唾液酸转移酶ST3GAL4作为EGFR-TKI耐药标志物的新应用制造技术

本发明专利技术公开了唾液酸转移酶ST3GAL4作为辅助评估EGFR

【技术实现步骤摘要】
唾液酸转移酶ST3GAL4作为EGFR
‑
TKI耐药标志物的新应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种唾液酸转移酶ST3GAL4作为EGFR
‑
TKI 耐药标志物的新应用和EGFR
‑
TKI耐药分析试剂盒。

技术介绍

[0002]肺癌分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌占80％以上。
[0003]奥希替尼(Osimertinib，OSI)作为第三代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowth factor receptor
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tyrosine kinase inhibitor，EGFR
‑
TKI)目前广泛应用于EGFR敏感突变晚期非小细胞肺癌患者的一、二线治疗，疗效显著，是第三代EGFR
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TKI的代表药物。吉非替尼(Gefitinib，伊瑞可，易瑞沙)是一种口服表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR
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TK)抑制剂(属小分子化合物)，是第一代EGFR
‑
TKI的代表药物。第一代EGFR
‑
TKI还有厄洛替尼(Erlotinib)、埃克替尼(icotinib hydrochloride)。阿法替尼(afatinib)是表皮生长因子受体 (EGFR)和人表皮生长因子受体2(HER2)酪氨酸激酶的强效、不可逆的双重抑制剂，是第二代EGFR
‑
TKI的代表药物。第二代EGFR
‑<br/>TKI还有达克替尼(Dacomitinib)。
[0004]然而，奥希替尼、吉非替尼、阿法替尼等EGFR
‑
TKI同样面临获得性耐药难题，且耐药机制复杂，严重限制了其临床应用。因此进一步探索奥希替尼、吉非替尼、阿法替尼等 EGFR
‑
TKI获得性耐药的分子机制及逆转策略具有重要的科学意义和临床应用前景。
[0005]唾液酸转移酶ST3GAL4是外泌型蛋白，目前已有成熟的ELISA试剂盒，经济、可靠、易获得。

技术实现思路

[0006]本专利技术的专利技术人通过对奥希替尼耐药肺癌细胞株RNAseq差异基因筛查结果发现，奥希替尼耐药肺癌细胞株与母本细胞株虽然在凋亡、自噬等多方面存在差异，但令人惊奇的是在奥希替尼耐药肺癌细胞株中唾液酸转移酶ST3GAL4突变表达异常升高，差异非常显著。进一步的Western blot检测证实上述发现，并且在奥希替尼耐药患者血清学标本中发现唾液酸转移酶 ST3GAL4异常升高。而通过siRNA干扰ST3GAL4的表达，奥希替尼耐药细胞株耐药水平显著降低。专利技术人经过进一步实验验证唾液酸转移酶ST3GAL4与第三代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂奥希替尼、第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼)、第二代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(阿法替尼、达克替尼)耐药密切相关。基于此，本专利技术请求保护以下技术方案：
[0007]唾液酸转移酶ST3GAL4作为辅助评估EGFR
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TKI耐药的标志物的应用。
[0008]唾液酸转移酶ST3GAL4在制备作为EGFR
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TKI耐药标志物试剂中的应用。
[0009]在上述应用中，所述EGFR
‑
TKI包括第一、二、三代EGFR
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TKI药物。
[0010]本专利技术还保护唾液酸转移酶ST3GAL4在制备用于辅助评估EGFR
‑
TKI耐药的试剂盒中的用途。
[0011]所述试剂盒是根据样品中ST3GAL4的含量或含量变化趋势来辅助评估EGFR
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TKI耐
药的状态。
[0012]所述试剂盒为蛋白表达量检测试剂盒。
[0013]在上述的用途中，所述EGFR
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TKI包括第一、二、三代EGFR
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TKI药物。
[0014]本专利技术还保护一种EGFR
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TKI耐药分析试剂盒，包括唾液酸转移酶ST3GAL4表达量检测试剂。
[0015]在上述的EGFR
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TKI耐药分析试剂盒中，所述EGFR
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TKI包括第一、二、三代EGFR
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TKI 药物。
[0016]上述的应用中，或者上述的用途中，或者上述的试剂盒中，所述第一代EGFR
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TKI药物包括吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼，所述第二代EGFR
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TKI药物包括阿法替尼、达克替尼，所述第三代EGFR
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TKI药物包括奥希替尼。
[0017]本专利技术的有益效果是：申请人发现在奥希替尼耐药肺癌细胞株中唾液酸转移酶ST3GAL4 突变表达异常升高，经过后续实时荧光定量PCR、细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞侵袭实验等实验进一步证实了ST3GAL4与EGFR
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TKI奥希替尼、吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼耐药密切相关，ST3GAL4调控c
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Met过表达介导奥希替尼、吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼耐药，首次揭示蛋白糖基化修饰在奥希替尼、吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼的耐药中的作用及其关键机制。ST3GAL4 可以作为EGFR
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TKI奥希替尼、吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼耐药的标志物，ST3GAL4检测目前已有成熟技术，比如ELISA试剂盒检测患者血液标本、用IHC 检测患者组织蜡块标本，通过检测ST3GAL4可以指示患者是否对EGFR
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TKI奥希替尼、吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼耐药，指导及时调整治疗策略，具有重要的社会和经济效益。
附图说明
[0018]图1是免疫印迹实验检测奥希替尼敏感细胞和耐药细胞唾液酸转移酶ST3GAL4表达。
[0019]图2是酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测病人血清学标本唾液酸转移酶ST3GAL4。
[0020]图3是荧光定量法检测过表达ST3GAL4后PC
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9GR和H1975细胞的ST3GAL4转录水平。
[0021]图4是MTT实验检测过表达ST3GAL4后PC
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9GR和H1975细胞对奥希替尼敏感性的影响。
[0022]图5是MTT实验检测奥希替尼耐药细胞株PC
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9GROR3和H1975OR3干扰ST3GAL4后对奥希替尼敏感性的影响。
[0023]图6是奥希替尼敏感细胞PC
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9GR和H1975过表达ST3GAL4后克隆形成实验结果。
[0024]图7是Transwell侵袭实验检测PC
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9GR和H1975细胞过表达ST3GAL4前后的侵袭能力本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.唾液酸转移酶ST3GAL4作为辅助评估EGFR
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TKI耐药的标志物的应用。2.唾液酸转移酶ST3GAL4在制备作为EGFR
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TKI耐药标志物试剂中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述EGFR
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TKI包括第一、二、三代EGFR
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TKI药物。4.唾液酸转移酶ST3GAL4在制备用于辅助评估EGFR
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TKI耐药的试剂盒中的用途。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述试剂盒是根据样品中ST3GAL4的含量或含量变化趋势来辅助评估EGFR
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TKI耐药的状态。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述试剂盒为蛋白表达量检测试剂盒。7.根据权利要求4
‑
6任一项所述的用途，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：何勇，韩睿，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：