白及种质资源离体保存方法技术

本发明专利技术公开了一种白及种质资源离体保存方法，包括以下步骤：步骤一、将白及假鳞茎作为外植体置于第一培养基中培养，得到丛生芽；步骤二、将丛生芽置于第二培养基中培养，得到试管苗；步骤三、将试管苗接种到第三培养基中离体保存，其中，第三培养基中的蔗糖含量为40～100g/L。步骤三中，第三培养基还包括1/2MS+0.3mg

【技术实现步骤摘要】
白及种质资源离体保存方法


[0001]本专利技术涉及种苗培养
更具体地说，本专利技术涉及一种白及种质资源离体保存方法。

技术介绍

[0002]白及是兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.是国家二级保护植物，多年生草本，生长于山野川谷较潮湿处。分布福建、广东、广西、江西等地。是药食两用植物，具有收敛止血，消肿生肌功效。用于咯血，吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂。近年来人们大量采挖和收购，导致了野生资源的供不应求，野生白及资源濒临枯竭，同时在引种栽培时较难成活，给种质保存与利用带来较大的困难。随着大量采挖和收购导致野生资源濒临枯竭，市场供不应求，人工栽培种植成本高且不成规模，开展节约型组织培养工厂化生产是形势所需。采用生物技术组织培养手段，可以有效快速地提高白及种苗的繁殖速度和质量，实现白及优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。但是现有技术中白及离体保存时间较短，并不能满足白及离体保存的需求。

技术实现思路

[0003]本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0004]本专利技术还有一个目的是提供一种白及种质资源离体保存方法，其通过改变第三培养基中蔗糖的含量，实现延长白及离体保存的时间。
[0005]为了实现本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种白及种质资源离体保存方法，包括以下步骤：
[0006]步骤一、将白及假鳞茎作为外植体置于第一培养基中培养，得到丛生芽；
[0007]步骤二、将丛生芽置于第二培养基中培养，得到试管苗；
[0008]步骤三、将试管苗接种到第三培养基中离体保存，其中，第三培养基中的蔗糖含量为40～100g/L。
[0009]优选的是，步骤三中，第三培养基包括1/2MS+0.3mg
·
L
‑
22
‑
BA+0.2mg/L NAA+6g/L琼脂，第三培养基的pH为5.8。
[0010]优选的是，步骤三中，离体保存方法为：温度为22
±
1℃，光照强度为1200～2200Lx，光照时间为6～8h/d。
[0011]优选的是，步骤一中，第一培养基包括MS+6
‑
BA1.5mg/L+NAA0.5 mg/l+KT0.4mg/L+30g/L蔗糖+5.6g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8。
[0012]优选的是，步骤一中，在第一培养基中培养的条件：温度为24～28℃，光照强度为1400～2000Lx，光照时间为12～14h/d。
[0013]优选的是，步骤二中，第二培养基包括MS+1.0mg
·
L
‑
22
‑
BA+0.5mg/Ll IAA+40g/L蔗糖+6g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8。
[0014]优选的是，步骤二中，在第二培养基中培养的条件为：温度为22～25℃，光照强度
为2600～2800Lx，光照时间为12～14h/d。
[0015]步骤三中，第三培养基还包括0.05mg/L半胱氨酸+0.04mg/L甘氨酸+0.3mg/L烟酸+0.2g/L血红素肽+10mg/L青核桃皮提取物+8mg/L山楂叶提取物；其中，
[0016]青核桃皮提取物的制备方法为：先将青核桃皮粉碎，得到粉碎料，然后向粉碎料中加入粉碎料总质量5倍量的乙醇、0.1倍量的柠檬酸、1倍量的水、1倍量丙酮混合，并升温至55℃加热5h，过滤除去滤渣，得到混合液，再除去混合液中的溶剂，即得到青核桃皮提取物；
[0017]山楂叶提取物的制备方法为：先将山楂叶粉碎，得到粉碎物料，然后向粉碎物料中加入粉碎物料总质量5倍量的乙醇，并升温回流8h，过滤除去滤渣，并将滤液浓缩，得到浓缩物；取浓缩物总质量2倍量的水，并使用醋酸调节水的pH为5～6，然后再将浓缩物加入水中混合，再向体系中加入浓缩物总质量0.8倍量的乙酸乙酯，搅拌10min，静置体系分层，得到水层，并将水层浓缩，即得到山楂叶提取物。
[0018]本专利技术至少包括以下有益效果：
[0019]本专利技术的方法可以使种质资源得到长期的保存，并且得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量白及的优质种苗，有效解决了白及属种质资源保存及规模化育苗问题，具有广泛的应用前景；本专利技术通过引入山楂提取物、青核桃皮提取物、通入氧气及营养液可明显延长试管苗的离体保存时间。
[0020]本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
[0021]下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0022]<实施例1>
[0023]一种白及种质资源离体保存方法，包括以下步骤：
[0024]步骤一、将白及假鳞茎作为外植体置于第一培养基中培养，得到丛生芽，在将白及假磷茎置于第一培养基前，先将白及假鳞茎置于在75％乙醇中浸泡45s，然后使用无菌水冲洗3次，并投入添加2％吐温
‑
20的0.1％Hgcl2溶液浸泡4min，再用无菌水冲洗3次，再次投入添加2％吐温
‑
20的0.1％Hgcl2溶液浸泡4min，最后用无菌水3次，再剥去白及假鳞茎3层外皮，接种于第一培养基中培养；
[0025]步骤二、待丛生芽长至2～3cm，将丛生芽置于第二培养基中培养至有4～6片叶子(此时试管苗已生根)，得到试管苗；
[0026]步骤三、将试管苗接种到第三培养基中离体保存，其中，第三培养基中的蔗糖含量为40g/L。
[0027]步骤三中，第三培养基包括1/2MS+0.3mg
·
L
‑
22
‑
BA+0.2mg/L NAA+6g/L琼脂，第三培养基的pH为5.8。
[0028]步骤三中，离体保存方法为：温度为22
±
1℃，光照强度为1200Lx，光照时间为6～8h/d。
[0029]步骤一中，第一培养基包括MS+6
‑
BA1.5mg/L+NAA0.5 mg/l+KT0.4mg/L+30g/L蔗糖+5.6g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8。
[0030]步骤一中，在第一培养基中培养的条件：温度为24～28℃，光照强度为1400Lx，光照时间为12h/d。
[0031]步骤二中，第二培养基包括MS+1.0mg
·
L
‑
22
‑
BA+0.5mg/L IAA+40g/L蔗糖+6g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8。
[0032]步骤二中，在第二培养基中培养的条件为：温度为22～25℃，光照强度为2600Lx，光照时间为12h/d。
[0033]<实施例2>
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白及种质资源离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将白及假鳞茎作为外植体置于第一培养基中培养，得到丛生芽；步骤二、将丛生芽置于第二培养基中培养，得到试管苗；步骤三、将试管苗接种到第三培养基中离体保存，其中，第三培养基中的蔗糖含量为40～100g/L。2.如权利要求1所述的白及种质资源离体保存方法，其特征在于，步骤三中，第三培养基包括1/2MS+0.3mg
·
L
‑
22
‑
BA+0.2mg/L NAA+6g/L琼脂，第三培养基的pH为5.8。3.如权利要求2所述的白及种质资源离体保存方法，其特征在于，步骤三中，离体保存方法为：温度为22
±
1℃，光照强度为1200～2200Lx，光照时间为6～8h/d。4.如权利要求1所述的白及种质资源离体保存方法，其特征在于，步骤一中，第一培养基包括MS+6
‑
BA1.5mg/L+NAA0.5 mg/L+KT0.4mg/L+30g/L蔗糖+5.6g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8。5.如权利要求1所述的白及种质资源离体保存方法，其特征在于，步骤一中，在第一培养基中培养的条件：温度为24～28℃，光照强度为1400～2000Lx，光照时间为12～14h/d。6.如权利要求1所述的白及种质资源离体保存方法，其特征在于，步骤二中，第二培养基包括M...

【专利技术属性】
技术研发人员：李翠，韦莹，张占江，郭晓云，陈晓英，雷明，黄浩，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：