冠状病毒重叠肽及其在检测细胞免疫中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种氨基酸序列如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
冠状病毒重叠肽及其在检测细胞免疫中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
；具体地说，本专利技术涉及一种冠状病毒，特别是 新冠病毒的重组蛋白及其在检测细胞免疫中的应用。

技术介绍

[0002]冠状病毒是一类有包膜的单股正链RNA病毒。国际病毒学分类委员会于2012 年将冠状病毒分为α、β、γ和δ等4大类。目前共发现7种可以感染人类的冠状病毒， 分别是人冠状病毒229E(HCoV-229E)、人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)、人冠状 病毒OC43(HCoV-OC43)、I型人冠状病毒(HCoV-HKU1)、严重急性呼吸道综合征 冠状病毒(SARS-CoV)及中东呼吸综合征冠状病毒(MERSCoV)和新型冠状病毒 (2019-nCoV)。其中，SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV是目前发现的人高致病 性冠状病毒，给人类健康带来了严重危害。
[0003]在冠状病毒中，新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是从2019年开始流行的一种能 够感染人类并且快速传播的新型冠状病毒。新型冠状病毒感染会引发新冠肺 炎，以发热、干咳、乏力等为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上 呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为 急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障 碍及多器官功能衰竭等。从目前收治的病例情况看，多数患者预后良好，少数 患者病情危重。其中老年人和有慢性基础疾病者，因为自身免疫力低下预后较 差。
[0004]由于当前缺乏特异性抗病毒的药物干预，新型冠状病毒肺炎患者康复基本 上依赖于机体的免疫细胞-特别是激活的T细胞和B细胞。大多数个体接触到病 毒后，并无症状或仅出现轻微症状，有的出现发热胸闷等症状，经一段时间后 自行好转；但是对于免疫功能不强或者低下者，病毒感染却是一场严峻考验。
[0005]细胞免疫是免疫的一个重要组成。T细胞受到抗原刺激增殖、分化，活化 为辅助T细胞及效应T细胞，当相同抗原再次进入机体的细胞中时，活化的T细 胞对抗原直接杀伤或者释放细胞因子协同杀伤。因此细胞免疫在控制和清除细 菌、病毒及肿瘤中起着不可忽视的作用，细胞免疫的监测对于疾病治疗、预后 以评价疫苗的有效性至关重要。
[0006]因此，如果能对新冠病毒感染者针对冠状病毒，特别是新冠病毒的细胞免 疫力进行筛查，就可以更好地甄别潜在的有可能发展成危重症的患者，预示是 否存在二次感染的可能性，或者用于评价疫苗的有效性。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种能够筛查冠状病毒感染者中针对冠状病毒的 细胞免疫力的技术手段。凭借该技术手段，可以更好地对冠状病毒感染者进行 分类，例如分类为冠状病毒易感人群或有可能发展成危重症的患者，以及可以 预示是否存在二次感染的可能性，或者可以用于评价疫苗的有效性。
[0008]在第一方面，本专利技术提供一种用于检测针对冠状病毒感染的细胞免疫的多肽， 所
能；更具体地，是检测T细胞分泌IFNγ的能力。
[0026]在第七方面，本专利技术提供第一方面所述的多肽在制备检测针对冠状病毒感染 的细胞免疫的检测试剂中的用途。
[0027]在优选的实施方式中，所述冠状病毒是严重急性呼吸道综合征冠状病毒、中 东呼吸综合征冠状病毒或新型冠状病毒；优选严重急性呼吸道综合征冠状病毒或新 型冠状病毒；更优选新型冠状病毒。
[0028]在优选的实施方式中，所述检测针对冠状病毒感染的细胞免疫是检测T细胞功 能；更具体地，是检测T细胞分泌IFNγ的能力。
[0029]在第八方面，本专利技术提供第一方面所述的多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0030](1)化学合成第一方面所述的多肽；或者，在适合产生所述多肽的条件下培养 第四方面所述的宿主细胞，从而产生第一方面所述的多肽；和
[0031](2)分离步骤(1)中合成的多肽，或者从步骤(1)的培养物中分离产生的所述多 肽。
[0032]在第九方面，本专利技术提供一种评价冠状病毒疫苗的有效性的方法，所述方法 包括以下步骤：
[0033]1)获得接受冠状病毒疫苗的对象的T细胞；
[0034]2)用第一方面所述的多肽刺激所述T细胞；
[0035]3)检测所述T细胞释放的IFNγ；和
[0036]4)根据受到特异性刺激释放IFNγ的T细胞数量判断机体对冠状病毒的细胞免 疫力，从而评判疫苗的有效性。
[0037]在优选的实施方式中，所述对象的T细胞是从脾脏细胞或者PBMC等中获得。
[0038]在优选的实施方式中，所述冠状病毒是严重急性呼吸道综合征冠状病毒、中 东呼吸综合征冠状病毒或新型冠状病毒；优选严重急性呼吸道综合征冠状病毒或新 型冠状病毒；更优选新型冠状病毒。
[0039]在另一方面，本专利技术提供一种对冠状病毒感染患者进行预后或判断冠状病毒 感染患者是否存在二次感染可能性的方法，所述方法包括以下步骤：
[0040]1)获得接受冠状病毒感染对象的T细胞；
[0041]2)用第一方面所述的多肽刺激所述T细胞；
[0042]3)检测所述T细胞释放的IFNγ；和
[0043]4)根据受到特异性刺激释放IFNγ的T细胞数量判断冠状病毒感染患者是否预 后良好或者是否存在二次感染的可能性。
[0044]在优选的实施方式中，所述对象的T细胞或B细胞是从脾脏细胞、PBMC等中 获得。
[0045]在优选的实施方式中，所述冠状病毒是严重急性呼吸道综合征冠状病毒、中 东呼吸综合征冠状病毒或新型冠状病毒；优选严重急性呼吸道综合征冠状病毒或新 型冠状病毒；更优选新型冠状病毒。
[0046]应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例) 中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。 限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0047]图1显示RBD免疫的BALB/c小鼠的T细胞在OPC-1多肽抗原刺激下的反应；
[0048]图2显示RBD免疫的BALB/c小鼠的T细胞在OPC-2多肽抗原刺激下的反应；
[0049]图3显示RBD免疫的BALB/c小鼠的T细胞在OPC-3多肽抗原刺激下的反应；
[0050]图4显示RBD免疫的BALB/c小鼠的T细胞在OPC-4多肽抗原刺激下的反应；
[0051]图5显示RBD免疫的BALB/c小鼠的T细胞在OPC-5多肽抗原刺激下的反应；和
[0052]图6显示RBD免疫的BALB/c小鼠的T细胞在OPC-6多肽抗原刺激下的反应。
具体实施方式
[0053]专利技术人经过广泛而深入的研究，根据人体对病毒可能的免疫反应，设计一系 列具有免疫原性的来自新冠病毒的衍生多肽。这些衍生多肽可作为刺激抗原用于对 新冠病人细胞免疫力的检测，也可用于疫苗有效性的评估监测。特别是当这些衍生 多肽混用时，可以显著降低假阳性。在此基础上完成了本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测针对冠状病毒感染的细胞免疫的多肽，其特征在于，所述多肽是：(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:1-6中任一所示的多肽；或者(b)由(a)所述多肽经过一个或数个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的且具有(a)所述多肽的功能的衍生多肽。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽是氨基酸序列如SEQ ID NO:1-6所示的多肽中两种或两种以上的组合；优选氨基酸序列如SEQ ID NO:4和6所示的多肽的组合；更优选氨基酸序列如SEQ ID NO:1-6所示的多肽的组合。3.如权利要求1或2所述多肽的编码核酸。4.包含权利要求3所述编码核酸的表达载体。5.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求4所述的表达载体，或其基因组上整合有权利要求3所述的编码核酸。6.一种检测针对冠状病毒感染的细胞免疫的检测试剂，所述检测试剂包含权利要求1或2所述的多肽。7.一种检测针对冠状病毒感染的细...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓慧，史馨怡，逯文姝，王健苏，崔道成，朱仁英，姜石松，
申请(专利权)人：常州文松生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：