维生素B6杂质化合物的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种维生素B6降解杂质对照品的制备、分离、纯化方法，该方法可低成本、快速、大量制备高纯度B6降解杂质对照品，解决了目前维生素B6原料及其制剂质量控制和杂质研究中存在的杂质对照品缺乏问题。为进一步提高维生素B6及其制剂产品质量安全性和保障消费者身体健康等提供了有利的技术支持，具有重要的现实意义。实意义。实意义。

【技术实现步骤摘要】
维生素B6杂质化合物的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及化学制药领域。更具体的说，本专利技术涉及维生素B6原料药及上市产品中杂质的制备、标化及结构鉴定，以及其作为杂质对照品的应用。

技术介绍

[0002]维生素B6，又名吡哆素。英文名：Vitamin B6(缩写：VB6)，中文化学名：6
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甲基
‑5‑
羟基
‑
3，4
‑
吡啶二甲醇盐酸盐，化学结构式，如下式（I）：维生素B6作为一种水溶性维生素，在酵母、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素B6为人体内辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系。维生素B6注射液最早于1957年在日本上市，规格1ml:10mg和1ml:30mg。临床上的适应症包括，适用于维生素B6缺乏的预防和治疗；防治异烟肼中毒；用于妊娠、放射病及抗癌药所致的呕吐；脂溢性皮炎等。维生素B6注射液也用于全胃肠道外营养及因摄入不足所致营养不良、进行性体重下降时维生素B6的补充。另外，下列情况对维生素B6需要量增加：妊娠及哺乳期、甲状腺功能亢进、烧伤、长期慢性感染、发热、先天性代谢障碍病（胱硫醚尿症、高草酸盐症、高胱氨酸尿症、黄嘌呤酸尿症）、充血性心力衰竭、长期血液透析、吸收不良综合症伴肝胆系统疾病（如酒精中毒伴肝硬化）、肠道疾病（乳糜泻、热带口炎性肠炎、局限性肠炎、持续腹泻）、胃切除术后。新生儿遗传性维生素B6依赖综合征。
[0003]作为医药产品，目前维生素B6上市剂型有片剂及注射液。另外作为肠外营养产品、保健品、饲料中均添加了维生素B6。维生素B6对光、热、强碱均不稳定，因此，其产品中很容易产生降解杂质。但目前官方药典收载的维生素B6产品的质量标准中除原料药中规定了特定杂质EP杂质A及杂质B，其他制剂产品均未规定特定杂质。维生素B6注射液的用法包括皮下注射和静脉注射，如果杂质研究不透彻将严重影响产品临床用药安全性，而现有各官方药典均未对特定杂质进行严格限制。《New dimer of pyridoxol (vitamin B6)》 Journal of Organic Chemistry (1969), 34(6), 1993
‑
6、《Analysis of photo
‑ꢀ
and heat
‑
reaction products of vitamin B6》 Bitamin (1999), 73(10), 599
‑
606、JP11209221A、JP11080122A对杂质的降解途径进行了报道，但无详细的杂质制备方法，无法提供维生素B6质量控制及质量研究必须用到的杂质对照品制备方法。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的问题，本专利技术提供了一种分离制备这类杂质对照品的方法，且该方法是一种通用性的方法，同样适用于其他大极性、酸性条件带电荷、常规反相色谱、正相
色谱或定向合成很难获得的物质的分离制备方法，同时对制备的杂质对照品进行标化和结构确证，为维生素B6原料药及制剂产品质量研究提供杂质对照品，提高药品的质量和安全性。
[0005]本专利技术提供了如下特性的化合物的分离制备方法，这种化合物往往具有如下特征：（1）大极性，即LogD分配系数
(pH1.5
‑
pH7.4)
≤0.0；（2）具有弱碱性或强碱的解离常数；（3）酸性条件下稳定，中性或碱性条件下不稳定；（4）酸性条件一般以带电荷形式存在；（5）酸性条件常规反相色谱条件无合适保留或不保留，峰形较差，很难进行准确定量；正相色谱因这类物质极性太大不适用；（6）以维生素B6为例，其原料药以盐酸盐的形式作为药用原料药使用，其原料药制备过程、贮藏过程产生的杂质或副产物一般具有与维生素B6相似或相近的结构特征，从而具有相似的物理化学特性参数。
[0006]（7）开发了专属性更强、灵敏度更高的维生素B6产品有关物质的检测方法，并实现所有杂质在同一色谱条件下灵敏、准确检出。
[0007]本专利技术以如下在维生素B6注射液生产、贮藏和使用过程最易产生的降解杂质为例来详述这类物质的制备方法，这几个降解杂质（式（II）、式（III）、式（IV）、式（V））的化学结构如下：
具体地，本专利技术通过以下技术方案加以实现：1.维生素B6杂质化合物的制备方法，包括以下步骤：1）制备维生素B6杂质化合物的富集母液；2）使用HPLC法检测维生素B6杂质化合物的生成情况；
3）采用以硅胶表面键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为填料的制备色谱柱对步骤1）得到的富集母液进行分离，同时使用液相色谱
‑
质谱联用仪进行定性和纯度分析；4）将步骤3）中得到的高纯度的目标馏分进行合并收集；5）将步骤4）中收集的馏分进行减压处理，得到维生素B6杂质化合物的含盐产物；6）采用中压制备液相色谱对含盐产物进行除盐，合并所有收集的目标馏分；7）将步骤6）中得到的目标馏分进行减压浓缩，得到维生素B6杂质化合物；其中所述维生素B6杂质化合物选自以下化合物：。
[0008]2. 维生素B6杂质化合物的制备方法，包括以下步骤：1）制备维生素B6杂质化合物的富集母液；2）使用HPLC法检测维生素B6杂质化合物的生成情况；3）采用以硅胶表面键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为填料的制备色谱柱对步骤1）得到的富集母液进行分离，同时使用液相色谱
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质谱联用仪进行定性和纯度分析；4）将步骤3）中得到的高纯度的目标馏分进行合并收集；5）将步骤4）中收集的馏分进行减压蒸馏，得到维生素B6杂质化合物；其中所述维生素B6杂质化合物为：
[0009]3. 根据项1或2所述的方法，其中，所述步骤1）中所述制备维生素B6杂质化合物的富集母液是在加剧高温、光照或氧化条件下进行的。
[0010]4.根据项3所述的方法，其中，所述高温为75℃至100℃。
[0011]5. 根据项4所述的方法，其中，所述高温为80℃。
[0012]6. 根据项1或2所述的方法，其中，所述步骤2）中HPLC法检测的检测条件如下：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的GL Sciences Inertsil ODS
‑
3，250mm
×
4.6mm，5μm；以用磷酸调节pH值至2.8的0.04%戊烷磺酸钠溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为210nm；柱温20℃；进样体积10 μl
。
[0013]7. 根据项1或2所述的方法，其中，所述步骤3）中的色谱柱为Waters XBridge Prep Shield RP18，5μm，30
×
150mm或快速分离柱。
[0014]8. 根据项7所述的方法，其中，所述快速分离柱为40g快速分离柱或80g快速分离柱。
[0015]9. 根据项1或2所述的方法，其中，所述步骤3）中的液相色谱...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.维生素B6杂质化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：制备维生素B6杂质化合物的富集母液；步骤2：使用HPLC法检测维生素B6杂质化合物的生成情况；步骤3：采用以硅胶表面键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为填料的制备色谱柱对步骤1得到的富集母液进行分离，同时使用液相色谱
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质谱联用仪进行定性和纯度分析；步骤4：将步骤3中得到的高纯度的目标馏分进行合并收集；步骤5：将步骤4中收集的馏分进行减压处理，得到维生素B6杂质化合物的含盐产物；步骤6：采用制备液相色谱对含盐产物进行除盐，合并所有收集的目标馏分；步骤7：将步骤6中得到的目标馏分进行减压浓缩，得到维生素B6杂质化合物；其中所述维生素B6杂质化合物选自以下化合物：、或。2.维生素B6杂质化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：制备维生素B6杂质化合物的富集母液；步骤2：使用HPLC法检测维生素B6杂质化合物的生成情况；步骤3：采用以硅胶表面键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为填料的制备色谱柱对步骤1得到的富集母液进行分离，同时使用液相色谱
‑
质谱联用仪进行定性和纯度分析；步骤4：将步骤3中得到的高纯度的目标馏分进行合并收集；步骤5：将步骤4中收集的馏分进行减压蒸馏，得到维生素B6杂质化合物；其中所述维生素B6杂质化合物为：。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤1中制备维生素B6杂质化合物的富集母液是在加剧高温、光照或氧化条件下进行的。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述高温为75℃至100℃。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述高温为80℃。6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤2中HPLC法检测的检测条件如下：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的GL Sciences Inertsil ODS
‑
3，250mm
×
4.6mm，5μ
m；以用磷酸调节pH值至2.8的0.04%戊烷磺酸钠溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为210nm；柱温20℃；进样体积10 μl。7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤3中的色谱柱为Waters XBridge Prep Shield RP18，5μm，30
×
150mm或快速分离柱。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述快速分离柱为40g快速分离柱或80g快速分离柱。9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤3中的液相色谱
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质谱联用仪进行定性和纯度分析的步骤为：取从制备色谱柱收集的目标馏分适量，加水稀释后作为供试品溶液，取供试品溶液10μl，注入液相色谱
‑
质谱联用仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以用甲酸调节pH值至3.0的0.01mol/L甲酸铵溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；柱温30℃；电喷雾正离子模式（ESI+），。10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤4中的高纯度的目标馏分是指纯度不低于95%的目标馏分。11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5中的减压处理为减压浓缩或减压蒸馏。12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤6中的制备液相色谱为以20~35μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填料的快速分离柱或Waters XBridge Prep Shield RP18，5μm，30
×
150mm，以水和甲醇或乙腈为流动相，流速设定为20ml/min
‑
25ml/min。13.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾慧娟，任晓慧，侯伟，李世奇，
申请(专利权)人：北京睿创康泰医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：