一种利用细胞工程技术创制小麦耐热突变体的方法技术

本发明专利技术属于细胞工程技术领域，尤其涉及一种利用细胞工程技术创制小麦耐热突变体的方法。本发明专利技术利用NaN3诱变处理小麦幼穗，通过组织培养技术诱导幼穗愈伤组织，对愈伤组织进行三轮致死性热处理，然后再经过组织培养技术分化、生根、出苗，最终成功获得小麦耐热突变体。NaN3易于透过细胞膜进入细胞，以碱基替换方式影响DNA合成，造成点突变，并且只作用于复制中的DNA，染色体畸变概率低。采用逐步升高致死性热处理温度处理幼穗愈伤组织，既筛选出耐热突变体，又防止愈伤组织全部死亡。本发明专利技术不经过农杆菌侵染，不用转基因，不存在生物安全性问题，是一种比体细胞杂交和遗传转化更为便利和经济的生物技术。经济的生物技术。经济的生物技术。

【技术实现步骤摘要】
一种利用细胞工程技术创制小麦耐热突变体的方法


[0001]本专利技术属于细胞工程
，尤其涉及一种利用细胞工程技术创制小麦耐热突变体的方法。

技术介绍

[0002]利用组织培养过程中自发产生的无性系变异，或组织培养过程中人为诱导增加变异，是作物品种改良的有效途径，它是一种比体细胞杂交和遗传转化更为便利和经济的生物技术。对培养物进行物理(辐射)和化学诱变可以增加变异发生频率和变异种类。在理论上，组织培养可为诱导和选择各类突变体创造丰富的变异来源。在小麦上，无性系变异的类型包括株高、株型、熟期、分蘖力、穗粒数、千粒重等农艺性状(王培等,1996,余毓君等,1997)，蛋白质含量、麦谷蛋白亚基构成、面团形成时间及SDS沉淀值等品质性状(朱至清等,1992,王培等,1995,张艳敏等,2002)，还有耐盐、抗旱、抗除草剂、抗病等抗逆性状(肖海林等,1989,裴翠娟等,1991,郭丽娟等,1996)。在实践上，体细胞耐热无性系变异的离体筛选在乌菜、不结球白菜、菜心、非洲菊、瓜叶菊、马铃薯等多物种上获得成功(于晓英等,2007,宁志怨等,2009)。梁本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用细胞工程技术创制小麦耐热突变体的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)选取小麦幼穗：取小麦小穗原基分化期的幼穗；(2)NaN3诱变处理：将步骤(1)中所述小麦幼穗在NaN3溶液中浸泡0.5～1.5小时，无菌水冲洗4～6次；(3)制备固体培养基；(4)诱导培养愈伤组织：将步骤(2)中所述诱变处理后的小麦幼穗在无菌条件下接种到步骤(3)中制备的固体培养基上，进行愈伤组织诱导培养；(5)多轮高温选择压热处理：将步骤(4)中所述的愈伤组织利用42℃～44.5℃之间的温度进行三轮高温选择压热处理，再经过组织培养技术分化、生根、出苗；(6)获得与筛选耐热突变体：将步骤(5)中获得的幼苗3～5℃春化20～40d，然后移栽到盛有营养土的花盆中获得耐热突变体；将收获的突变体种子种到热棚中，在小麦开花期和灌浆期覆棚热处理，收获种子后测定千粒重，选定处理组千粒重高于对照组30株千粒重平均值20％的突变体，每个突变体即为一个耐热突变系；所述对照组为未经过诱变，未经过三轮热处理，但在开花期和灌浆期，与突变体一起进行棚热处理得到的小麦千粒重；所述对照组30株是为了减少单株千粒重误差选取的小样本。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中取小麦小穗原基分化期2～3mm的幼穗。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中配制的NaN3溶液设置6个不同的浓度：0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mmol L
‑1。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中配制的NaN3溶液设置3个不同的浓度：3.0，4.0，5.0mmol L
‑1。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)的具体操作过程如下：第一轮热处理：将步骤(4)中培养得到的愈伤组织42℃热处理24小时，然后将其转移至MS继代...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国良，郭秀林，刘子会，张红梅，张艳敏，张华宁，段硕楠，孟祥照，
申请(专利权)人：河北省农林科学院生物技术与食品科学研究所，
类型：发明
国别省市：