血管生成素样7（ANGPTL7）相关疾病的治疗制造技术

本文提供了当施用于眼时抑制ANGPTL7并降低眼压的寡核苷酸组合物。所述寡核苷酸组合物含有核苷修饰。含有核苷修饰。含有核苷修饰。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血管生成素样7(ANGPTL7)相关疾病的治疗
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2019年5月24日提交的美国临时申请第62/852,813号和2019年8月1日提交的美国临时申请第62/881,906号的权益，这些申请的全部内容通过引用并入本文。序列表
[0002]本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子方式提交，并且其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII副本创建于2020年5月15日，名为54462
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709_601_SL.txt，大小为3,290字节。

技术介绍

[0003]大规模的人类基因数据为利用自然实验提高药物发现与开发的成功率提供了一种机制。
[0004]全基因组关联研究(GWAS)是一项实验设计，用于检测群体样本中遗传变体与性状之间的关联。目的是更好地了解疾病的生物学并基于这种了解开发治疗方法。GWAS可以利用基因分型和/或测序数据，并且通常涉及对数百万个相对均匀分布在基因组中的遗传变体的评估。最常见的GWAS设计是病例对照研究，它涉及比较病例与对照的变体频率。如果变体在病例与对照中具有显著不同的频率，则称该变体与疾病有关。通常报告的GWAS的关联统计是作为统计显著性和优势比(OR)的度量的p值，或作为效应量的度量的β系数(β)。研究人员通常假设加性遗传模型并计算等位基因优势比，其是由每个额外的等位基因拷贝赋予的增加的(或减少的)的疾病风险(与不携带等位基因拷贝相比)。GWAS设计和解释中的另一个重要概念是连锁不平衡，其是等位基因的非随机关联。连锁不平衡的存在可以混淆“因果”变体。
[0005]变体的功能注释和/或湿实验室实验可以鉴定通过GWAS鉴定的因果遗传变体，并且在许多情况下，这导致致病基因的鉴定。特别地，了解因果遗传变体的功能影响(例如，蛋白质功能的丧失或获得、基因表达的增加或减少)允许将该变体用作靶基因的治疗调节的代用品，并深入了解调节该靶标的治疗剂的潜在治疗功效和安全性。
[0006]这种基因
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疾病关联的鉴定为疾病生物学提供了基本的见解，并且正迅速成为制药行业鉴定新治疗靶标的重要手段。为了转化源自人类遗传学的治疗见解，必须将患者的疾病生物学外源性地“编程”为复制人类遗传学的观察结果。今天，能够将通过人类遗传学鉴定的治疗靶标转化为新药的治疗方式的潜在选择比以往任何时候都多。这些包括完善的治疗方式如小分子和单克隆抗体，成熟的方式如寡核苷酸，和新兴的方式如基因疗法和基因编辑。治疗方式的选择取决于多种因素，包括靶点的位置(例如，细胞内、细胞外或分泌)、相关组织(例如，肺、肝)和相关适应症。

技术实现思路

[0007]青光眼是一组异质性疾病，影响全球超过7000万人，其特征是视神经损伤导致视网膜神经节细胞逐渐丧失并导致视力丧失。青光眼的不同亚型通常按虹膜角膜角分层，开
角型青光眼约占病例的75％。尽管青光眼的病理生理学仍然知之甚少，但主要的因果特征和危险因素是眼内压(IOP)升高。IOP取决于从睫状体分泌的房水与其通过小梁网和葡萄膜巩膜流出通路的引流之间的平衡。降低IOP是唯一已被证明可以预防青光眼发展或减缓青光眼进展的策略，因此，治疗的重点是通过增加房水流出或减少房水产生来将IOP降低到目标水平。使用了几类降低IOP的药物，包括前列腺素类似物、β
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肾上腺素能阻滞剂、α
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肾上腺素能激动剂、碳酸酐酶抑制剂和最近的rho激酶抑制剂。也采用手术方法，例如激光小梁成形术，以改善房水通过小梁网的引流。尽管有治疗青光眼的药物和手术疗法，但它是全世界不可逆失明的主要原因，仍然需要新的治疗策略，以进一步降低与视力丧失相关的显著发病率和生活质量下降的风险。
[0008]一方面，提供了一种组合物，其包含治疗青光眼和高眼压症有效的ANGPTL7的抑制剂或调节剂。在一些实施方案中，ANGPTL7的抑制剂或调节剂是RNAi。在一些实施方案中，RNAi是siRNA。在一些实施方案中，siRNA包含一种或多种选自SEQ ID NO:1
‑
4412的有义链和反义链序列。在一些实施方案中，siRNA包含序列，该序列包含选自SEQ ID NO:1
‑
4412的序列的反向互补序列。在一些实施方案中，siRNA包含一个序列，该序列与选自SEQ ID NO:1
‑
4412的序列具有至少约85％、90％或95％同源性。在一些实施方案中，siRNA包含一个序列，该序列与选自SEQ ID NO:1
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4412的序列具有至少约85％、90％或95％同一性。在一些实施方案中，RNAi是miRNA。在一些实施方案中，RNAi是反义寡核苷酸(ASO)。在一些实施方案中，ASO是双链或单链。在一些实施方案中，ANGPTL7的抑制剂是小分子。在一些实施方案中，ANGPTL7的抑制剂是适体。在一些实施方案中，适体是寡核苷酸适体。在一些实施方案中，适体是肽适体。在一些实施方案中，ANGPTL7的抑制剂是抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。
[0009]在另一方面，本文提供了用于抑制或调节血管生成素样7(ANGPTL7)基因产物的分子，其包括dsRNA(dsRNA)试剂，例如小干扰RNA(siRNA)，或用于治疗用途的反义寡核苷酸。还提供了通过施用dsRNA试剂或反义寡核苷酸来抑制靶基因的表达的方法，例如，用于治疗涉及ANGPTL7基因产物的各种疾病。还提供了一种调节细胞中的靶基因的表达的方法，其包括向所述细胞提供dsRNA试剂或反义寡核苷酸。在一些实施方案中，靶基因是ANGPTL7。
[0010]在另一方面，提供了一种在有此需要的受试者中治疗一种或多种眼病症的方法，其包括在受试者中编辑ANGPTL7基因，其中所述一种或多种眼病症包括青光眼或高眼压症。在一些实施方案中，ANGPTL7基因的编辑包括对受试者施用CRISPR/cas9。在一些实施方案中，CRISPR/cas9靶向ANGPTL7基因。在一些实施方案中，CRISPR/cas9将ANGPTL7基因编辑为功能丧失突变。在一些实施方案中，功能丧失突变包括过早终止突变。在一些实施方案中，根据人蛋白序列编号，过早终止突变发生在氨基酸位置177。在一些实施方案中，CRISPR/cas9将ANGPTL7基因编辑为错义突变。在一些实施方案中，错义突变包括谷氨酰胺到组氨酸的突变。在一些实施方案中，根据人蛋白序列编号，谷氨酰胺到组氨酸的突变发生在氨基酸位置175。在一些实施方案中，将CRISPR/cas9全身递送到受试者。在一些实施方案中，将CRISPR/cas9局部递送到受试者。在一些实施方案中，将CRISPR/cas9局部递送到受试者的眼睛。在一些实施方案中，通过眼内注射将CRISPR/cas9局部递送到受试者的眼睛。在一些实施方案中，通过局部溶液将CRISPR/cas9局部递送到受试者的眼睛。在一些实施方案中，ANGPTL7基因的编辑可有效治疗一种或多种眼病症。在一些实施方案中，一种或多种眼病症
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含靶向血管生成素样7(ANGPTL7)的寡核苷酸并且当以有效量向受试者施用时降低眼压，其中所述寡核苷酸包含含有义链和反义链的小干扰RNA(siRNA)，所述反义链与具有SEQ ID NO:11085的核苷序列的核酸的一部分互补，并且每条链具有14至30个核苷酸。2.根据权利要求1所述的组合物，其中与施用前相比，所述眼压降低约10％或更多。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述siRNA与人类ANGPTL7 mRNA结合，在所述反义链中具有不多于2个错配。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述siRNA与不含有SNP的人类ANGPTL7 mRNA靶位点结合，次要等位基因频率(MAF)大于或等于1％(位置2
‑
18)。5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链和所述反义链各自包含与人类miRNA的种子区不相同的种子区。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:7、92、93、94、115、117、118、120、206、207、256、645、646、657、740、741、743、923、943、948、1021、1092、1094、1097、1105、1107、1132、1198、1201、1424、1425、1429、1434、1436、1438、1537、1541、1639、1654、1691、1693、1762、1764、1765、1794、1796、1797、1968、1969、2030、2085、2087、2091、2095、2099或2192中的任一个具有至少85％同一性的核苷序列。7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含SEQ ID NO:7、92、93、94、115、117、118、120、206、207、256、645、646、657、740、741、743、923、943、948、1021、1092、1094、1097、1105、1107、1132、1198、1201、1424、1425、1429、1434、1436、1438、1537、1541、1639、1654、1691、1693、1762、1764、1765、1794、1796、1797、1968、1969、2030、2085、2087、2091、2095、2099或2192中的任一个的核苷序列、或其具有1或2个核苷替换、添加或缺失的有义链序列。8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含SEQ ID NO:7、92、93、94、115、117、118、120、206、207、256、645、646、657、740、741、743、923、943、948、1021、1092、1094、1097、1105、1107、1132、1198、1201、1424、1425、1429、1434、1436、1438、1537、1541、1639、1654、1691、1693、1762、1764、1765、1794、1796、1797、1968、1969、2030、2085、2087、2091、2095、2099或2192中的任一个的核苷序列。9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含与SEQ ID NO:2213、2298、2299、2300、2321、2323、2324、2326、2412、2413、2462、2851、2852、2863、2946、2947、2949、3129、3149、3154、3227、3298、3300、3303、3311、3313、3338、3404、3407、3630、3631、3635、3640、3642、3644、3743、3747、3845、3860、3897、3899、3968、3970、3971、4000、4002、4003、4174、4175、4236、4291、4293、4297、4301、4305或4398中的任一个具有至少85％同一性的核苷序列。10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含SEQ ID NO:2213、2298、2299、2300、2321、2323、2324、2326、2412、2413、2462、2851、2852、2863、2946、2947、2949、3129、3149、3154、3227、3298、3300、3303、3311、3313、3338、3404、3407、3630、3631、3635、3640、3642、3644、3743、3747、3845、3860、3897、3899、3968、3970、3971、4000、4002、4003、4174、4175、4236、4291、4293、4297、4301、4305或4398中的任一个的核苷序列、或其具有1或2个核苷替换、添加或缺失的反义链序列。
11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含SEQ ID NO:2213、2298、2299、2300、2321、2323、2324、2326、2412、2413、2462、2851、2852、2863、2946、2947、2949、3129、3149、3154、3227、3298、3300、3303、3311、3313、3338、3404、3407、3630、3631、3635、3640、3642、3644、3743、3747、3845、3860、3897、3899、3968、3970、3971、4000、4002、4003、4174、4175、4236、4291、4293、4297、4301、4305或4398中的任一个的核苷序列。12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核苷间连接。13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述一个或多个经修饰的核苷间连接包含烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺酸酯、或羧甲基酯、或其组合。14.根据权利要求12所述的组合物，其中所述一个或多个经修饰的核苷间连接包含硫代磷酸酯连接。15.根据权利要求12所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含2
‑
6个经修饰的核苷间连接。16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核苷。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述一个或多个经修饰的核苷包含锁核酸(LNA)、己糖醇核酸(HLA)、环己烯核酸(CeNA)、2',4'受限乙基、2'
‑
甲氧基乙基、2'
‑
O
‑
烷基、2'
‑
O
‑
烯丙基、2'
‑
O
‑
烯丙基、2'
‑
氟或2'
‑
脱氧、2
’‑
O
‑
甲基核苷、2'
‑
脱氧氟核苷、2'
‑
O
‑
N
‑
甲基乙酰胺基(2'
‑
O
‑
NMA)核苷、2'
‑
O
‑
二甲基氨基乙氧基乙基(2'
‑
O
‑
DMAEOE)核苷、2'
‑
O
‑
氨基丙基(2'
‑
O
‑
AP)核苷、2
’‑
ara
‑
F或其组合。18.根据权利要求16所述的组合物，其中所述一个或多个经修饰的核苷包含2
’
氟修饰的核苷。19.根据权利要求16所述的组合物，其中所述一个或多个经修饰的核苷包含2
’
O
‑
甲基修饰的核苷。20.根据权利要求16所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含15
‑
23个经修饰的核苷。21.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含附接在所述寡核苷酸3'或5'末端的脂质。22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述脂质包含胆固醇、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、石胆酰基、二十二碳酰基、二十二碳六烯酰基、肉豆蔻基、棕榈基硬脂基、或α
‑
生育酚、或其组合。23.根据权利要求21所述的组合物，其中所述脂质包含胆固醇。24.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含附接在所述寡核苷酸的3'或5'末端的精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸(RGD)肽。25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述RGD肽包含环(
‑
Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
Cys)、环(
‑
Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
Lys)、环(
‑
Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
叠氮基)、氨基苯甲酸衍生的RGD、或其组合。26.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含附接在所述寡核苷酸3'或5'末端的RGD肽和脂质。27.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含修饰模式1S：5
’
NfsnsNfnNfnN
fNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn
‑3’
(SEQ ID NO:11381)，修饰模式2S：5
’
nsnsnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn
‑3’
(SEQ ID NO:11382)，修饰模式3S：5
’
nsnsnnNfnNfnNfnnnnnnnnnnsnsn
‑3’
(SEQ ID NO:11383)，修饰模式4S：5
’
NfsnsNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsnN
‑
脂质
‑3’
(SEQ ID NO:11384)，或修饰模式5S：5
’
nsnsnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnnsnsnN
‑
脂质
‑3’
(SEQ ID NO:11385)；其中“Nf”是2
’
氟修饰的核苷，“n”是2
’
O
‑
甲基修饰的核苷，“s”是硫代磷酸酯连接，并且N包含核苷。28.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含修饰模式1AS：5
’‑
nsNfsnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnsnsn
‑3’
(SEQ ID NO:11386)，修饰模式2AS：5
’
nsNfsnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnsnsn
‑3’
(SEQ ID NO:11387)，修饰模式3AS：5
’
nsNfsnnnNfnnnnnnnNfnNfnnnsnsn
‑3’
(SEQ ID NO:11388)或修饰模式4AS：5
’
nsNfsnNfnNfnnnnnnnNfnNfnnnsnsn 3
’
(SEQ ID NO:11389)；其中“Nf”是2
’
氟修饰的核苷，“n”是2
’
O
‑
甲基修饰的核苷，并且“s”是硫代磷酸酯连接。29.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含与表5
‑
13中任一个中的siRNA的有义链序列具有至少85％同一性的核苷序列。30.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含表5
‑
13中任一个中的siRNA的有义链序列。31.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含SEQ ID NO:11094、11095、11096、11097、11098、11099、11100、11101、11102、11103、11104、11105、11106、11109、11110、11113、11116、11118、11119、11121、11122、11123、11124、11125、11126、11127、11128、11129、11130、11132、11133、11134、11135、11136、11139、11140、11143、11144、11145、11146、11147、11148、11149、11150、11151、11152、11153、11154、11155、11156、11157、11158、11159、11160、11161、11162、11163、11164、11165、11166、11167、11168、11169、11170、11171、11172、11173、11174、11175、11176、11177、11178、11180、11181、11182、11183、11184、11185、11186、11187、11188、11189、11191、11193、11195、11196、11198、11199、11200、11201、11203、11204、11205、11207、11208、11210、11211或11212中的任一个的核苷序列、或其具有1或2个核苷替换、添加或缺失的有义链序列。32.根据权利要求1所述的组合物，其中所述有义链包含SEQ ID NO:11094、11095、11096、11097、11098、11099、11100、11101、11102、11103、11104、11105、11106、11109、11110、11113、11116、11118、11119、11121、11122、11123、11124、11125、11126、11127、11128、11129、11130、11132、11133、11134、11135、11136、11139、11140、11143、11144、11145、11146、11147、11148、11149、11150、11151、11152、11153、11154、11155、11156、11157、11158、11159、11160、11161、11162、11163、11164、11165、11166、11167、11168、11169、11170、11171、11172、11173、11174、11175、11176、11177、11178、11180、11181、11182、11183、11184、11185、11186、11187、11188、11189、11191、11193、11195、11196、11198、11199、11200、11201、11203、11204、11205、11207、11208、11210、11211或11212中的任一个的核苷序列。33.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含与表5
‑
13中任一个中的siRNA的反义链序列具有至少85％同一性的核苷序列。34.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含表5
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13中任一个中的siRNA的
反义链序列。35.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含SEQ ID NO:11214、11215、11216、11217、11218、11219、11220、11221、11222、11223、11224、11225、11226、11229、11230、11233、11236、11238、11239、11241、11242、11243、11244、11245、11246、11247、11248、11249、11250、11252、11253、11254、11255、11256、11259、11260、11263、11264、11265、11266、11267、11268、11269、11270、11271、11272、11273、11274、11275、11276、11277、11278、11279、11280、11281、11282、11283、11284、11285、11286、11287、11288、11289、11290、11291、11292、11293、11294、11295、11296、11297、11298、11300、11301、11302、11303、11304、11305、11306、11307、11308、11309、11311、11313、11315、11316、11318、11319、11320、11321、11323、11324、11325、11327、11328、11330、11331或11332中的任一个的核苷序列、或其具有1或2个核苷替换、添加或缺失的反义链序列。36.根据权利要求1所述的组合物，其中所述反义链包含SEQ ID NO:11214、11215、11216、11217、11218、11219、11220、11221、11222、11223、11224、11225、11226、11229、11230...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥马里，
申请(专利权)人：艾姆皮瑞克公司，
类型：发明
国别省市：