一种马来酸顺反异构酶突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种马来酸顺反异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明专利技术的马来酸顺反异构酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的温度稳定性相比野生酶有了较大的提高，同时该突变体具有更好的pH稳定性。将构建得到的马来酸顺反异构酶突变体与天冬氨酸酶AspA在大肠杆菌中偶联表达，并以马来酸为底物生产L

【技术实现步骤摘要】
一种马来酸顺反异构酶突变体


[0001]本专利技术涉及一种马来酸顺反异构酶突变体，属于酶工程


技术介绍

[0002]马来酸顺反异构酶(EC 5.2.1.1，Maleate cis
‑
trans Isomerase，MaiA)是一种能够将马来酸(顺丁烯二酸)催化转化成富马酸(反丁烯二酸)的异构酶，能够在碳碳双键不断裂的情况下，实现顺式丁烯二酸向反式丁烯二酸的异构化，属于天冬氨酸、谷氨酸消旋酶超家族。由于具有催化反应pH范围宽泛、较低的Km值以及较高平衡常数的特点，马来酸顺反异构酶被认为是可用于工业生产富马酸的有潜力的生物催化剂之一。马来酸顺反异构酶广泛存在于一些可吸收利用马来酸的细菌中，如假单胞菌属(Pseudomonas)、产碱杆菌属(Alcaligenes)、沙雷氏菌属(Serratia)、变形杆菌属(Proteus)和节杆菌属(Arthrobacter)等。但多数马来酸代谢菌中此酶的活力较低、热稳定性较差，制约了马来酸顺反异构酶在工业生产中的应用。
[0003]粘质沙雷氏菌(Serratia marces本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马来酸顺反异构酶突变体，其特征在于，以氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的序列为亲本序列，对亲本序列第96位和100位中的一位或两位进行取代。2.根据权利要求1所述的马来酸顺反异构酶突变体，其特征在于，将第96位的谷氨酰胺取代谷氨酸，将第100的丙氨酸取代为甲硫氨酸。3.编码权利要求1或2所述的马来酸顺反异构酶突变体的基因。4.含有权利要求3所述基因的载体。5.表达权利要求1或2所述马来酸顺反异构酶突变体或含有权利要求3所述基因的微生物细胞。6.根据权利要求5所述的微生物细胞，其特征在于，以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、毕赤酵母为宿主细胞。7.一种生产天冬氨酸的方法，其特征在于，利用表达权利要求1或2所述来酸顺反异构酶突变体以及天冬氨酸酶AspA的微生物细胞转化马来酸生成L

【专利技术属性】
技术研发人员：周哲敏，刘中美，王畅，王相玉，周丽，崔文璟，郭军玲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：