真菌筛选试剂、筛选方法、试剂盒及应用技术

本发明专利技术涉及菌落筛选领域，尤其涉及真菌筛选试剂、筛选方法、试剂盒及应用。本发明专利技术提供了本发明专利技术提供了溶菌试剂，包括如下组分：山梨醇0.8～1.1mol/L，EDTA 10～20mol/L，蜗牛蛋白酶5～60mg/mL。本发明专利技术第一次将CRISPRCas12a技术应用于真菌菌落筛选，并基于其技术原理进行了改进优化，使得其更适用于高通量筛选。在质粒设计上，本发明专利技术创造性的在基因末端引入PAM序列，使得所有的crRNA序列均可同时识别基因片段和载体片段。此外本发明专利技术利用自动化设备，大批次的筛选反应体系及条件，使其充分适用于菌落筛选的自动化方案，极大缩短了筛选时间，大大提升了菌种选育速度和菌种筛选效率。大提升了菌种选育速度和菌种筛选效率。

【技术实现步骤摘要】
真菌筛选试剂、筛选方法、试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及菌落筛选领域，尤其涉及真菌筛选试剂、筛选方法、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]在工程菌改造过程中，常需要筛选出阳性单克隆菌落，以进行下一步改造和培养。在现有的方法中，菌落PCR作为最快捷方便的筛选方法广泛应用于工程菌阳性单克隆筛选工作中。而对于真菌，由于其所具有的细胞壁和染色体结构，使其在进行菌落PCR时需要进行样品预处理：
[0003]取对数生长期酵母菌株1.5mL，13000r/min，离心15s，去上清，双蒸水洗涤一次，13000r/min离心15s，沉淀悬浮于200μL TE缓冲液中，在沸水上煮1～10min，冰浴10min，13000r/min，离心5min，将上清液储存于
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20℃取1μL用于PCR。或者，取直径大于3mm的酵母干菌落，至于EP管中盖上盖子，在微波炉中加热，加入30μL TE振荡，13000r/min，离心2～5min，上清储存浴
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20℃，取1μL来作PCR。然后通过对扩增序列的大小进行分析对比，来达到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.溶菌试剂，其特征在于，包括如下组分：山梨醇
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0.8～1.1mol/LEDTA
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10～20mol/L蜗牛蛋白酶
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5～60mg/mL。2.检测试剂，其特征在于，包括如下组分：1μM crRNA
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20～200nM10nM Cas12a蛋白
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0.2～0.5nM1nM荧光报告分子
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0.1～0.5nM10*Buffer与ddH2O的体积比为1:6。3.如权利要求2所述检测试剂的所述crRNA的设计方法，包括在目的基因上选择PAM...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄鹤，方欣，赵弘，于铁妹，潘俊锋，刘建，
申请(专利权)人：深圳瑞德林生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：