一种检测蛋白及其糖基化的生物传感器及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种检测蛋白及其糖基化的生物传感器及其使用方法，包括：表面连接待测蛋白捕获抗体的金电极、连接待测抗原检测抗体的Cu

【技术实现步骤摘要】
一种检测蛋白及其糖基化的生物传感器及其使用方法


[0001]本专利技术属于生物传感
，特别涉及一种高灵敏度的电化学同时检测蛋白及其糖基化水平的生物传感器及其使用方法。

技术介绍

[0002]糖基化是蛋白质最常见的翻译后修饰之一，在各种病理生理条件下发挥重要作用，糖基化蛋白表面的糖链特异性决定了不同的蛋白质功能。例如：O
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乙酰基葡萄糖(O
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GlcNAc)修饰与神经退行性疾病密切相关，有研究表明O
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GlcNAc修饰可以改善神经退行性病变，具有神经保护作用。且神经丝蛋白轻链(NFL)的糖基化水平也与疾病有着密切的关联，NFL的O
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糖基化和磷酸化在神经丝形成过程中相互竞争，共同调节神经丝的聚集和解离。糖基化NFL(O
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NFL)有可能构成新一代治疗的生物标志物，其糖基化形式可以增加更多的预测信息。
[0003]目前的关于糖基化水平检测的相关报导较少，糖蛋白的异常糖基化水平检测方法主要有：凝集素印迹、糖蛋白电泳、质谱、凝集素捕获化学发光免疫技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测蛋白及其糖基化的生物传感器，其特征在于，包括：表面连接待测蛋白捕获抗体的金电极、连接待测抗原检测抗体的Cu
2+
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SiO2信号探针纳米粒子、修饰辣根过氧化物酶的小麦胚芽凝集素探针。2.根据权利要求1所述的检测蛋白及其糖基化的生物传感器，其特征在于，表面连接待测蛋白捕获抗体的金电极是通过在金电极表面引入羧基，羧基活化，再将待测蛋白捕获抗体与活化的羧基进行酰胺化反应，反应完成后，封闭剩余未反应的活化位点得到；优选：将金电极与带羧酸的硫醇反应，在金电极表面引入羧基，采用NHS/EDC的混合溶液将金电极表面的羧基活化，再将待测蛋白捕获抗体与活化的羧基进行酰胺化反应，反应完成后，采用牛血清蛋白封闭剩余未反应的活化位点。3.根据权利要求1所述的检测蛋白及其糖基化的生物传感器，其特征在于，所述的连接待测抗原检测抗体的Cu
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SiO2信号探针纳米粒子制备过程：氨基修饰的SiO2纳米粒子与铜盐溶液反应即得Cu
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SiO2；Cu
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SiO2与NHS/EDC的混合溶液混合后，加入待测抗原检测抗体，搅拌反应，洗涤后，进行封闭；优选：所述的氨基修饰的SiO2与可溶性铜盐溶液质量比为1：10～50，优选比例1：10～15，优选硫酸铜、氯化铜中的任一种，反应至少8h，优选8
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14h，洗涤即得Cu
2+
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SiO2；所述的Cu
2+
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SiO2与NHS/EDC的混合溶液混合后，加入待测抗原检测抗体，搅拌至少1h，优选1
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3h，洗涤后，进行封闭；进一步优选：将SiO2纳米粒子分散在体积比例为1:5～9的无机酸和小分子醇的混合溶液，优选盐酸与甲醇的混合溶液中，在不低于40℃,优选40
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60℃温度下搅拌反应至少3h，优选3
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8h后，在所得的反应液中加入3
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氨丙基三甲氧基硅烷，SiO2纳米粒子与ATPMS的质量比为1：3～20，优选比例1：3～8，在不低于40℃，优选40
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60℃温度下搅拌反应至少3h，优选3
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8h，洗涤即得氨基修饰的SiO2纳米粒子。4.根据权利要求3所述的检测蛋白及其糖基化的生物传感器，其特征在于：将十六烷基三甲基溴化铵与三乙醇胺分散到超纯水中，在不低于40℃，优选40
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60℃温度下搅拌反应至少20min，优选20～50min后，在所得的反应液中加入正硅酸乙酯和正己烷的混合溶液，在不低于40℃，优选40
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60℃温度下搅拌反应至少1h后，优选1
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【专利技术属性】
技术研发人员：向娟，周思秋月，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：