马齿苋中Oleraze和Oleraoxazineacid及其提取分离方法技术

本发明专利技术涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从马齿苋中提取、分离和鉴别出的新生物碱Oleraze（1）和Oleraoxazine acid（2）及其提取分离方法。所述的新化合物，分子式分别为C4H4N4O2、C6H5NO5，分别命名为Oleraze（1）和Oleraoxazine acid（2）。还提供上述新化合物的提取分离方法，水煎煮提取、硅胶柱层析、聚酰胺柱层析，硅胶柱层析，Sephadex LH

【技术实现步骤摘要】
马齿苋中Oleraze和Oleraoxazine acid及其提取分离方法


[0001]本专利技术涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从马齿苋药材中提取、分离和鉴别出的新化合物及其提取分离方法。

技术介绍

[0002]马齿苋(Portulaca oleracea L.)，又名长命菜、马苋菜，为马齿苋科植物。马齿苋耐旱耐涝，且耐光耐阴，分布广泛、资源丰富，作为药食两用的野生植物备受关注。2020版《中华人民共和国药典》中收载马齿苋的干燥地上部分入药，具有清热解毒、凉血止血、止痢等功效，用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血、崩漏下血等。
[0003]马齿苋现代药理学研究表明，其具有抗炎止痛、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂、抗氧化、抗癌、松弛骨骼肌和平滑肌、调节免疫功能等作用。研究表明马齿苋众多化学成分为其多样的药理作用提供了物质基础，马齿苋主要化学成分包括黄酮类、香豆素类、萜类、甾类、有机酸类、挥发油、生物碱类、氨基酸类、各种色素类和矿物质类等。其中生物碱是马齿苋中一类主要的化学成分，目前已报道的生物碱类成分有去甲肾上腺素、多巴胺、少量多巴、腺苷、尿嘧啶、腺嘌呤、N，N
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二环己基脲、尿囊素、N
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反式
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阿魏酰基酪胺；还有环二肽生物碱和酰胺类生物碱：马齿苋酰胺A
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S。
[0004]目前从马齿苋中分离出的化学成分大多数是已知的，且结构新颖性较低，因此，对马齿苋中新化合物的开发和分离是亟待需要的。

技术实现思路
<br/>[0005]针对上述问题，本专利技术提供Oleraze和Oleraoxazine acid及其提取分离方法，具体为从马齿苋中提取的新生物碱Oleraze和Oleraoxazine acid，经研究发现本专利技术的新化合物具有抗炎、抗肿瘤的作用，同时提供一种针对本专利技术新化合物的简便、快速、环保、纯度高的提取分离方法。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0007]本专利技术提供一种从马齿苋药材中分离出的两种生物碱化合物，其特征在于，所述化合物包括如下两种：分子式分别为C4H4N4O2、C6H5NO5，命名为Oleraze(1)和Oleraoxazine acid(2)，化学结构式为：
[0008]为实现本专利技术的上述目的，本专利技术还提供一种上述生物碱Oleraze和Oleraoxazine acid化合物的提取分离方法，具体步骤为：
步骤1：取马齿苋干燥药材，采用水煎煮提取两次，水提液过滤，合并滤液直接加热浓缩，放凉至室温，得药液备用；步骤2：将步骤1中的药液蒸干后上硅胶柱，用乙酸乙酯洗脱，减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯提取物；步骤3：将步骤2中的乙酸乙酯提取物经聚酰胺柱分离，采用乙醇∶水梯度洗脱；步骤4：将步骤3中所得50％乙醇部分再经硅胶柱进行层析分离，用乙酸乙酯、乙酸乙酯:甲醇和甲醇进行洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测、显色，将各显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得到浓缩物备用；步骤5：将步骤4中所得物再经预处理的Sephadex LH
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20凝胶柱层析分离，用甲醇洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用；步骤6：将步骤5中的浓缩物通过HPLC分离制备，以甲醇∶0.1％甲酸水为流动相进行等度洗脱，最终得到本专利技术所述的新化合物。
[0009]进一步地，所述步骤1中水煎煮提取两次，每次2小时，水用量为药材的10倍。
[0010]进一步地，所述步骤2中所用乙酸乙酯洗脱程序为等度洗脱。
[0011]进一步地，所述步骤3中所用洗脱程序采用体积比为0∶100、30∶70、50∶50、70∶30和100∶0乙醇∶水进行梯度洗脱。
[0012]进一步地，所述步骤4中的硅胶层析分离用乙酸乙酯、体积比为5:1、3:1和1:1的乙酸乙酯:甲醇和甲醇进行梯度洗脱。
[0013]进一步地，所述步骤5中的Sephadex LH
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20凝胶的预处理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，以初始流动相平衡。
[0014]进一步地，所用步骤5中所用甲醇等度洗脱。
[0015]进一步地，所述步骤6中所用甲醇∶0.1％甲酸等度洗脱中甲醇和水的体积比为10∶90(1)、15∶85(2)，保留时间分别为2.713min(1)、7.845min(2)。
[0016]与现有技术相比本专利技术的有益效果。
[0017]本专利技术中所述马齿苋新生物碱Oleraze(1)和Oleraoxazine acid(2)的分离和药理活性研究未被现有论文期刊所报道。本专利技术提供来源于马齿苋的新化合物及一种针对本专利技术新化合物的提取分离方法，依次采用水煎煮提取、硅胶柱层析、聚酰胺柱层析，硅胶柱层析，Sephadex LH
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20及HPLC进行分离纯化与制备，成功提取分离出一种新生物碱Oleraze。该方法操作步骤仅为六步，操作方法简便及快速，提取分离过程主要采用水煎煮提取及乙酸乙酯洗脱，工艺方法环保，且经该方法分离得到的化合物纯度较高且大于90％。此外经研究表明该新化合物具有抗炎作用，因此本专利技术新化合物及其盐和衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，亦可用于制备抗炎药物。
附图说明
[0018]图1为本专利技术新化合物Oleraze的高分辨质谱图。
[0019]图2为本专利技术新化合物Oleraze的1H
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NMR光谱图。
[0020]图3为本专利技术新化合物Oleraze的
13
C
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NMR光谱图。
[0021]图4为本专利技术新化合物Oleraze的HMBC光谱图。
[0022]图5为本专利技术新化合物Oleraoxazine acid的高分辨质谱图。
[0023]图6为本专利技术新化合物Oleraoxazine acid的1H
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NMR光谱图。
[0024]图7为本专利技术新化合物Oleraoxazine acid的
13
C
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NMR光谱图。
[0025]图8为本专利技术新化合物Oleraoxazine acid的HMBC光谱图。
具体实施方式
[0026]以下实施例将有助于对本专利技术的了解，但这些实施例仅为了对本专利技术加以说明，本专利技术并不限于这些内容。在实施例中的操作方法均为本
常规操作方法。
[0027]实施例1。
[0028]本专利技术提供两种新化合物，分子式分别为C4H4N4O2、C6H5NO5，分别命名为Oleraze(1)和Oleraoxazine acid(2)，化学结构式分别为：
[0029]所述新化合物根据结构分别命名为3
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amino
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3H
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1,3,5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.从马齿苋药材中分离出的生物碱Oleraze和Oleraoxazine acid，其特征在于，所述化合物的分别为C4H4N4O2、C6H5NO5，并且根据结构分别命名为3
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amino
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3H
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1,3,5
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triazepine
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6,7
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dione（1）、4H
‑
1,4
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oxazine
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2,6
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dicarboxylic acid（2），其化学结构式如下：。2.一种如权利要求1所述的生物碱Oleraze和Oleraoxazine acid化合物的提取分离方法，其特征在于，提取分离方法的具体步骤为：步骤1：取马齿苋干燥药材，采用水煎煮提取两次，水提液过滤，合并滤液直接加热浓缩，放凉至室温，得药液备用；步骤2：将步骤1中的药液蒸干后上硅胶柱，用乙酸乙酯洗脱，减压回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯提取物；步骤3：将步骤2中的乙酸乙酯提取物经聚酰胺柱分离，采用乙醇∶水梯度洗脱；步骤4：将步骤3中所得50%乙醇部分再经硅胶柱进行层析分离，用乙酸乙酯、乙酸乙酯:甲醇和甲醇进行洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测、显色，将各显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得到浓缩物备用；步骤5：将步骤4中所得物再经预处理的Sephadex LH
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20凝胶柱层析分离，用甲醇洗脱，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：英锡相，兰秀娟，刘佩山，王呈玉，王金焕，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：