本发明专利技术公开了一种基于无金属光ATRP信号放大策略的电致化学发光肺癌检测试剂盒及使用方法和应用，该试剂盒包括以下原料：BMP、金电极、MPA、EDC、NHS、Ab1、BSA、Ab2、Me6TREN、EY、NAS、鲁米诺、超纯水、H2O2、DMSO、乙醇。本发明专利技术利用无金属光诱导原子转移自由基聚合(photo
【技术实现步骤摘要】
基于无金属光ATRP信号放大策略的电致化学发光肺癌检测试剂盒及使用方法和应用
[0001]本专利技术涉及一种基于无金属光诱导原子转移自由基聚合(photo
‑
ATRP)信号放大策略的电致化学发光肺癌检测试剂盒及使用方法和应用，属于生物分析
技术介绍
[0002]CYFRA21
‑
1被认为是一种主要用于检测肺癌的肿瘤标记物，尤其对非小细胞肺癌(non
‑
small cell lung cancer，NSCLC)的诊断具有重要价值。如果肺部存在不清晰的环形阴影，同时血清CYFRA21
‑
1浓度>30ng/mL，原发性支气管肺癌的可能性非常高。CYFRA21
‑
1对各类非小细胞肺癌阳性检出率为70％～85％。CYFRA21
‑
1的血清浓度水平高低与肿瘤临床分期正相关，也可作为肺癌手术和放化疗后追踪早期复发的有效指标。因此，CYFRA21
‑
1检测对NSCLC的临床诊断具有重要意义。目前已经报道了几种检测CYFRA21
‑
1的方法：酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、化学发光免疫测定和化学发光酶免疫测定等。但是，在检测过程中仍存在假阳性、耗时长、需要专门仪器和专业的操作人员等缺点。
[0003]利用链式杂交反应、滚轮扩增反应、纳米材料和聚合反应等信号放大技术可以提高传感器的检测性能。其中，原子转移自由基聚合反应(ATRP)具有单体原料广泛，聚合反应可控等优点而广泛应用于生物传感领域。但是，传统ATRP反应由于聚合速度较慢，需要加入大量的重金属(例如铜)离子作为催化剂，重金属离子具有一定的生物毒性，需要繁琐的去除和回收过程，而且重金属离子自带的颜色会干扰传感器的检测结果。与传统金属催化剂相比，光诱导ATRP具有以下优点：1)无需添加重金属催化剂；2)反应条件温和；3)光诱导聚合过程可控。因此研究一种基于光ATRP信号放大策略的CYFRA21
‑
1检测的超灵敏电化学传感平台具有重要意义。
技术实现思路
[0004]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种基于无金属光诱导原子转移自由基聚合(photo
‑
ATRP)信号放大策略的电致化学发光肺癌检测试剂盒及使用方法和应用，避免了传统ATRP反应中重金属离子催化剂的使用，且信号得到成倍的放大，提高检测的灵敏度，稳定性和重现性。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案之一是：
[0006]一种基于无金属光ATRP信号放大策略的电致化学发光肺癌检测试剂盒，包括以下原料：BMP、金电极、MPA、EDC、NHS、Ab1、BSA、Ab2、Me6TREN、EY、NAS、鲁米诺、超纯水、H2O2、DMSO、乙醇。
[0007]进一步，部分原料使用时需配制成溶液，其中，BMP溶液的浓度为3mM，MPA溶液的浓度为10mM，用于活化BMP的NHS溶液的浓度为3mM，EDC溶液的浓度为3mM，用于活化MPA的EDC和NHS混合溶液中EDC和NHS的浓度分别为0.2M和0.05M，Ab1溶液的浓度为1μg/mL，BSA溶液的浓度为1％，Ab2溶液的浓度为1μg/mL，Me6TREN溶液的浓度为10mM，EY溶液的浓度为5mM，
NAS溶液的浓度为12mM，鲁米诺溶液的浓度为15mM。
[0008]本专利技术的技术方案之一是：一种电致化学发光肺癌检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
[0009](1)Ab2
‑
BMP(Ab2*)合成
[0010]①
将BMP溶解在乙醇溶液中，得到BMP溶液；
[0011]②
在BMP溶液中加入NHS溶液和EDC溶液，搅拌，得到羧基活化的BMP溶液；
[0012]③
将羧基活化的BMP溶液加入到Ab2溶液中，搅拌，得到Ab2*溶液；
[0013](2)电极预处理
[0014]裸金电极进行打磨获得抛光镜面；
[0015](3)电极修饰
[0016]①
将预处理的电极在MPA溶液中浸泡，洗涤，吹干；
[0017]②
将步骤
①
的电极在EDC和NHS混合溶液中浸泡；
[0018]③
将Ab1溶液直接滴到步骤
②
的电极表面，反应，然后在BSA溶液中浸泡；
[0019]④
将待测样品滴到步骤
③
的电极表面，反应，洗涤；
[0020]⑤
将Ab2*溶液滴到步骤
④
的电极表面，反应；
[0021]⑥
将步骤
⑤
的电极放置在Me6TREN溶液、EY溶液、NAS溶液、H2O和DMSO组成的混合溶液中，反应；
[0022]⑦
将步骤
⑥
的电极放置在鲁米诺溶液中，反应；
[0023]⑧
将步骤
⑦
的电极放置在H2O2中测量鲁米诺的发光强度。
[0024]进一步，步骤(1)中乙醇溶液的浓度为50％～80％(v/v)；BMP溶液、NHS溶液和EDC溶液的体积比为1:1:1；羧基活化的BMP溶液的浓度为1mM，Ab2溶液的浓度为1μg/mL，羧基活化的BMP溶液和Ab2溶液的体积比为1:1。
[0025]进一步，步骤(1)中的搅拌温度为37℃，时间为1～3h。
[0026]进一步，步骤(2)中
①
的浸泡温度为37℃，时间为2～8h；
②
的浸泡温度为37℃，时间为1～2h；
③
的反应温度为37℃，时间为1～3h；
④
的反应温度为37℃，时间为1～3h；
⑤
的反应温度为37℃，时间为1～3h；
⑥
的反应条件为室温，470nm光照射，2～5h；
⑦
的反应温度为37℃，1～3h。
[0027]进一步，Me6TREN溶液、EY溶液、NAS溶液、H2O和DMSO的体积比为5:5:1000:5000:3990。
[0028]本专利技术的技术方案之一是：一种上述检测试剂盒在CYFRA21
‑
1检测中的应用。
[0029]本专利技术的技术方案之一是：一种上述检测试剂盒在肺癌检测中的应用。
[0030]本专利技术检测方法原理示意图如图1所示。
[0031]本专利技术采用photo
‑
ATRP和ECL信号放大策略。首先，将MPA探针通过自组装的极性共价键连接到电极表面，将Ab1通过氨基缩合反应作为捕获探针连接到电极表面。用牛血清白蛋白(BSA)关闭残余结合位点后，通过抗原与抗体的相互作用，将CYFR21
‑
1和Ab2
*
依次连在金电极表面。BMP中的溴基被NAS的双键识别，通过phot本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于无金属光ATRP信号放大策略的电致化学发光肺癌检测试剂盒，其特征在于，包括以下原料：BMP、金电极、MPA、EDC、NHS、Ab1、BSA、Ab2、Me6TREN、EY、NAS、鲁米诺。2.根据权利要求1所述的电致化学发光肺癌检测试剂盒，其特征在于，还包括超纯水、H2O2、DMSO、乙醇。3.根据权利要求1所述的电致化学发光肺癌检测试剂盒，其特征在于，部分原料使用时需配制成溶液，其中，BMP溶液的浓度为3mM，MPA溶液的浓度为10mM，用于活化BMP的NHS溶液的浓度为3mM，EDC溶液的浓度为3mM，用于活化MPA的EDC和NHS混合溶液中EDC和NHS的浓度分别为0.2M和0.05M，Ab1溶液的浓度为1μg/mL，BSA溶液的浓度为1％，Ab2溶液的浓度为1μg/mL，Me6TREN溶液的浓度为10mM，EY溶液的浓度为5mM，NAS溶液的浓度为12mM，鲁米诺溶液的浓度为15mM。4.一种如权利要求1所述的电致化学发光肺癌检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)Ab2
‑
BMP(Ab2*)合成
①
将BMP溶解在乙醇溶液中，得到BMP溶液；
②
在BMP溶液中加入NHS溶液和EDC溶液，搅拌，得到羧基活化的BMP溶液；
③
将羧基活化的BMP溶液加入到Ab2溶液中，搅拌，得到Ab2*溶液；(2)电极预处理裸金电极进行打磨获得抛光镜面；(3)电极修饰
①
将预处理的电极在MPA溶液中浸泡，洗涤，吹干；
②
将步骤
①
的电极在EDC和NHS混合溶液中浸泡；
③
将Ab1溶液直接滴到步骤
②
的电极表面，反应，然后在BSA溶液中浸泡；
④
将待测样品滴到步骤
③
的电极表面，反应，洗涤；
⑤
将Ab2*...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨怀霞，孙于植，司富春，崔晓静，刘艳菊，郭亮，张京玉，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。