一株贝莱斯芽孢杆菌及其复合菌制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株能提高虹鳟免疫力、对杀鲑气单胞菌和鳗弧菌具有显著抑制效果的贝莱斯芽孢杆菌MVCR2；还涉及一种含有上述贝莱斯芽孢杆菌MVCR2的复合菌制剂；还涉及上述贝莱斯芽孢杆菌MVCR2的应用。本发明专利技术的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2021507，保藏日期为2021年05月08日。所述贝莱斯芽孢杆菌MVCR2对杀鲑气单胞菌和鳗弧菌具有显著的抑制效果，对由鲑气单胞菌和鳗弧菌引起的多种水产养殖病害具有有效的防治作用，并能提高虹鳟生长、免疫力，提高虹鳟成活率，降低淡水虹鳟过渡入海死亡率。水虹鳟过渡入海死亡率。水虹鳟过渡入海死亡率。

【技术实现步骤摘要】
一株贝莱斯芽孢杆菌及其复合菌制剂及其应用


[0001]本专利技术专利属于微生物及其应用领域，尤其涉及一株能提高虹鳟免疫力、对杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)和鳗弧菌具有显著抑制效果的贝莱斯芽孢杆菌(MVCR2)；本专利技术还涉及一种含有上述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)MVCR2的复合菌制剂；同时，本专利技术还涉及上述贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus velezensis)MVCR2的应用。

技术介绍

[0002]虹鳟为优质的冷水性鱼类，有陆封型和洄游型，陆封型终生生活在淡水中，洄游型在淡水中产卵孵化，长大后到海水中生活。国外因冷水资源丰富，虹鳟主要在淡水中养殖。我国自1971年引入虹鳟后在淡水中开展养殖，主要分布在北京、黑龙江、山东、山西、辽宁、吉林、陕西甘肃、四川等有冷水资源的地区，但是我国冷水资源量少且分布不均匀，限制了虹鳟养殖产量。淡水虹鳟可以通过盐度驯化的方法实现海水养殖和提高品质。虹鳟驯化入海为满足冷水团海域鲑鳟鱼的苗种供应具有重要意义。但是，驯化过程中的盐度变化产生的胁迫容易引起鱼体免疫和品质变化，造成死亡或者病害损失。提高虹鳟免疫力，对降低淡水虹鳟过渡入海死亡率具有重要意义。
[0003]杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)和鳗弧菌是虹鳟养殖和过渡入海过程中的主要致病病原菌。杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)，属气单胞菌科、气单胞菌属，是一种不能运动、兼性厌氧的革兰氏阴性菌，其最适生长温度为22～25℃，在淡水和海水中均有分布。杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida) 能够使虹鳟患上疖疮病，疖疮病是虹鳟养殖过程中常见细菌病之一。鲑鳟疖疮病可分为急性型、亚急性型、慢性Ⅰ型和慢性Ⅱ型，虹鳟患此病时多表现为慢性型或亚急性型，患病鱼通常表现为体色发黑、食欲不振、鳍基部充血、皮肤溃疡等症状，发病水温为3
‑
21℃，晚春和夏季水温10
‑
0℃时最易发病，死亡率较高。该菌地理分布、宿主范围广泛，除鲑科鱼类以外，还能够感染鲤、河鲈、六线鱼、大菱鲆、大西洋鳕、裸盖鱼等。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)，为有鞭毛的革兰氏阴性杆菌，无荚膜，不形成芽孢，能运动。感染症状为病鱼眼球突出，出血；肌肉出血，肿胀、糜烂、坏死；鳍基部、体表、口腔、肛门出血；肠管充血、发炎、无弹性；肝脏出现血斑，脾脏肿大，肾脏肿胀。从幼鱼到成鱼均可感染。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一是提供一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) MVCR2，其对杀鲑气单胞菌和鳗弧菌具有显著的抑制效果，对由鲑气单胞菌和鳗弧菌引起的多种水产养殖病害具有有效的防治作用，并能提高虹鳟生长、免疫力，提高虹鳟成活率，降低淡水虹鳟过渡入海死亡率。
[0005]本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2021507，保藏日期为2021年 05月08日。
[0006]所述贝莱斯芽孢杆菌(MVCR2)为从大菱鲆肠道内分离获得的芽孢杆菌菌株，具有提高虹鳟免疫力的作用，对杀鲑气单胞菌和鳗弧菌具有显著的抑制效果。
[0007]所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2的主要特征如下：
[0008](1)形态特征：本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2 在LB培养基所形成的菌落为圆形或近圆形，直径2
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3mm，白色，表面干燥粗糙有褶皱，不透明，边缘不整齐。
[0009](2)生理生化特征：在LB培养基37℃培养，好氧，显微镜观察菌体为杆状，有芽孢，革兰氏染色呈阳性，明胶液化、淀粉水解实验，甘露醇、葡萄糖发酵实验阳性，肌醇、鼠李糖实验阴性。
[0010](3)菌株16SrDNA鉴定：对菌株的DNA序列经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳后进行16S rRNA鉴定，经鉴定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌。
[0011]进一步地，本专利技术还提供了一种上述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) MVCR2作为饲料添加剂的应用，可提高虹鳟免疫力、提高虹鳟生长，防治由杀鲑气单胞菌和鳗弧菌引起的多种水产养殖病害，提高虹鳟成活率，降低淡水虹鳟过渡入海死亡率。
[0012]所述贝莱斯芽孢杆菌作为饲料添加剂时，其添加量为饲料中活菌数量大于或等于107CFU/kg(饲料的活菌数量为用平板涂布方法检测测得的单位质量的饲料中所含的益生菌组分的活菌数量)。
[0013]本专利技术还提供了一种含有贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2的复合菌制剂，所述复合菌制剂是由贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2 和凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulan)BNCC 136363以(1
‑
4):1的活菌数量比例复合而成。所述的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2为我实验室从大菱鲆肠道分离筛选出的菌株，现保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2021507，保藏日期为2021年05月08日，保藏地址为中国武汉，武汉大学。所述凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulan)BNCC 136363购自北京北纳创联生物技术研究院。该复合菌制剂可以对多种虹鳟致病病原菌具有显著的抑菌效果，并能提高虹鳟免疫力，降低淡水虹鳟过渡入海死亡率。
[0014]优选地，所述复合菌制剂是由贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2 和凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulan)BNCC 136363以2:1的活菌数量比例复合而成。
[0015]本专利技术还公开了一种以上述复合菌制剂作为饲料添加剂的应用。
[0016]进一步地，所述复合菌制剂作为饲料添加剂时，添加量为饲料中活菌数量大于或等于107CFU/kg(饲料的活菌数量为用平板涂布方法检测测得的单位质量的饲料中所含的益生菌组分的活菌数量)。将上述复合菌制剂应用于虹鳟饲料添加剂，可提高对多种虹鳟细菌病的防治效果，并能提高虹鳟免疫力，降低淡水虹鳟过渡入海死亡率。
[0017]所述含有贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2的复合菌制剂作为饲料添加剂的具体制备步骤如下：
[0018]将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2和凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulan)BNCC 136363分别活化、扩大培养，再分别经37℃液态发酵，活菌数量达到约1.0
×
109CFU
·
ml
‑1，然后将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) MVCR2和凝结芽孢杆菌(Bacillus c本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株贝莱斯芽孢杆菌，为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2021507，保藏日期为2021年05月08日。2.一种权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在抑制杀鲑气单胞菌和鳗弧菌中的应用。3.一种权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在虹鳟养殖和过渡入海中的应用。4.一种权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌作为饲料添加剂的应用。5.根据权利要求4所述的贝莱斯芽孢杆菌在饲料添加剂的应用，其特征在于，其添加量为饲料中活菌数量大于或等于107CFU/kg。6.一种含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2的复合菌制剂，其特征在于，所述复合菌制剂是由贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MVCR2和凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulan)BNCC 136363以(1
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4):1的活菌数量比例复合而成，所述凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulan)BNCC 136363购自北京北纳创联生物技术研究院。7.根据权利要求6所述的所述复合菌制剂，其特征在于，所述复合菌制剂是由贝莱斯芽孢杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：任贻超，门先会，党永吉，王博文，陈佳旭，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：