胞质不相容性因子CifA或CifB突变基因及蛋白制造技术

本发明专利技术公开了胞质不相容性因子(CI factor，Cif)包括CifA(CidA,CinA，CndA)和CifB(CidA，CidB，CndB)的突变基因及蛋白，所述亲本CifA及CifB蛋白来源于沃尔巴克氏体(Wolbachia)，所述突变蛋白相对于亲本存在若干个氨基酸的突变，所述突变蛋白的核苷酸序列分别为CidAST如SEQ ID NO.1所示，CidBST如SEQ ID NO.3所示，CinAST如SEQ ID NO.5所示，CinBST如SEQ ID NO.7所示。本发明专利技术以胞质不相容性因子CifA与CifB复合物结构为基础，根据A因子与B因子相互作用界面特点，利用基因工程的方法对原有的CifA或CifB基因进行互作界面突变，使得本来兼容的A、B因子失去相互作用的能力，使得来自不同沃尔巴克氏体菌株的本不相容的胞质不相容性因子CifA与CifB能够产生相互作用。互作用。互作用。

【技术实现步骤摘要】
胞质不相容性因子CifA或CifB突变基因及蛋白


[0001]本专利技术属于蛋白的基因工程领域，具体的涉及一种胞质不相容性因子CifA和CifB突变基因及制备方法。

技术介绍

[0002]蚊媒疾病一直以来危害人类的生命安全，每年有数百万人感染登革热、基孔肯雅热和寨卡病毒，已成为全球公共卫生安全问题。蚊虫作为重要的媒介生物，是蚊媒传染病控制的重点。随着生物防治蚊虫技术的发展，基于昆虫共生菌沃尔巴克氏体(Wolbachia)的蚊媒和蚊媒病控制逐渐成为研究及应用热点。沃尔巴克氏体能够引起胞质不相容性(CI)现象，即沃尔巴克氏体感染的雄性与未感染的雌性交配，产生的后代无法存活；此外，携带不同Wolbachia菌株的蚊子交配后代也无法正常发育。CI是一种基因驱动机制，能够影响种群结构并引起生殖隔离。2017年，胞质不相容性因子(CI factor,Cif)被发现，这类因子由两个蛋白组成，分别被称为胞质不相容性因子CifA(包括CinA,CidA，CndA)和CifB(包括CinB,CidB，CndB)。它们能够不依赖其它Wolbachia因子介导胞质不相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胞质不相容性因子CifA及CifB的突变基因及蛋白，所述亲本CifA及CifB蛋白来源于沃尔巴克氏体(Wolbachia)，其特征在于所述突变蛋白相对于亲本存在若干个氨基酸的突变。2.权利要求1中的沃尔巴克氏体CifA及CifB蛋白在自然界中包含多种不同的变体，所述CifA及CifB突变蛋白来源于自然界中亲本CifA及CifB变体的任意一种或任意组合。3.权利要求1或权利要求2中所述CifA及CifB突变蛋白，其特征是核苷酸序列分别为CidAST如SEQ ID NO.1所示，CidBST如SEQ ID NO.3所示，CinAST如SEQ ID NO.5所示，CinBST如SEQ ID NO.7所示。4.权利要求1或权利要求2中所述CifA及CifB突变蛋白，其特征是包含但不限于权利要求3中所述突变蛋白。5.权利要求1或权利要求2中所述CifA及CifB突变蛋白，其特征是可通过对氨基酸残基进行置换、删除、截短和插入等多种方法获得。6.权利要求3的突变蛋白CidAST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示；突变蛋白CidBST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示。突变蛋白CinAST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示。突变蛋白CinBST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.8所示。7.含权利要求3的突变蛋白CidAST基因的质粒，其特征是用下述方法构建：以黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)中SEQ ID NO.9所示的wMel CidA核苷酸序列及来自尖音库蚊(Culex pipiens)中SEQ ID NO.10所示的wPip CidA核苷酸序列为模板，以wPip CidA
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CidB
ND1
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ND2
(wPip CidB核苷酸酸序列为SEQ ID NO.11所示，氨基酸序列为SEQ ID NO.12所示)及wMel CidA的结构为基础，其中A、B因子相互作用界面可以分成三个，将wPip CidA中参与CidA与CidB相互作用的氨基酸残基替换到wMel CidA上，设计出CidAST序列，如SEQ ID NO.1所示。以上述人工合成的SEQ ID NO.1为模板，以F1为正向引物，以R1为反向引物，经过PCR，得到的含有CidAST的基因序列，经酶切及T4 DNA连接酶连接，将突变蛋白CidAST基因构建到PET
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22b载体上，得到PET
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22b
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CidAST质粒；以PET
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22b
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CidAST质粒为模板，以F2为正向引物，以R2为反向引物，进行PCR，得到第二种含有突变蛋白CidAST基因的序列，经酶切及T4 DNA连接酶连接，将突变蛋白CidAST基因构建到pRS425载体上，得到pRS425
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CidAST质粒。F1的核苷酸序列是SEQ ID NO.13所示；R1的核苷酸序列是SEQ ID NO.14所示；F2的核苷酸序列是SEQ ID NO.15所示；R2的核苷酸序列是SEQ ID NO.16所示。8.含权利要求3的突变蛋白CidBST基因的质粒，其特征用下述方法构建：以黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中SEQ ID NO.17所示的wMel CidB核苷酸序列及来自尖音库蚊(Culex pipiens)中SEQ ID NO.11所示的wPip CidB核苷酸序列为模板，以wPip CidA
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CidB
ND1
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ND2
的结构为基础，将wPip CidB中参与CidA与CidB相互作用的氨基酸残基替换到wMel CidB上，设计出CidBST序列，如SEQ ID NO.3所示。以上述人工合成的SEQ ID NO.3为模板，以F3为正向引物，以R3为反向引物，经过PCR，得到的含有CidBST的基因序列，经酶切
及T4 DNA连接酶连接，将突变蛋白CidBST基因构建到PET
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22b载体上，得到PET
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22b
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CidBST质粒；以PET
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22b
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CidBST质粒为模板，以F4为正向...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泽方，肖云杰，王镐锋，王炜，陈侠，杨海涛，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：