基因AaPG18设计PCR扩增用引物，并以上述cDNA为模板进行PCR扩增；PCR扩增过程中，PCR扩增用引物对设计如下：AaPG18
‑
F：5
’‑ꢀ
ATGACAATGGTGCAACCACT
‑3’
，AaPG18
‑
R：5
’‑
CTACAAGCAACTTGAGGGCTTA
‑3’
；最后，对PCR扩增产物电泳检测后提纯备用；（2）连接和转化利用T4连接酶，将步骤（1）中所制备目的基因AaPG18与pED
‑
T载体进行连接，随后，将连接产物转化，并进行筛选、验证，确保转化...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐秀娟，李玉阔，黄海雷，顾红，林苗苗，孙雷明，钟云鹏，王然，
申请(专利权)人：中国农业科学院郑州果树研究所，
类型：发明
国别省市：