一种Au与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物制备以及协同诱导肿瘤细胞凋亡的应用制造技术

一种Au与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物制备以及协同诱导肿瘤细胞凋亡的应用，涉及抗肿瘤药物领域。将金盐溶液与含有巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽混合；在一定温度及pH条件下，发生氧化还原反应，将高价Au离子还原为Au原子或一价Au离子，Au通过作用于多肽的巯基，形成复合物AuP；含巯基抗凋亡蛋白拮抗肽选自具有拮抗细胞内抗凋亡蛋白功能的多肽。本发明专利技术的AuP复合物具有广谱的抗肿瘤活性，相较普通的肽金复合物或金化合物，可抑制硫氧还蛋白还原酶的活性，同时拮抗高表达的抗凋亡蛋白的功能，实现单药双靶的协同增效作用，显著提高疗效。可用于治疗慢性淋巴细胞白血病、急性单核细胞性白血病和非霍奇金淋巴瘤等多种恶性肿瘤。血病和非霍奇金淋巴瘤等多种恶性肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
一种Au与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物制备以及协同诱导肿瘤细胞凋亡的应用


[0001]本专利技术涉及抗肿瘤药物领域，具体为一种可用于慢性淋巴细胞白血病等恶性肿瘤治疗的多肽
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Au复合物的制备方法及该类复合物在肿瘤细胞中协同诱导凋亡的应用。

技术介绍

[0002]与正常组织细胞相比，多种恶性肿瘤细胞(例如慢性淋巴细胞白血病细胞)具有较高的胞内活性氧(ROS)水平，使细胞处于氧化应激压力下，对于诱导活性氧升高的药物更加敏感。硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是哺乳动物细胞中调控氧化还原平衡最主要的酶，成为该类肿瘤治疗的有效靶点。但是，部分肿瘤细胞高表达线粒体抗凋亡蛋白(例如BCL
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2)，可以抵制化疗药诱导的细胞凋亡。使用含有巯基的多肽与金的复合物可以显著抑制硫氧还蛋白还原酶，提升细胞内活性氧水平超过细胞承受阈值，从而引起肿瘤细胞凋亡，但针对高表达抗凋亡蛋白的肿瘤细胞，需要很高的金剂量才能克服凋亡抵抗，这会引起剂量相关的副作用。因此，同时抑制TrxR酶活和拮抗抗凋亡蛋白，可以协同诱导该类肿瘤细胞凋亡，达到高效低毒治疗的目的。目前没有报道研究金与抗凋亡蛋白拮抗肽复合物的合成方法及其抑制肿瘤生长的效应。

技术实现思路

[0003]针对某些具有较高胞内活性氧水平，高表达抗凋亡蛋白的恶性肿瘤细胞，会抵抗化疗药诱导细胞凋亡的问题，本专利技术提供了一种新型的复合药物，即金与抗凋亡蛋白拮抗肽形成的复合物。确定了其合成方法及其对慢性淋巴细胞白血病等肿瘤的抑制活性与应用。
[0004]本专利技术涉及一种金与含巯基多肽复合物的制备及应用，涉及肿瘤治疗领域，是将金的盐溶液与含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽在特定温度下进行混合搅拌，高价金会被还原成金原子和低价金离子。本专利技术可以用于慢性淋巴细胞白血病等肿瘤的治疗，相较普通的无拮抗功能的肽金复合物，可实现单药双靶的协同作用，其中金可以抑制硫氧还蛋白还原酶的活性，引起肿瘤细胞内活性氧水平升高，从而诱导凋亡，而拮抗肽则可以抑制抗凋亡蛋白功能，使肿瘤细胞对化疗药诱导的凋亡更加敏感，显著提高疗效。
[0005]一种金与抗凋亡蛋白拮抗肽反应形成的复合物，其特征在于，所述的复合物的分子组成(Au)x(P)y，x＝1～30，y＝1～20，所述的P为抗凋亡蛋白拮抗肽，Au作用于多肽中的巯基。
[0006]金与抗凋亡蛋白拮抗肽的巯基反应形成的复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将金盐溶液与含巯基的多肽混合形成混合液，在一定温度及pH条件下，使该混合液体系发生氧化还原反应，金通过与多肽的巯基相作用，形成所述(Au)x(P)y复合物。
[0007]所述的肽分子具有针对抗凋亡蛋白的拮抗功能，例如针对抗凋亡蛋白BCL
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2、MCI
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1和BCL
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xL等。
[0008]所述的金盐溶液中金化合物为三价无机盐类化合物，如氯金酸。其中所述三价金被还原为金原子或/和一价金。
[0009]在混合溶液中巯基肽的浓度为1μM～10M，金盐浓度为1μM～8M。巯基肽化合物与金盐的最适摩尔比为1:1
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1:3。
[0010]其中所述反应温度为1～100℃，pH条件为酸性、中性或碱性，可根据需要调节、选择。
[0011]所述混合液发生氧化还原反应，溶液颜色由黄色发生转变后，在10～100℃搅拌5min
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2h，室温避光静置24
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48小时，随后超滤纯化得到纳米级AuP复合物。AuP复合物的水合粒径一般不大于5nm。
[0012]所述金与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物的应用，用于制备抗肿瘤药物。所述的肿瘤包括但不局限于慢性淋巴细胞白血病、急性单核细胞性白血病和非霍奇金淋巴瘤等多种恶性肿瘤。
[0013]所述的金与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物的应用，用于制备诱导癌细胞凋亡的药物。
[0014]所述的癌细胞包括但不局限于慢性淋巴细胞白血病细胞、急性单核细胞性白血病细胞和非霍奇金淋巴瘤细胞等多种癌细胞。
[0015]本专利技术所述的抗凋亡蛋白拮抗肽与金的复合物应用于肿瘤的治疗，相较于现有的化疗药物，可以将多肽的拮抗抗凋亡蛋白功能和金的抑制硫氧还蛋白还原酶活性整合在同一个化合物上，实现了单药内部的协同治疗作用，降低药物起效剂量，大大提高药物疗效。同时该复合物是通过线粒体凋亡途径安全无害地引起肿瘤细胞的死亡，减少对正常组织细胞的毒副作用。
[0016]附图说明，图中P指巯基肽，B1C指的是AuP复合物，所有的复合物剂量均用金元素的剂量表示
[0017]图1a为本专利技术实施例1的AuP的紫外可见吸收光谱图；
[0018]图1b为本专利技术实施例1的AuP的荧光光谱图，EX代表激发光谱，EM代表发射光谱；
[0019]图1c为本专利技术实施例1的AuP的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱图；
[0020]图2a为本专利技术实施例2的AuP对慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1的细胞毒性统计图；
[0021]图2b为本专利技术实施例2的AuP引起的慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1的细胞凋亡统计图；
[0022]图2c为本专利技术实施例2的AuP引起的慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1线粒体膜电势变化图；图2d为本专利技术实施例2的AuP引起的慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1的凋亡通路检测图(图2d中三幅图2d
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1，2d
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2，2d
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3检测的是凋亡通路的三个蛋白PARP,caspase9,caspase3的活化情况，裂解的形式含量越高代表活化越强，相对于未加药组活化程度越高代表凋亡通路活化的程度越高)；
[0023]图3a为本专利技术实施例3的AuP对慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1的硫氧还蛋白还原酶的活性抑制统计图；
[0024]图3b为本专利技术实施例3的AuP引起的慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1的活性氧水平的升高图。
[0025]图4a为本专利技术实施例4的AuP对慢性淋巴细胞白血病细胞MEC
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1细胞中的抗凋亡蛋白的表达量抑制图。
具体实施方式
[0026]体现本专利技术特征与优点的典型实施方式将在以下的说明中详细叙述。应理解的是本专利技术能够在不同的实施方式上具有各种的变化，其皆不脱离本专利技术的范围，且其中的说明及图示在本质上是当作说明之用，而非用以限制本专利技术。
[0027]本专利技术提供了一种新型的金与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物的制备方法及其抗肿瘤应用，本质上说是金与拮抗肽中的巯基反应形成金硫键，包括，提供金元素的盐溶液，将所述金盐溶液与小肽溶液混合，在一定温度和PH下，使混合液发生氧化还原反应，将所述金盐中的高价金还原为金原子或低价金离子，所述巯基由拮抗肽提供。
[0028]优选地，可以向所述混合液中加入弱碱，提供弱碱性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金与含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽反应形成的复合物，所得复合物记为AuP，其特征在于所述的AuP复合物的分子组成(Au)x(P)y，x＝1～30，y＝1～20，其中P指的是水溶性的含巯基肽分子。2.按照权利要求1所述的一种金与抗凋亡蛋白拮抗肽的巯基反应形成的复合物，其特征在于，肽分子为具有靶向拮抗细胞内抗凋亡蛋白性能的功能肽。3.按照权利要求1或2所述的一种金与含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物AuP，其特征在于，所述的复合物AuP的水合粒径为1～5nm。4.制备权利要求1
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3任一项所述的一种金与含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物AuP的方法，其特征在于，包括以下步骤：将可溶性的Au化合物溶液与含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽混合，形成混合液，在一定温度及pH条件下，使所述混合液体系发生氧化还原反应，所述Au原子通过作用于多肽的巯基，形成所述复合物AuP。5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，所述含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽选自具有拮抗细胞内抗凋亡蛋白功能的多肽，优选BCL2蛋白家族BH3
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only蛋白中与抗凋亡蛋白BCL
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2、MCL
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1或BCL
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XL结合的多肽序列。6.按照权利要求4所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁卿，姚亚文，高学云，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：