草果AtDRM1基因在提高植物耐热性中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种草果AtDRM1基因在提高植物耐热性中的应用，所述草果AtDRM1基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。一种草果AtDRM1基因在提高植物耐热性中的应用，包括以下步骤：1)扩增草果AtDRM1基因；2)用限制性内切酶对质粒双酶切，将线性化质粒与草果AtDRM1基因进行同源重组反应，产物转化至DH5α感受态中，并在涂布有抗生素的培养基上培养，对培养基上的单菌落进行阳性验证，获得重组质粒；3)重组质粒转化至农杆菌，并利用农杆菌侵染植物，筛选及鉴定转基因植株，即得耐热性提高的植物。本发明专利技术通过构建转休眠相关基因DRM的植物，提高植物对热胁迫的耐受性，为培育耐热性植物提供了新思路。新思路。新思路。

【技术实现步骤摘要】
草果AtDRM1基因在提高植物耐热性中的应用


[0001]本专利技术属于植物基因工程领域。更具体地说，本专利技术涉及一种草果AtDRM1基因在提高植物耐热性中的应用。

技术介绍

[0002]草果(Amomum tsaoko)为姜科豆蔻属多年生草本植物。其果实既是一种香料，也是一种重要的药材，具有温中、健胃、消食、顺气的功能，主治心腹疼痛、脘腹胀满、恶心呕吐、咳嗽痰多、疟疾寒热等。目前，国内外有关草果的研究大多集中在化学成分、药理作用以及栽培繁育方面，对其生长适应性方面的研究较少。草果生物学特性特殊，对温度要求较高，适生范围狭窄，主要分布于我国云南省东南部和广西西部。生产上草果多栽培于海拔1100～1800m的阔叶林下，生长地区年平均温度要求在16～22℃。杨耀文等(2016)研究发现，草果花柱卷曲的性状极易受温度和湿度的影响，当平均温度大于18℃时存在花柱卷曲滞后现象，进而影响其植株繁育。崔晓龙等(1995)发现草果花粉在高温与低湿条件下生活力极易丧失，花粉萌发和花粉管生长的最适温度是12～24℃之间。这些研究结果表明，温度是影响草果生长与繁育本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.草果AtDRM1基因在提高植物耐热性中的应用，所述草果AtDRM1基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：1)扩增草果AtDRM1基因；2)用BglⅡ和BstEⅡ限制性内切酶对质粒pCAMBIA1301双酶切，使质粒pCAMBIA1301线性化，将线性化质粒pCAMBIA1301与草果AtDRM1基因进行同源重组反应，产物转化至DH5α感受态中，并在涂布有抗生素的培养基上培养，对培养基上的单菌落进行阳性验证，获得pCAMBIA1301
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AtDRM1重组质粒；3)pCAMBIA1301
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AtDRM1重组质粒转化至农杆菌，并利用农杆菌侵染植物，筛选及鉴定转基因植株，即得耐热性提高的植物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，草果AtDRM1基因的扩增方法包括以下步骤：a)取草果叶片0.2
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1g，放入含研磨珠的离心管中，液氮速冻，研磨成粉，获得粉体；b)提取粉体中的植物总RNA，并将RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，纯化，获得草果AtDRM1基因。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，以cDNA为模板进行PCR扩增时的上游引物为SEQ ID NO.2:actcttgaccatggtagatctgatggttctccttgataagatgtgg；下游引物为SEQ ID NO.3:ggggaaattcgagctggtcacctcaacggtgggtgctcttcg。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，以cDNA为模板进行PCR扩增时反应条件为：95℃预变性3min，95℃变性15s，58℃退火15s，72℃延伸45s，35个循环；反应体系为：高保真酶25μL，上游引物2μL，下游引物2μL，cDNA 2μL，ddH2O 19μL。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用农杆菌侵染植物的方法为将植物种子消毒，并用无菌水清洗干净，置于培养基上培养，种子发芽并长出2
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4片叶后，将幼苗转移至泥炭土中培养，待植物开花时，利用含有pCAMBIA1301
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【专利技术属性】
技术研发人员：潘春柳，周芸伊，姚李祥，李莹，王春丽，黄雪彦，余丽莹，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：