一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术属于抗体技术领域，具体涉及一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗的单克隆抗体和应用。所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，或者是所述SEQ ID NO.3所示氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO.4所示氨基酸序列，或者是所述SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。本发明专利技术提供的单克隆抗体对沙丁胺醇和克伦特罗具有良好的交叉反应率、高亲和力和高灵敏度，适用于沙丁胺醇和克伦特罗的快速免疫检测。免疫检测。

【技术实现步骤摘要】
一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于抗体
，具体涉及一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗的单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]沙丁胺醇(SAL)和克伦特罗同属β
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兴奋剂(β
‑
agonist)，全称β
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肾上腺素受体激动剂(β
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adrenoceptor agonist)，是一类化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙胺类药物(phenethy lamines，PEAs)。β
‑
兴奋剂能选择性地与细胞膜上的β
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肾上素受体结合，起到调节交感神经兴奋、松弛气管平滑肌的功能，因此在临床上常用于人和动物哮喘类病症的治疗。当β
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兴奋剂用量为临床用量的5
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10倍时，能够增强体内脂肪分解代谢、增加蛋白质合成并减少脂肪组织，显著提高瘦肉率。最早被用于提高牲畜瘦肉率的β
‑
兴奋剂是克伦特罗，但随着世界范围内对其禁用，沙丁胺醇成为克伦特罗最常用替代品。
[0003]β
‑
兴奋剂残留会聚集在动物可食用组织中，一旦通过食物链进入人体，会对健康产生极大的危害，人体中毒后常表现为心跳过速、心率失常、肌肉震颤、头晕头痛、呕心呕吐、发热寒颤等症严重者甚至会导致死亡。
[0004]像其它环境污染物质一样，沙丁胺醇等β
‑
兴奋剂虽然分子量小，但却会对人类健康造成巨大的潜在威胁，而且会以各种形式在人类不知情的情况下出现在环境中。此外，沙丁胺醇有可能通过动物排泄物和尿液进入生态环境，这会造成环境污染，并可能通过间接消费进入人体。沙丁胺醇在环境中作为污染物广泛存在，在某些水体环境例如泰晤士河中，沙丁胺醇的浓度高达0.47μg/L。同时，也有报道指出污水处理厂在去除水体中沙丁胺醇污染方面效果较差。因此，有必要建立一种适当的检测方法来监测环境中的沙丁胺醇。
[0005]β
‑
兴奋剂残留的主要检测方法有色谱法、免疫分析法、毛细管电泳法及电化学法等。色谱法包括气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联用法(GCMS)、液质联用法(LC—MS)。免疫分析法包括酶联免疫法、胶体金免疫法、时间分辨免疫荧光测定等。其中，免疫分析方法最为快速、经济，但目前应用于免疫检测的抗体主要是多克隆抗体，其亲和力均较低限制了其在免疫检测中的应用。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供了一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体和应用。本专利技术通过大量试验研究，包括噬菌体抗体库的筛选、抗沙丁胺醇和/或克伦特罗特异性抗体的纯化、抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体的制备、表达及纯化，最终获得一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体，该单克隆抗体具有高的亲和力和灵敏度，能够应用于沙丁胺醇和克伦特罗的快速免疫检测。
[0007]为实现本专利技术的上述目的，采用如下技术方案：
[0008]本专利技术提供一种抗抗沙丁胺醇和/或克伦特罗的单克隆抗体，所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，或者是所述SEQ ID NO.3所
示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；
[0009]和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，或者是所述SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。
[0010]优选地，所述轻链可变区包含如下互补区决定区：氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的LCDR1、SEQ ID NO.6所示的LCDR2和SEQ ID NO.7所示的LCDR3；
[0011]所述重链可变区包含如下互补区决定区：氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示的HCDR1、SEQ ID NO.9所示的HCDR2和SEQ ID NO.10所示的HCDR3。
[0012]本专利技术目的还在于提供一种抗抗沙丁胺醇和/或克伦特罗的单克隆抗体，所述抗体包含轻链恒定区和重链恒定区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列。
[0013]本专利技术目的还在于提供一种DNA分子，所述DNA分子编码权利要求1或2所述单克隆抗体的轻链和/或重链。
[0014]优选地，所述DNA分子编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DNA分子编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0015]本专利技术目的还在于提供一种表达载体，所述表达载体包含所述的DNA分子以及与所述DNA分子操作相关的表达调控序列。
[0016]本专利技术目的还在于提供一种采用所述的DNA分子或所述的表达载体转化或转染的宿主细胞。
[0017]本专利技术目的还在于提供一种所述的单克隆抗体在沙丁胺醇和/或克伦特罗检测中的应用。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0019]本专利技术提供的单克隆抗体对沙丁胺醇和克伦特罗具有良好的交叉反应率、高亲和力和高灵敏度，适用于沙丁胺醇和克伦特罗的快速免疫检测，将在沙丁胺醇和克伦特罗检测中发挥重大作用。
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例1制备的4D6抗体(即抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体)的SDS
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PAGE检测结果图，其中MW为蛋白质分子量Marker；1为抗沙丁胺醇和/或克伦特罗单克隆抗体。
[0021]图2为4D6抗体与沙丁胺醇(SAL)的复合体预测结构图。
[0022]图3为4D6抗体的亲和力成熟结果图，4D6H1和4D6H2分别为4D6单克隆抗体的突变体。
[0023]图4为4D6抗体与不同β
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兴奋剂(分别为沙丁胺醇、克伦特罗、特布他林、莱克多巴胺和非诺特罗)的ELISA结果。
具体实施方式
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完
整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]实施例1：抗沙丁胺醇/克伦特罗的单克隆抗体的制备
[0026]1、用沙丁胺醇半抗原在噬菌体抗体库中经过4轮“吸附
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洗脱
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扩增”的富集筛选，获得抗沙丁胺醇的单链(scFv)抗体，然后通过PCR扩增测序获得抗体的可变区序列，分别为轻链可变区序列SEQ ID NO.3和重链可变区序列SEQ ID NO.4，其中亲和力最高的克隆为4D6细胞株。
[0027]2、根据步骤1所获得的轻链和重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗沙丁胺醇和/或克伦特罗的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，或者是所述SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，或者是所述SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区包含如下互补决定区：氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的LCDR1、SEQ ID NO.6所示的LCDR2和SEQ ID NO.7所示的LCDR3；所述重链可变区包含如下互补决定区：氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示的HCDR1、SEQ ID NO.9所示的HCDR2和SEQ ID NO.10所示的H...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨广博，刘明，刘斌，孔韧，常珊，
申请(专利权)人：江苏理工学院，
类型：发明
国别省市：