一种适应于贝类活体的贝壳OTC标记方法技术

本发明专利技术涉及一种适应于贝类活体的贝壳OTC标记方法，属于水产动物标记技术领域，所述方法为选取壳长2

【技术实现步骤摘要】
一种适应于贝类活体的贝壳OTC标记方法


[0001]本专利技术涉及贝类的标记方法，特别涉及一种适应于贝类活体的贝壳OTC标记方法。

技术介绍

[0002]水产动物标记技术，既可用于水产动物的标记放流并调查其资源及活动情况，又可应用于大规模的选择育种，如家系选育等。为便于不同家系、不同处理组之间的区分，就需要对不同家系及不同处理组的贝类进行标记。常见的对普通贝类进行标记的方法有挂牌标记、分子标记，挂牌标记容易对贝类造成损伤。分子标记不易对动物造成危害，但其检测复杂、成本高。对于标记技术一般要求是，对动物的伤害小，简单易行、成本低廉适宜于大量操作，标记显著、不易脱落或消失，易于识别和检测。
[0003]由于双壳类物种具有较高的商业价值，双壳类生长已经得到了更深入的研究，使用传统方法(表面修整、边缘刻痕、油漆标签)测试贝壳生长率可能导致贝类生长中断。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术要解决的技术问题是提供一种适应于双壳贝类活体的贝壳标记方法，所述方法对贝类无生理损伤的环境友好型的标记方法。
[0005]本专利技术是通过如下技术方案来实现的：
[0006]一种适应于贝类活体的贝壳OTC标记方法，所述方法具体步骤如下：
[0007](1)选取需要标记的贝类苗种：根据需要获取贝类苗种，所选取贝类苗种壳长2
‑
6mm；
[0008](2)在纯净的海水中溶解盐酸土霉素(oxytetracycline hydrochloride，OTC)，用碳酸氢钠或氢氧化钠不段将海水pH调整到7
‑
8之间；
[0009](3)将贝类苗种在步骤(2)的海水中浸染72h，期间正常投喂微藻；
[0010](4)将标记的菲律宾蛤仔正常喂养，用荧光体视镜能够看到标记后的贝类贝壳具有光信号。
[0011]作为本专利技术的一个优选方案，在所述步骤(3)中，所述贝类苗种浸染密度为1000
‑
4000粒/平方米。
[0012]作为本专利技术的一个优选方案，所述贝类苗种是海水或淡水双壳类、腹足类在内的具有石灰质外壳的苗种。
[0013]本专利技术与现有技术相比的有益效果：
[0014]普通染料对贝类进行染色后，在养殖一段时间后会发生褪色。盐酸土霉素无毒且对生长和生存无不良影响。本专利技术标记过程中贝类幼苗不会被触摸或者移动，对贝类的将物理效应降至最低，在不对贝类个体造成生理损伤的前提下标记保持持久，也不会对环境造成污染。
具体实施方式
[0015]下面通过实施例来对本专利技术的技术方案做进一步解释，但本专利技术的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
[0016]实施例1
[0017]以壳长4
‑
5mm的菲律宾蛤仔标记为例，依次按如下步骤操作：
[0018](1)选取4
‑
5mm菲律宾蛤仔幼苗，将蛤仔壳质表面藻类清洗干净。
[0019](2)在纯净的海水中溶解OTC,用海水配置OTC(250mg/L、500mg/L、750mg/L)的浸染海水，三个重复，同时设置对照组。随着OTC浓度的增加，海水pH逐渐降低，用碳酸氢钠将海水pH升高至7
‑
8之间。
[0020](3)将菲律宾蛤仔幼虫以2000粒/平方米的密度在3L透明小桶中浸染72h，每个小桶30粒，期间每天正常投喂2次并且正常充气以便模拟流动海水环境，浸染后用凝胶成像系统(EpiChemi
3 Darkroom)的紫外光检测是否标记成功。菲律宾蛤仔壳质的边缘处在紫外灯光的照射下有强烈的光信号，并且随着OTC浓度的升高，光信号逐渐变强。
[0021](4)将标记的菲律宾蛤仔正常喂养两个月，两天一次全部换水，期间记录存活率(以贝壳张开为判定死亡的标准)，用荧光体视镜(UV)逐个检测标记状况，浸染结果均显示清晰。浸染组和对照组在72h浸染试验中均无死亡。蛤仔恢复培养69天，750mg/L的OTC浸染的蛤仔壳质在明场下无法看出染色的蛤仔与对照的区别，但在紫外灯下可产生清晰、明亮的月牙状形黄色荧光标记，蛤仔恢复续养58天，试验组平均存活率为84.33％，考虑到自然死亡，蛤仔存活率几乎不受影响。蛤仔恢复续养69天，单因素方差分析结果表明，各实验组与对照组的壳长差异不显著(P>0.05)。因此，荧光物质对蛤仔的生长和存活没有影响。
[0022]实施例2
[0023]以壳长2mm的青蛤标记为例，依次按如下步骤操作：
[0024]1)选取1
‑
2mm青蛤幼苗，将青蛤表面藻类清洗干净。
[0025]2)在纯净的海水中溶解OTC，水体选取贝类天然生活水域的自然水体，用海水配置OTC(750mg/L)的浸染海水，同时设置对照组，三个重复。
[0026]3)将青蛤幼虫以2000粒/平方米在3L透明小桶中浸染72h，每个小桶30粒，期间每天正常投喂2次并且正常充气以便模拟流动海水环境，浸染后用荧光体视镜(UV)检查是否标记成功。明场状态下，浸染的青蛤壳质无明显变化。
[0027]4)将标记的青蛤正常喂养69天，两天一次全部换水，之后用荧光体视镜(UV)检查标记。将浸染后的菲律宾蛤仔幼虫正常喂养69天，间隔两天全换水，期间记录存活率(以贝壳张开为判定死亡的标准)，用荧光体视镜(UV)逐个检测标记状况。青蛤恢复培养69天，750mg/L OTC浸染的青蛤壳质可产生清晰、明亮的荧光标记。浸染组和对照组在72h浸染试验中均无死亡。青蛤恢复培养58天，试验组平均存活率大于80％，考虑到自然死亡，青蛤的存活率几乎不受影响。青蛤恢复培养69天，单因素方差分析结果表明，各实验组与对照组的壳长差异不显著(P>0.05)。因此，荧光物质对青蛤的生长和存活没有影响。
[0028]实施例3
[0029]以壳长1
‑
2mm的脉红螺标记为例，依次按如下步骤操作：
[0030]1)选取1
‑
2mm脉红螺幼苗，将脉红螺表面藻类清洗干净。
[0031]2)在纯净的海水中溶解OTC，水体选取贝类天然生活水域的自然水体，用海水配置
三种浓度OTC(750mg/L)的浸染海水，同时设置对照组，三个重复。
[0032]3)将脉红螺幼虫以2000粒/平方米在3L透明小桶中浸染72h，每个小桶30粒，期间每天正常投喂2次并且正常充气以便模拟流动海水环境，浸染后用荧光体视镜(UV)检查是否标记成功。脉红螺的壳质边缘处在紫外光的照射下有黄色的荧光信号，明场状态下，浸染的脉红螺无明显变化。
[0033]4)将标记的脉红螺正常喂养两个月，两天一次全部换水，之后用荧光体视镜(UV)检查标记。
[0034]将浸染后的脉红螺幼虫正常喂养69天，间隔两天全换水，期间记录存活率，用荧光体视镜(UV)逐个检测标记状况。蛤仔恢复续养69天，750mg/L OTC浸染的脉红螺可产生清晰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适应于贝类活体的贝壳OTC标记方法，其特征在于所述方法具体步骤如下：(1)选取需要标记的贝类苗种，所选取贝类苗种壳长2
‑
6mm；(2)在待标记贝类养殖用水中溶解盐酸土霉素，浓度为750mg/L，用碳酸氢钠或氢氧化钠不断将海水pH调整到7
‑
8之间；(3)将贝类苗种在步骤(2)的溶液中浸染72h，期间正常投喂微藻；(4)将标记的菲律...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙秀俊，吴磊，张天时，涂康，刘志鸿，吴彪，周丽青，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：