一种治疗细菌性眼内炎的药物及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种治疗细菌性眼内炎的药物及制备方法,药物中包括有抗菌肽，其中抗菌肽在药液中的含量为2

【技术实现步骤摘要】
一种治疗细菌性眼内炎的药物及制备方法


[0001]本专利技术涉及一种药物及制备方法，特别涉及一种治疗细菌性眼内炎的药物及制备方法。

技术介绍

[0002]目前，眼内炎是指由细菌或真菌引起的玻璃体和(或)房水感染，可侵袭视网膜、脉络膜、巩膜及角膜，引起炎症反应，是一种破坏性的眼部感染，在出现症状后数小时或数天内可导致不可避免的视力丧失。虽然是发病率很低的疾病，但一旦发生，就会造成严重的后果，视力下降、失明，甚至眼球摘除，给患者生活增加了负担。虽然可以通过局部及全身应用抗生素来治疗，但在过去的几十年里，由于抗生素使用不当和几乎没有新抗生素的应用，抗生素耐药性在全球范围内急剧增加，已经成为21世纪最严重的全球公共卫生威胁之一，人类已步入后抗生素时代。世界卫生组织(WHO)强调，如果不规范抗生素的使用，到2050年将有1000万人因抗生素耐药而死亡。
[0003]抗菌肽是生物体内天然免疫系统中普遍存在的宿主防御分子，天然抗菌肽一般为5
–
100个氨基酸残基组成的短肽链，分子量在1
–
5kDa之间，作为抗菌斗争中的新武器，其抗菌谱广，不仅可以杀灭细菌和真菌，还具有抗病毒、抗寄生虫和抗生物膜作用；杀菌快速，可在几十分钟内完成杀菌；此外还具有抗肿瘤、免疫调节、不易产生耐药和对人体伤害小的优点，有望成为眼内炎治疗的新药物。
[0004]研究发现，眼及相关组织，如泪器可以表达一系列人防御素，有助于预防感染，并可能参与伤口愈合反应和组织重塑，这些内源性防御素也可能参与眼部炎症和免疫反应，这些研究为应用抗菌肽治疗眼部疾病提供支持。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是为了解决在治疗眼内炎过程中所出现的抗生素耐药性的问题；
[0006]本专利技术的另一个目的是为了提供一种治疗眼内炎的新药物；
[0007]本专利技术为了解决上述问题、达到上述目的而提供的一种治疗细菌性眼内炎的药物及制备方法。
[0008]本专利技术提供的治疗细菌性眼内炎的药物中包括有抗菌肽，其中抗菌肽在药液中的含量为2
‑
512μg/ml。
[0009]抗菌肽为ik
‑
12、pp
‑
12、rk
‑
12、ip
‑
12和wp
‑
12中的任一种，前述五种抗菌肽的序列分别为：ilrwpwwpwrrk、pwirrlwrkwwp、rwiprlwrpwwk、irlrwrwkwpwp和wpirlrwrwkwp。
[0010]本专利技术提供的治疗细菌性眼内炎药物的制备方法，其方法包括如下步骤：
[0011]第一步、准备所用仪器与试剂：多肽固相合成管；分析型HPLC；氨基酸；树脂；DMF；哌啶；茚三酮；苯酚；HBTU；HoBt；DCM；甲醇；EDT；TIS；水；乙腈；TFA；
[0012]第二步、固相多肽合成，合成条件：室温，具体步骤如下：
[0013]步骤1、树脂溶涨：将树脂放入反应管中，加DCM，DCM的含量为15mL/g，30min；
[0014]步骤2、脱保护：去掉DCM，加20％哌啶DMF溶液，DMF的含量为15mL/g，时间5min，再加20％哌啶DMF溶液，DMF的含量为15mL/g，时间15min；
[0015]步骤3、检测：抽掉哌啶溶液，取数粒树脂，用乙醇洗三次，加入茚三酮，苯酚溶液各一滴，105℃
‑
110℃加热5min，变深蓝色为阳性反应；
[0016]步骤4、洗涤：加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤六次；
[0017]步骤5、缩合：保护氨基酸三倍过量，HOBt三倍过量，均用DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIC三倍过量，反应90min。
[0018]步骤6、洗涤：加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤三次；
[0019]步骤7、重复步骤2至步骤6操作，依次连接氨基酸；
[0020]步骤8、最后一次洗涤，加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤三次；加入DCM，DCM的含量为10mL/g，洗涤三次，加入甲醇，甲醇的含量为10mL/g，洗涤三次；
[0021]步骤9、裂解：配制裂解液，裂解液按重量百分比为TFA 86％、苯甲硫醚4％、水3％、EDT 5％和苯酚2％，进行裂解120min；
[0022]步骤10、抽滤洗涤：将裂解液用砂芯漏斗将裂解液和树脂分离，将裂解液搅拌加入裂解液八倍体积的乙醚中，用布氏漏斗进行抽滤分离，抽干后用乙醚将漏斗中多肽固体洗三次，然后常温挥干，干燥后装袋；
[0023]步骤11、HPLC纯化：分析型HPLC纯化，C18反相柱，以水和乙腈做流动相，在流动相中加入0.1％的TFA，梯度从10％
‑
90％进行纯化；
[0024]第三步、每种抗菌肽的实验步骤如下：
[0025]步骤1、IK
‑
12，序列为ilrwpwwpwrrk，分子量：1779.173；
[0026]Fmoc
‑
linker Am resin
[0027]︱1
[0028]Lys 2
[0029]︱1
[0030]Arg 2
[0031]︱1
[0032]Arg 2
[0033]先将Fmoc氨基酸树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；
[0034]进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc
‑
Lys或Boc
‑
OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；
[0035]进行2的操作,HBTU+DIEA加Fmoc
‑
Arg或pbf
‑
OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc后，将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品；
[0036]步骤2、PP
‑
12,序列为pwirrlwrkwwp，分子量：1779.173；
[0037]Rink Amide MBHA resin
[0038]︱1
[0039]Pro 2
[0040]︱1
[0041]Trp 2
[0042]︱1
[0043]Trp 2
[0044]先将树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；
[0045]进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc
‑
Pro
‑
OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗细菌性眼内炎的药物，其特征在于：药物中包括有抗菌肽，其中抗菌肽在药液中的含量为2
‑
512μg/ml。2.根据权利要求1所述的一种治疗细菌性眼内炎的药物，其特征在于：所述的抗菌肽为ik
‑
12、pp
‑
12、rk
‑
12、ip
‑
12和wp
‑
12中的任一种，前述五种抗菌肽的序列分别为：ilrwpwwpwrrk、pwirrlwrkwwp、rwiprlwrpwwk、irlrwrwkwpwp和wpirlrwrwkwp。3.一种治疗细菌性眼内炎药物的制备方法，其特征在于：其方法包括如下步骤：第一步、准备所用仪器与试剂：多肽固相合成管；分析型HPLC；氨基酸；树脂；DMF；哌啶；茚三酮；苯酚；HBTU；HoBt；DCM；甲醇；EDT；TIS；水；乙腈；TFA；第二步、固相多肽合成，合成条件：室温，具体步骤如下：步骤1、树脂溶涨：将树脂放入反应管中，加DCM，DCM的含量为15mL/g，30min；步骤2、脱保护：去掉DCM，加20％哌啶DMF溶液，DMF的含量为15mL/g，时间5min，再加20％哌啶DMF溶液，DMF的含量为15mL/g，时间15min；步骤3、检测：抽掉哌啶溶液，取数粒树脂，用乙醇洗三次，加入茚三酮，苯酚溶液各一滴，105℃
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110℃加热5min，变深蓝色为阳性反应；步骤4、洗涤：加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤六次；步骤5、缩合：保护氨基酸三倍过量，HOBt三倍过量，均用DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIC三倍过量，反应90min；步骤6、洗涤：加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤三次；步骤7、重复步骤2至步骤6操作，依次连接氨基酸；步骤8、最后一次洗涤，加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤三次；加入DCM，DCM的含量为10mL/g，洗涤三次，加入甲醇，甲醇的含量为10mL/g，洗涤三次；步骤9、裂解：配制裂解液，裂解液按重量百分比为TFA 86％、苯甲硫醚4％、水3％、EDT 5％和苯酚2％，进行裂解120min；步骤10、抽滤洗涤：将裂解液用砂芯漏斗将裂解液和树脂分离，将裂解液搅拌加入裂解液八倍体积的乙醚中，用布氏漏斗进行抽滤分离，抽干后用乙醚将漏斗中多肽固体洗三次，然后常温挥干，干燥后装袋；步骤11、HPLC纯化：分析型HPLC纯化，C18反相柱，以水和乙腈做流动相，在流动相中加入0.1％的TFA，梯度从10％
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90％进行纯化；第三步、每种抗菌肽的实验步骤如下：步骤1、IK
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12，序列为ilrwpwwpwrrk，分子量：1779.173；Fmoc
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linker Am resin︱1Lys 2︱1Arg 2︱1Arg 2先将Fmoc氨基酸树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；
进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc
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Lys或Boc
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OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；进行2的操作,HBTU+DIEA加Fmoc
‑
Arg或pbf
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OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc后，将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品；步骤2、PP
‑
12,序列为pwirrlwrkww...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴宏，王湛云，王烁，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：