一种耐盐碱草酸青霉菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种耐盐碱草酸青霉菌剂及其制备方法和应用。本发明专利技术的耐盐碱草酸青霉菌剂的制备方法，包括如下步骤：S1：对保藏编号为CGMCC No.12628的草酸青霉菌进行驯化；S2：在高盐碱条件下对驯化后的草酸青霉菌进行发酵；其中，高盐碱条件包括：盐浓度为10％以上和pH值为11以上。本发明专利技术对草酸青霉菌CGMCC No.12628进行驯化，能够在高盐碱条件下发酵产孢，制备得到的耐盐碱草酸青霉菌剂不仅具有明显的促生效果，同时可以应用于极端的重度盐碱土环境，在恶劣的自然条件下仍能保持较高的存活率，并且有效改善了土壤的pH环境。并且有效改善了土壤的pH环境。

【技术实现步骤摘要】
一种耐盐碱草酸青霉菌剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及环境生物
，尤其是涉及一种耐盐碱草酸青霉菌剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]CN 103695317 A公开了一种具有耐受重金属特性的草酸青霉菌剂的生产方法，高效解磷草酸青霉菌是从湖南省湘西州花垣县的铅锌矿表层土壤中分离筛选出来的，具有耐受多种重金属的特性；该生产方法主要是以甘薯淀粉废水和菌糠废渣为主要培养基原料，采用液态
‑
固态联合发酵的方法进行培养，在培养过程中pH接近中性。
[0003]CN 110499256 A公开了一种降解有机酸臭的草酸青霉菌及其放大培养方法，从堆积的奶牛养殖粪便采集样本，将样本接种于筛选培养基，筛选培养基中加入了多种抗生素、多种有机酸、吲哚和粪臭素对样本中的菌进行诱导驯化培养并分离纯化，得到草酸青霉DH
‑
1，该草酸青霉DH
‑
1的处理温度为25
‑
40℃，pH值为4.0
‑
9.5，在此温度和pH值条件下，草酸青霉DH
‑
1的生长速度最快，降解效率最高。
[0004]CN 110484452 A公开了一种能降解稻草产2
‑
苯乙醇的草酸青霉及其应用，草酸青霉T1具有良好的纤维素降解能力，能够产生纤维素酶，且具有较强的内切葡萄糖苷酶活性、滤纸酶活性、外切酶活性和β
‑
葡萄糖苷酶活性，能够降解稻草秸秆产生2
‑
苯乙醇，该降解纤维素菌株的筛选培养基的pH 7.0，种子培养基pH 6.0，发酵产酶培养基pH自然。
[0005]CN 101914450 B公开了一种堆肥生物脱水真菌菌剂及其制备方法，该菌剂以草酸青霉菌株F12 CGMCCNo.3682为菌种，菌剂接入高含水率畜禽粪便发酵10
‑
15天后，含水量可下降10
‑
20％，生产发酵罐培养基pH4
‑
6。青霉菌株F12的最适产酶pH值在5
‑
6之间，该菌株的CMCase和FPA表现基本一致，在pH值5
‑
6以外，随着pH值增大或减小，CMCase和FPA均有减小的趋势，当pH值达到9时，几乎测不到酶活。
[0006]现有的草酸青霉菌虽然具有显著的解磷效果，然而只能在中性、偏酸或是弱碱性环境下才能生长繁殖发挥作用，在碱性环境下难以生长。据世界联合国教科文组织和世界联合国粮食与农业组织不完全统计，全球盐碱地占世界面积10亿hm2，我国盐碱地占地面积1亿hm2，排第三位。我国作为农业、人口大国，如何采取有效措施进行防控和改良盐碱地，使土地资源得到有效利用，是迫切需要解决的问题。
[0007]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种耐盐碱草酸青霉菌剂及其制备方法和应用，该耐盐碱草酸青霉菌剂具有明显的促生效果，可以应用于极端的重度盐碱土环境，在恶劣的自然条件下仍能保持较高的存活率，并且有效改善了土壤的pH环境。
[0009]本专利技术提供一种耐盐碱草酸青霉菌剂的制备方法，包括如下步骤：
[0010]S1：对保藏编号为CGMCC No.12628的草酸青霉菌进行驯化；
[0011]S2：在高盐碱条件下对驯化后的草酸青霉菌进行发酵。
[0012]本专利技术的草酸青霉菌已于2016年6月23日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.12628。
[0013]本专利技术的高盐碱条件指的是盐含量和碱含量较高的条件，对高盐碱条件不作严格限制；具体地，高盐碱条件可以包括：盐浓度为10％以上、pH值为11以上。
[0014]在本专利技术中，驯化包括耐盐碱驯化；具体地，耐盐碱驯化可以包括：采用不同盐浓度梯度和碱浓度梯度的培养基对草酸青霉菌进行驯化培养；驯化培养时，可以从低浓度梯度至高浓度梯度逐级培养。对盐浓度梯度和碱浓度梯度不作严格限制，盐浓度梯度例如可以设置为：质量含量依次为0％、2％、5％、7％、10％的NaCl；碱浓度梯度例如可以设置为：pH值依次为pH6、pH8、pH9、pH10、pH11。
[0015]进一步地，驯化还可以包括耐盐碱定向驯化；耐盐碱定向驯化包括采用添加高盐碱物料浸出液的培养基对经上述耐盐碱驯化的草酸青霉菌继续进行驯化培养。对高盐碱物料浸出液中的高盐碱物料不作严格限制，可根据实际的应用需求进行选择；具体地，高盐碱物料可以包括味精渣、碱解海藻渣和厨余垃圾堆肥发酵物料中的至少一种，其中：碱解海藻渣为碱解工艺产生的海藻渣，厨余垃圾堆肥发酵物料为厨余垃圾经堆肥发酵后的物料。
[0016]在一实施方式中，高盐碱物料可以包括物料A和物料B，其中物料A为味精渣，物料B为碱解海藻渣或厨余垃圾堆肥发酵物料；高盐碱物料中物料A与物料B的质量比可以为(1.5
‑
2.5)：1，优选为2：1。
[0017]高盐碱物料浸出液指的是高盐碱物料的浸出液，对其制备方法不作严格限制，例如可以包括：将高盐碱物料与水混合后搅拌、静置、取上清液，即得到高盐碱物料浸出液；其中，高盐碱物料与水质量体积比可以为1g：(1.5
‑
2.5)mL；培养基中高盐碱物料浸出液的浓度可以为15
‑
25％，例如20％。
[0018]在本专利技术中，发酵可以采用固态发酵方式；固态发酵原料包括味精渣、碱解海藻渣和厨余垃圾堆肥发酵物料中的至少一种。具体地，固态发酵原料包括物料A和物料B，其中物料A为味精渣，物料B为碱解海藻渣或厨余垃圾堆肥发酵物料；固态发酵原料中物料A与物料B的质量比为(1.5
‑
2.5)：1。
[0019]对固态发酵方法不作严格限制，可以包括：
[0020]将培养好的种子液培养物加入固态发酵原料中，接种量不低于1
×
104cfu/g物料，于28
‑
30℃下恒温培养7
‑
10天，得到耐盐碱草酸青霉菌剂；其中，种子液培养物的接种量可以为15
‑
25％(m/m)。
[0021]其中，种子液培养物的制备方法可以包括：
[0022]将驯化后的草酸青霉菌的活化孢子粉、分散剂和无菌水混合，制得孢子菌悬液；
[0023]将孢子菌悬液接种于灭菌的液体种子培养基中，于28
‑
30℃下恒温震荡培养60
‑
68h，得到种子液培养物。
[0024]具体地，分散剂可以为甘油或吐温80；孢子菌悬液中孢子浓度不低于3
×
107cfu/mL；孢子菌悬液的接种量可以为2
‑
4％(V/V)。
[0025]进一步地，本专利技术的耐盐碱草酸青霉菌剂的制备方法，还包括步骤S3：对发酵产物进行粉碎、干燥、过筛，得到耐盐碱草酸青霉菌剂；该耐盐碱草酸青霉菌剂的有效活菌数不低于2...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种耐盐碱草酸青霉菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：对保藏编号为CGMCC No.12628的草酸青霉菌进行驯化；S2：在高盐碱条件下对驯化后的草酸青霉菌进行发酵；优选地，高盐碱条件包括：盐浓度为10％以上和pH值为11以上。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，驯化包括耐盐碱驯化；耐盐碱驯化包括：采用不同盐浓度梯度和碱浓度梯度的培养基对草酸青霉菌进行驯化培养；优选地，盐浓度梯度为0％、2％、5％、7％、10％的NaCl；碱浓度梯度为pH6、pH8、pH9、pH10、pH11。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，驯化还包括耐盐碱定向驯化；耐盐碱定向驯化包括采用添加高盐碱物料浸出液的培养基对草酸青霉菌进行驯化培养，高盐碱物料包括味精渣、碱解海藻渣和厨余垃圾堆肥发酵物料中的至少一种；优选地，高盐碱物料包括物料A和物料B，其中物料A为味精渣，物料B为碱解海藻渣或厨余垃圾堆肥发酵物料；优选地，高盐碱物料中物料A与物料B的质量比为(1.5
‑
2.5)：1。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，高盐碱物料浸出液的制备方法包括：将高盐碱物料与水混合后搅拌、静置、取上清液，得到高盐碱物料浸出液；优选地，高盐碱物料与水质量体积比为1g：(1.5
‑
2.5)mL；优选地，培养基中高盐碱物料浸出液的浓度为15
‑
25％。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，发酵为固态发酵；固态发酵原料包括味精渣、碱解海藻渣和厨余垃圾堆肥发酵物料中的至少一...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙杉杉，徐延平，葛振宇，徐志文，
申请(专利权)人：领先生物农业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：