DS早期筛查试剂盒、基因芯片和测试仪制造技术

本发明专利技术属于医疗技术领域，具体涉及DS早期筛查试剂盒、基因芯片和测试仪。试剂盒、基因芯片和测试仪所使用的筛查标记物为RRAGA_HUMAN、CSN1_HUMAN、CSPG4_HUMAN、RAD26_HUMAN、A2ML1_HUMAN、LDHB_HUMAN和BASP1_HUMAN。本申请公开的DS早期筛查试剂盒、DS早期筛查基因芯片和DS早期筛查测试仪，能够通过对筛选标记物的基因检测，对唐氏综合症进行有效的早期筛查，具有一定的实用价值和技术进步意义。具有一定的实用价值和技术进步意义。具有一定的实用价值和技术进步意义。

【技术实现步骤摘要】
DS早期筛查试剂盒、基因芯片和测试仪


[0001]本专利技术属于医疗
，具体涉及DS早期筛查试剂盒、基因芯片和测试仪。

技术介绍

[0002]唐氏综合征(down syndrome，DS)即21
‑
三体综合征，又称先天愚型或Down综合征，是由染色体异常(多了一条21号染色体)而导致的疾病。60％患儿在胎内早期即流产，存活者有明显的智能落后、特殊面容、生长发育障碍和多发畸形。1866年，Dr.JohnLangdonDown第一次对唐氏综合征的典型体征包括这类患儿具有相似的面部特征进行完整的描述并发表，因此，这一综合征以其名字命名为唐氏综合征(Down综合征)。1959年证实了唐氏综合征是由染色体异常而导致的。现代医学证实，唐氏综合征发生率与母亲怀孕年龄有相关，系21号染色体的异常，有三体、易位及嵌合三种类型。【本段内容来自百度百科：唐氏综合征】
[0003]唐氏筛查是唐氏综合症产前筛选检查的简称。目的是通过化验孕妇的血液，检测母体血清中甲型胎儿蛋白、绒毛促性腺激素和游离雌三醇的浓度，并结合孕妇的年龄，体重，孕周等方面来判断胎儿患先天愚型、神经管缺陷的危险系数。唐氏筛查结果为“高危”的孕妈妈需要确诊胎儿是否为唐氏综合症患儿。目前产前诊断最常用的技术是羊膜腔穿刺技术，即在B超指引下，将针通过孕妇腹部刺入羊水中，抽取羊水，对胎儿细胞进行染色体分析。【本段内容来自PCbaby百科：唐氏综合症筛查什么时候做】
[0004]因而，对唐氏综合症羊水差异蛋白进行筛选和鉴定，进而开发出专用的DS早期筛查基因组、DS早期筛查试剂盒、DS早期筛查基因芯片以及DS早期筛查测试仪对于DS的防治具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术公开了DS早期筛查试剂盒、DS早期筛查基因芯片以及DS早期筛查测试仪，以解决现有技术中存在的技术问题。
[0006]本申请为解决其技术问题而采用的技术方案为为：
[0007]一种DS早期筛查试剂盒，其特征在于：包括能够扩增筛查标记物的引物，所述筛查标记物包括RRAGA_HUMAN、CSN1_HUMAN、CSPG4_HUMAN、RAD26_HUMAN、A2ML1_HUMAN、LDHB_HUMAN和BASP1_HUMAN。
[0008]一种DS早期筛查基因芯片，其特征在于：包括能够与筛查标记物杂交的探针，所述筛查标记物包括RRAGA_HUMAN、CSN1_HUMAN、CSPG4_HUMAN、RAD26_HUMAN、A2ML1_HUMAN、LDHB_HUMAN和BASP1_HUMAN。
[0009]一种DS早期筛查测试仪，其特征在于：使用前述DS早期筛查试剂盒和/或DS早期筛查基因芯片进行唐氏综合症的早期筛查。
[0010]有益的技术效果：
[0011]本申请公开的DS早期筛查试剂盒、DS早期筛查基因芯片和DS早期筛查测试仪，能够通过对筛选标记物的基因检测，对唐氏综合症进行有效的早期筛查，具有一定的实用价
值和技术进步意义。
[0012]以下结合说明书附图和具体实施方式，对本申请的技术方案和技术效果进行详细介绍。
附图说明
[0013]图1：正常组羊水和病例组羊水的二维凝胶电泳扫描结果。
具体实施方式
[0014]本申请公开的唐氏综合症羊水差异蛋白筛查标记物的筛选与鉴定步骤为：
[0015]1、材料与方法
[0016]1.1材料与试剂
[0017]羊水上清标本来源于深圳市宝安区妇幼保健院产前诊断中心,孕周为16
‑
20周,羊膜腔穿剌前均巳签署知情同意书。应用低丰度蛋白富集试剂盒、Bradford测定法蛋白测定试剂盒、3
‑
10两性电解质、2
‑
D蛋白净化试剂盒、血浆血清处理试剂盒、CHAPS两性离子去垢剂、总蛋白提取试剂盒、分离胶缓冲液、IEF样本缓冲液、碘乙酰胺、矿物油、甲叉/丙烯酰胺预混液37.5：1，尿素(Urea)购自伯乐公司，去高丰度蛋白提取试剂盒(Sigma)，SDS、苯甲基磺酰氟(PMSF)、过硫酸铵(Ammonium Persulfate)、硫脲(Thiourea)购自Sigma、考马斯亮蓝G250购自上海生工，DTT购自Solarbio、盐酸、丙酮、三氯乙酸、甲醇、乙醇、冰乙酸均购自广州化学试剂厂。PH4
‑
7/7cm/12胶条、电极滤纸购自伯乐公司、超滤离心管、购自millipore。
[0018]1.2仪器设备
[0019]等电聚焦电泳系统(IEF
TM
System)、垂直电泳仪(PROTEANⅡxi 2
‑
D Cell)、图像分析软件、扫描仪(Model GS
‑
800 Calibrated Imaging)电源(PowerPac
TM
HV)、紫外一可见微量分光光度计(Merinton SMA4000)、台式高速冷冻离心机(Eppendorf)、振荡器，移液器(Thermo)。
[0020]1.3方法
[0021]1.3.1羊水上清分离
[0022]将羊水标本以1500g，离心10min，细胞沉淀部分用于细胞培养和染色体核型分析，上清部分(10ml)立即放入
‑
80℃保存。分别选择正常核型的羊水上清10例、唐氏综合症的核型羊水上清标本10例，用于羊水蛋白组学实验分析。
[0023]1.3.2样本浓缩
[0024]样本取出复温，加入1mmol的苯甲基磺酰氟PMSF，混匀。然后对其进行配平离心，20min12000rpm，离心完后取上清去除下沉淀。而后加到适当的量到10k的超滤管中进行超滤，离心。最后超滤剩下的上层体积约200左右就可以停止超滤了。吸出上层的蛋白液到新的EP管中，置冰上。
[0025]1.3.3去高丰度蛋白
[0026]取400μl树脂均化液，在2.0ml过滤柱离心管内用10000r/min离心10分钟，取出保存液。加入400μl平衡液，离心10分钟，清洗树脂，重复操作一次。取80μl血清样本加入树脂中，吸附10分钟，再离心10分钟，用100μl平衡液洗涤，离心10分钟，加入滤液后，加入4倍体
积的丙酮沉淀，在
‑
20℃下过夜。沉淀蛋白在12000r/min下在4℃离心20分钟，除去上清液，干燥，并在
‑
80℃下保存，以备以后使用。
[0027]1.3.4二维凝胶电泳
[0028]每块凝胶上样500μg，与水合溶液(7M尿素，2M硫脲，2％CHAPS，0.4％DTT，0.5％IPG缓冲液)混匀，装载量为500μl。将IPG胶条(24cm，pH3
‑
10)在平衡缓冲液Ⅰ和Ⅱ中各平衡15分钟，覆盖矿物油。等电聚焦程序为500V 1h
→
1000V 1h
→
8000V 3h
→
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DS早期筛查试剂盒，其特征在于：包括能够扩增筛查标记物的引物，所述筛查标记物包括RRAGA_HUMAN、CSN1_HUMAN、CSPG4_HUMAN、RAD26_HUMAN、A2ML1_HUMAN、LDHB_HUMAN和BASP1_HUMAN。2.DS早期筛查基因芯片，其特征在于：包括能够与筛查标记物杂交的探针，所述筛查标...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉林，
申请(专利权)人：深圳市宝安区松岗人民医院，
类型：发明
国别省市：