一种具有抗衰老和皮肤修复效果的人脐带间充质干细胞活性因子液的制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种具有抗衰老和皮肤修复效果的人脐带间充质干细胞活性因子液的制备方法和应用，其包括以下步骤：1、人脐带间充质干细胞的原代分离与传代培养，饥饿法获取活性因子溶液，对活性因子进行过滤浓缩并冻干；2、本发明专利技术还提供了一种人脐带间充质干细胞活性因子的化妆品。元宝枫籽油与皮肤脂质相似，给皮肤提供多种脂肪酸和维生素，平衡皮肤的渗透力。同时，元宝枫籽油中还含有的特殊功能成分——神经酸（Nervonic Acid），又名鲨鱼酸（Selacholeic Acid），元宝枫籽油脂肪酸组成中神经酸的含量为5%~6%。人脐带间充质干细胞在分裂过程中分泌的细胞因子与元宝枫籽油通过合理配比，在化妆品行业有很广泛的应用，应用前景良好。前景良好。前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗衰老和皮肤修复效果的人脐带间充质干细胞活性因子液的制备方法和应用


[0001]本专利技术属于皮肤抗衰老及美白修复
，具体涉及一种具有抗衰老和皮肤修复效果的人脐带间充质干细胞活性因子液的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]人脐带间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)可以从新生儿脐带中的华通氏胶分离提取，其优点是来源广泛、采集方便、可以体外大量增殖、免疫原性弱、无伦理问题等优点。
[0003]然而，研究表明，在体外扩增培养后的间充质干细胞会随着培养时间的延长，分化能力逐渐减弱；通过静脉注射或者局部注射的体外扩增培养的间充质干细胞，只有极少量细胞存活下来，而这少量存活的细胞通过分泌大量的活性因子, 活性因子一般是指干细胞培养过程中，通过细胞分泌到培养基中具有极高生物活性的可溶性蛋白质或者多肽物质等，例如表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素（IL）、各种胶原蛋白（如I，II，III，IV型）等而发挥作用。
[0004]研究发现，多种细胞因子发挥网络式的调节作用，直接或者间接地影响多种类型细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移。它们可以参与维持细胞骨架稳定，保护细胞；促进皮肤新陈代谢，改善皮肤微循环；促进自身干细胞向衰老凋亡部位迁移迁移和分化，修复组织；促进细胞增殖，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，具有很好的抗衰老，美白肌肤，防紫外辐射，愈合伤口，祛疤痕，除皱，组织修复等功效。
[0005]元宝枫（acer truncatum bunge）属于属于槭树科槭属多年生乔木，是我国特有的品种，多见于安徽南部、甘肃南部、吉林以南及内蒙古等地。元宝枫籽中含油率高，可达45%~48%。元宝枫籽油是不饱和脂肪酸较高（＞92%）的不干性油，富含人体必需的脂肪酸，脂溶性维生素等。元宝枫籽油与皮肤脂质相似，给皮肤提供多种脂肪酸和维生素，平衡皮肤的渗透力。
[0006]同时，元宝枫籽油中还含有的特殊功能成分——神经酸（Nervonic Acid），又名鲨鱼酸（Selacholeic Acid），元宝枫籽油脂肪酸组成中神经酸的含量为5%~6%。神经酸是大脑神经组织和细胞的一种核心天然成分，是大脑细胞、视神经细胞、周围神经生长、再发育和维持所必需的营养物质，能够修复受损神经细胞，提高神经细胞的活跃性以延缓衰老；此外神经酸对修复硬化的心脑血管壁及调节血脂具有重要作用。干细胞活性因子与元宝枫籽油通过合理配比，在化妆品行业有很广泛的应用，应用前景良好。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种分离人脐带间充质干细胞活性因子的方法，它包括如下步骤：a、间充质干细胞的分离与培养：从健康的足月的新生儿脐带中分离出脐带间充质干细
胞，用无血清培养基进行扩增和传代培养；b、活性因子的收集：细胞培养至密度达到80%左右为宜，通过饥饿法培养48-72h，收集含有活性因子的上清液；c、活性因子的浓缩：将上述得到的含有活性因子的上清液，先采用0.22μm滤膜，确保活性细胞因子溶液无菌；然后通过50KDa超滤膜，收集透析液，再将透析液通过3KDa超滤膜，收集截留液（按照2.5
×
106细胞/毫升进行浓缩），得到活性因子浓缩液。
[0008]步骤a中，所述的脐带来源：产妇检测乙肝、丙肝、梅毒和HIV全阴性，正常剖宫产或者顺产；产妇年龄小于28周岁的健康足月新生儿。
[0009]本专利技术中脐带间充质干细胞分离方法为：通过酶解（胶原酶、透明质酸酶、中性蛋白酶）脐带组织块，培养所得。
[0010]本专利技术还提供一种人脐带间充质干细胞活性因子冻干粉的制备方法，它包括如下步骤：将步骤c中得到的细胞因子浓缩液添加保护剂获得冻干粉原液，然后冻干，得到脐带间充质干细胞活性因子冻干粉。
[0011]冻干粉原液冻干前添加保护剂，成分及含量如下：3-o-乙基抗坏血酸 1g/100mL、牛磺酸0.15g/100mL、α-酮戊二酸-L-精氨酸 0.5g/100mL、甘露醇5g/100mL、海藻糖3g/100mL、人白蛋白0.5mL/100mL。
[0012]其中，冻干粉原液按照3mL/支分装；冻干条件为：压强20~50Pa，温度-30℃~26℃的的冻干条件下冻干24~36h。
[0013]本专利技术还提供上述方法制备得到脐带间充质干细胞活性因子冻干粉。
[0014]本专利技术还提供具有抗衰老和皮肤修复效果的人脐间充质干细胞活性因子精华液组合物的应用。
[0015]其中，活性因子冻干粉制剂1瓶配1支5mL冻干粉溶媒组合成外用化妆品，1支5mL冻干粉溶媒成分及含量如下：烟酰胺 3g/100mL，高分子透明质酸钠（大于80KDA）0.25/100mL，中分子量透明质酸钠（10~80KDA）0.15g/100mL，小分子量透明质酸钠（小于10KDA）0.05g/100mL，乳化剂Span80-PEG-40氢化蓖麻油（质量比1：3）3g/100mL，元宝枫籽油1.0mL/100mL，防腐剂羟基苯甲酯0.15g/100mL，无菌超纯水补足100mL。将5mL溶媒倒入冻干粉中，轻轻震荡，静置5min，制成含有元宝枫籽油的精华液。
[0016]元宝枫种子中含油量高达45%-48%，是不饱和脂肪酸含量较高（>90%）的不干性油。元宝枫籽油含有人体必须脂肪酸油酸（25%）和亚油酸（36%），两者占脂肪酸总量的60%以上。元宝枫籽油中还富含维生素E（125mg/100g），维生素E可以防治皮肤弹性降低、皮脂腺作用减退，保水性能减少，过剩色素沉着等皮肤老化的外观症状。
[0017]同时，元宝枫籽油中还含有的特殊功能成分——神经酸（Nervonic Acid），又名鲨鱼酸（Selacholeic Acid），元宝枫籽油脂肪酸组成中神经酸的含量为5%~6%。神经酸是大脑神经组织和细胞的一种核心天然成分，是大脑细胞、视神经细胞、周围神经生长、再发育和维持所必需的营养物质，能够修复受损神经细胞，提高神经细胞的活跃性以延缓衰老；此外神经酸对修复硬化的心脑血管壁及调节血脂具有重要作用。干细胞活性因子与元宝枫籽油通过合理配比，在化妆品行业有很广泛的应用，应用前景良好。
[0018]有益效果本专利技术有益效果是：（1）通过饥饿法提高细胞因子的产量，又不会引入血清替代物或者
胎牛血清中的复杂成分，减少了用于抗衰老、美容中存在的免疫排斥反应；（2）然后通过超滤膜去除活性因子中大分子活性因子（大于50KDa）和小分子活性因子（小于3KDa），然后制备成冻干粉，保质期可以长达3年，获得的细胞因子浓度更高；（3）本专利技术的脐带间充质干细胞活性因子可以参与维持细胞骨架稳定，保护细胞；促进皮肤新陈代谢，改善皮肤微循环；促进自身干细胞向衰老凋亡部位迁移迁移和分化，修复组织；促进细胞增殖，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，具有很好的抗衰老，美白肌肤，防紫外辐射，愈本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离人脐带间充质干细胞活性因子的方法，其特征在于：包括以下步骤：a、间充质干细胞的分离与培养：从健康的足月的新生儿脐带中分离出脐带间充质干细胞，用无血清培养基进行扩增和传代培养；b、活性因子的收集：细胞培养至密度达到80%左右为宜，通过饥饿法培养48-72h，收集含有活性因子的上清液；c、活性因子的浓缩：将上述得到的含有活性因子的上清液，先采用0.22μm滤膜，确保活性细胞因子溶液无菌；然后通过50KDa超滤膜，收集透析液，再将透析液通过3KDa超滤膜，收集截留液（按照2.5
×
106细胞/mL进行浓缩），得到活性因子浓缩液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述的脐带来源：产妇检测乙肝、丙肝、梅毒和HIV全阴性，正常剖宫产或者顺产；产妇年龄小于28周岁的健康足月新生儿；所述的脐带间充质干细胞分离方法为：通过酶解（胶原酶、透明质酸酶、中性蛋白酶）脐带组织块，培养所得；所述的活性因子浓缩液中收集分子量在3KDA~50KDA的活性因子。3.权利要求1或2所述方法制备得到活性因子浓缩液。4.一种人脐带间充质干细胞活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于：包括的步骤：取权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建辉，张晓娟，孙海星，林思妮，白玉杰，张艳，吴东颖，董红宇，
申请(专利权)人：山东荆卫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：