特异性识别C5A的抗体及其应用制造技术

本申请涉及特异性识别补体组分5a(C5a)的抗体或抗原结合片段，及其制备方法和用途。及其制备方法和用途。及其制备方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性识别C5A的抗体及其应用
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[0003]本申请涉及特异性识别补体组分5a(C5a)的抗体及其制造、使用方法，包括用于治疗自身免疫疾病和/或炎症疾病、癌症、疼痛、移植相关疾病的用途。

技术介绍

[0004]C5a是过敏性反应和炎症过程中的一种活性肽，其在补体级联反应中由C5转化酶切割补体组分C5而形成。C5a刺激肥大细胞脱粒、肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
‑
α)和组胺的释放，还通过增加内皮细胞表面粘附分子的表达从而将吞噬细胞募集至感染和炎症部位(Mollnes,T.E.et al.Blood 2002,100,1869
–
1877；Riedemann,N.C.et al.Immunity 2003,19,193
–
202)。在一些病理刺激的情况下，如移植后异体移植排斥和哮喘，C5a还导致血管通透性增加(Gueler,F.et al.J.Am.Soc.Nephrol.2008,19,2302
–
2312；Krug,N.et al.Am.J.Respir.Crit.Care Med.2001,164,1841
–
1843；Khan,M.A.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2013,110,6061
–
6066)。已有多项研究讨论过血清中C5a水平。在Lechner等人的一项研究中，对照组中C5a的水平为8.34+2.05(ng/mL)(Lechner,J.et al.Immun.Ageing 2016,13,4)。另有研究表明，在正常情况下，由于过敏毒素的快速清除，血浆中C5a水平非常低(Oppermann,M.et al.Immunology 1994,82,516
–
521)。使用C5a(25nM)处理后，小鼠皮质肾小管细胞中转化生长因子
‑
β(TGF
‑
β)的水平升高，这表明C5a可导致肾纤维化和肾疤痕形成(Boor,P.et al.J.Am.Soc.Nephrol.2007,18,1508
–
1515)。
[0005]C5a是一种有效的促炎分子，与一种经典的G蛋白偶联受体(GPCR)C5aRI(CD88)结合并引发促炎信号通路激活(Li,R.et al.FASEB J.2013,27,855
–
864)。C5aR在非髓样细胞上广泛表达如脐血管内皮细胞(HUVEC)，鼠类真皮，肝，肺和肾近端小管(Monsinjon,T.et al.FASEB J.2003,17,1003
–
1014；Gerard,C.et al.Annu.Rev.Immunol.1994,12,775
–
808；Haviland,D.L.et al.J.Immunol.1995,154,1861
–
1869)。此外，研究证明C5aR在肾小球内皮细胞而非足细胞中表达，这表明C5a可能主要在肾内皮细胞中引起蛋白尿(Tsai,I.J.et al.Cell.Mol.Life Sci.2015,72,3157
–
3171)。
[0006]因此，通过中和C5a阻断其与C5aR的结合，成为一种治疗C5a介导的疾病和病症的方法。专利申请WO2011063980中披露了针对人C5a的抗体INab308(InflaRx)，WO2012088247中披露了C5a抗体MEDI
‑
7814(MedImmune)，US10450370中披露了C5a抗体BNJ383(Alexion)。
[0007]本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公开的专利申请中披露的内容，以引用方式全部并入本文中。
[0008]申请概述
[0009]在一个方面，本申请提供一种分离的抗C5a抗体，其能够特异性地与人C5a上的表位结合，其中所述分离的抗C5a抗体特异性结合如SEQ ID NO：141所示的人C5a中的第31位D残基，第32位E残基和第40位R残基中至少一个氨基酸残基。在一些实施例中，分离的抗C5a抗体特异性地结合如SEQ ID NO：141所示的人C5a中的31
‑
40位残基。在一些实施例中，分离的抗C5a抗体特异性结合一个表位，该表位在以下序列之内、由以下序列组成或包含以下序列：(i)DGACVNNDETCEQRAARISLGPR、(ii)NDETCEQRAARISLGPR或(iii)DETCEQRAAR。在一些实施例中，分离的抗C5a抗体特异性结合由以下序列组成或包含以下序列的多肽：(i)DGACVNNDETCEQRAARISLGPR、(ii)NDETCEQRAARISLGPR或(iii)DETCEQRAAR。在一些实施例中，分离的抗C5a抗体与人C5a结合的Kd值为0.1pM至1nM的结合。
[0010]在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗C5a抗体，所述分离的抗C5a抗体包括重链可变域(V
H
)，所述V
H
包含：一个包含序列X1YYX2Q(SEQ ID NO:67)的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1，其中X1为D或N，X2为M或I；一个包含序列LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(SEQ ID NO:68)的HC
‑
CDR2，其中X1为K或N，X2为A或V，X3为V、N、或I，X4为G、E、F、H、I、Q或R，X5为T、V或A，X6为Q、E、T或S，X7为Y或F，X8为V或L；和一个包含序列RX1GPPGLX2(SEQ ID NO:69)的HC
‑
CDR3，其中X1为A、L或V，X2为T、S或A；以及轻链可变域(V
L
)，所述V
L
包含：一个包含序列RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(SEQ ID NO:70)的LC
‑
CDR1，其中X1为S、R或N，X2为A、H或D，X3为S或T，X4为D或N，X5为G、A或R，X6为N、I、T、E或A，X7为I、M、L或V；一个包含序列GX1SX2RAS(SEQ ID NO:71)的LC
‑
CDR2，其中X1为G或A，X2为N或K；和一个包含序列X1QHX2X3LPX4T(SEQ ID NO:72)的LC
‑
CDR3，其中X1为L或M，X2为R或K，X3为A或V，X4为P或L。
[0011]在一些实施例中，提供一种分离的抗C5a抗体，包括V
H
，所述V本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其特异性结合如SEQ ID NO：141所示的人C5a中的第31位D残基，第32位E残基和第40位R残基中至少一个氨基酸残基。2.根据权利要求1中所述的分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其特异性结合如SEQ ID NO：141所示的人C5a中的31
‑
40位残基。3.一种分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其特异性结合人C5a上的表位，所述表位在以下序列之内、由以下序列组成或包含以下序列：(i)DGACVNNDETCEQRAARISLGPR；(ii)NDETCEQRAARISLGPR；或(iii)DETCEQRAAR。4.一种分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其特异性结合由以下序列组成或包含以下序列的多肽：(i)DGACVNNDETCEQRAARISLGPR；(ii)NDETCEQRAARISLGPR；或(iii)DETCEQRAAR。5.根据权利要求1
‑
4中任一项分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其中所述抗C5a抗体或抗原结合片段与人C5a结合的Kd值为0.1pM至1nM。6.根据权利要求1
‑
5中任一项分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其中所述抗C5a抗体或抗原结合片段在存在2倍或更多的摩尔过量未切割天然人C5蛋白时，结合游离的人C5a蛋白。7.一种分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，其中所述抗C5a抗体或抗原结合片段包括：重链可变域(V
H
)，所述V
H
包含：一个包含序列X1YYX2Q(SEQ ID NO:67)的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1，其中X1为D或N，X2为M或I；一个包含序列LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(SEQ ID NO:68)的HC
‑
CDR2，其中X1为K或N，X2为A或V，X3为V、N、或I，X4为G、E、F、H、I、Q或R，X5为T、V或A，X6为Q、E、T或S，X7为Y或F，X8为V或L；和一个包含序列RX1GPPGLX2(SEQ ID NO:69)的HC
‑
CDR3，其中X1为A、L或V，X2为T、S或A；以及轻链可变域(V
L
)，所述V
L
包含：一个包含序列RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(SEQ ID NO:70)的LC
‑
CDR1，其中X1为S、R或N，X2为A、H或D，X3为S或T，X4为D或N，X5为G、A或R，X6为N、I、T、E或A，X7为I、M、L或V；一个包含序列GX1SX2RAS(SEQ ID NO:71)的LC
‑
CDR2，其中X1为G或A，X2为N或K；和一个包含序列X1QHX2X3LPX4T(SEQ ID NO:72)的LC
‑
CDR3，其中X1为L或M，X2为R或K，X3为A或V，X4为P或L。8.一种分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，包括V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NOs:1
‑
6中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NOs:7
‑
29中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NOs:30
‑
38中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NOs:39
‑
56中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NOs:57
‑
59中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NOs:60
‑
66中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列。9.一种分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，包括V
H
，其包含具有SEQ ID NOs:73
‑
111中任一氨基酸序列的V
H
中的HC
‑
CDR1、HC
‑
CDR2和HC
‑
CDR3；以及V
L
，其包含具有SEQ ID NOs:112
‑
140中任一氨基酸序列的V
L
中的LC
‑
CDR1、LC
‑
CDR2和LC
‑
CDR3。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的分离的抗C5a抗体或抗原结合片段，包括：(i)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(ii)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(iii)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(iv)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(v)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(vi)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列具有至少
90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(vii)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(viii)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(ix)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个HC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个HC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；以及V
L
，所述V
L
包含：一个LC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，一个LC
‑
CDR2，其包含与SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，和一个LC
‑
CDR3，其包含与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列；(x)V
H
，所述V
H
包含：一个HC
‑
CDR1，其包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％序列同源性的序列，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱萍霞，李忠，
申请(专利权)人：舒泰神北京生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：