一种梅花愈伤组织的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种梅花愈伤组织的制备方法，包括采用培养基A对白梅花无菌种子进行萌发培养得到无菌的白梅花外植体，其中培养基A包括WPM基本培养基、1～3mg/L的6

【技术实现步骤摘要】
一种梅花愈伤组织的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种愈伤组织的制备方法，特别是一种梅花愈伤组织的制备方法。

技术介绍

[0002]白梅花又被称为绿梅花、绿萼梅，为蔷薇科落叶小乔木植物梅Prunus mume(Sieb.)Sieb.et Zucc.的干燥花蕾。白梅花提取物中含有多种活性物质，其中在化妆品领域应用最为广泛的就是总黄酮与绿原酸类物质。其中黄酮类化合物是梅花提取物中主要的化学成分之一，主要包括黄酮醇及其相关苷类，还包括一部分花色素苷类物质。梅花总黄酮具有优秀的抗氧化及美白功效。研究证明白梅花提取物具有优秀的清除DPPH自由基与O2‑
自由基的功效。除了抗氧化性之外，白梅花提取物还可以抑制黑色素沉积，对抑制雀斑具有很好的功效，同时，白梅花提取物还具有一定的改善应激功效，作用机制为抑制炎症反应。由此可见白梅花提取物是一种有效的美白剂，可应用于化妆品领域。
[0003]目前在化妆品已使用原料目录中，仅有欧洲山梅花(PHILADELPHUS CORONARIUS)花提取物被作为了已使用原料，导致梅花提取物应用受限的原因一是梅花的种植范围较小，且需要较高的育种水平，因此导致了梅花的产量较低；二是野生梅花具有较多难以除去的原生病毒及细菌，无法得到大范围应用。
[0004]因此，目前的白梅花提取物在化妆品上的应用存在资源匮乏、携带难于去除的原生病毒及细菌的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供一种梅花愈伤组织的制备方法。本专利技术具有去除白梅花携带的原生病毒及细菌，扩大白梅花产量的特点。
[0006]本专利技术的技术方案：一种梅花愈伤组织的制备方法，包括采用培养基A对白梅花无菌种子进行萌发培养得到无菌的白梅花外植体，其中培养基A包括WPM基本培养基、1～3mg/L的6
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BA和25～35g/L的蔗糖；采用培养基B对白梅花外植体进行愈伤组织诱导培养及继代培养，得到白梅花愈伤组织，其中培养基B包括WPM基本培养基、1.5～4.5mg/L的2,4
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D、0.05～2mg/L的IBA和25～30g/L的蔗糖。
[0007]前述的一种梅花愈伤组织的制备方法中，所述培养基A为WPM基本培养基、1.5mg/L的6
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BA和30g/L的蔗糖。
[0008]前述的一种梅花愈伤组织的制备方法中，所述培养基B为WPM培养基、3mg/L的2,4
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D、0.1mg/L的IBA和30g/L的蔗糖。
[0009]前述的一种梅花愈伤组织的制备方法中，所述白梅花无菌种子的培养方法包括以下步骤：
[0010]a、取白梅花种子洗净后用没过种子高度的无菌水浸泡，并盖上纱布，置于恒温培养箱中进行萌发预处理，直至白梅花种子表面出现明显裂痕，得A品；
[0011]b、将A品置于25～35℃的温水中浸泡，浸泡时间为20
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30h，得B品；
[0012]c、将B品用3％的NaClO溶液浸泡、震荡除菌，接着用75％的乙醇浸泡、无菌水冲洗，得C品；
[0013]d、将C品浸入0.1％的HgCl2中10min，之后用无菌水震荡冲洗5min，得白梅花无菌种子。
[0014]前述的一种梅花愈伤组织的制备方法中，白梅花无菌种子的萌发培养的时间为5
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10天；愈伤组织的继代培养的时间为30～45天。
[0015]前述的一种梅花愈伤组织的制备方法中，愈伤组织的继代培养中，每15天更换一次培养基B。
[0016]与现有技术相比，本专利技术使用梅花种子，将白梅花的种子进行除菌处理，得到无菌种子，再通过特别改进配置的培养基及激素的加入，将无菌种子培养到无菌的愈伤组织，得到的愈伤组织生长旺盛，取得增加白梅花外植体产量、减少褐化率等目的，最终利用愈伤组织制备无菌梅花愈伤组织提取物。该方法益于降低白梅花提取物中的原生病毒及病菌。经测定，提取物中的总黄酮含量高，不低于5.5％，显著高于普通白梅花植株，经济效益高，安全性高，功效性强。
[0017]本专利技术具有去除白梅花携带的原生病毒及细菌，扩大白梅花产量的特点。
具体实施方式
[0018]下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不作为对本专利技术限制的依据。
[0019]实施例：
[0020]一种梅花愈伤组织的制备方法，包括以下步骤：
[0021](1)、处理白梅花无菌种子：
[0022]a、选取种壳无褶皱且饱满的白梅花种子，使用纯水充分洗净后放入烧杯中，盖上纱布，使用没过种子高度的无菌水浸泡(每48h更换新的无菌水)，置于恒温培养箱中进行萌发预处理(恒温培养箱的条件设置为光照、20℃)，直至该白梅花种子表面出现明显裂痕，此状态即为完成萌发预处理的状态，得A品。
[0023]b、将得A品置于25～35℃的温水中进行浸泡，浸泡时间为20
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30h，得B品。此步操作为催芽处理。可显著提升种子的萌发率，并可提升愈伤组织的诱导效率。
[0024]优选温水的温度为30℃，种子萌发率可达到66.18％，愈伤组织诱导率可达79.60。
[0025]c、将B品用3％的NaClO溶液浸泡，摇摆震荡20min进行表面除菌，再将浸泡好的种子使用无菌水冲洗干净，之后浸入75％的乙醇中30s，取出后使用无菌水冲洗1min，之后重复2
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3次该操作，得C品；
[0026]d、将C品浸入0.1％的HgCl2中10min，之后用无菌水震荡冲洗5min，重复该操作三次。在滤纸上吸干水分，使用剪刀和镊子剥去种壳，切去子叶部分，即可制得白梅花无菌种子。
[0027](2)、采用培养基A对得到的白梅花无菌种子进行萌发培养5
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10天，得到白梅花无菌幼苗，在无菌操作台切去根部及叶片，所剩胚轴部分即为无菌的白梅花外植体。
[0028]培养基A的配方为：WPM基本培养基+1～3mg/L的6
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BA+25～35g/L的蔗糖；
[0029]培养基A的配方优选为：WPM基本培养基+1.5mg/L的6
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BA+30g/L的蔗糖。测试得到该培养基的种子萌发率达到70.03％。
[0030](3)、白梅花愈伤组织的诱导：
[0031]采用培养基B对白梅花外植体进行愈伤组织诱导培养，生出新发的愈伤组织。培养基B的配方为：WPM基本培养基+1.5～4.5mg/L2,4
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D+0.05～2mg/LIBA+25～30g/L蔗糖；
[0032]培养基B的配方优选为：WPM基本培养基+3mg/L2,4
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D+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖。培养基B具有高诱导力，可对白梅花愈伤组织达到100％的诱导成功率。
[0033](4)、白梅花愈伤组织的继代培养：
[0034]待白梅花外植体生出新发的愈伤组织后，切除外植体，将愈伤组织转入培养基B中进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种梅花愈伤组织的制备方法，其特征在于：包括采用培养基A对白梅花无菌种子进行萌发培养得到无菌的白梅花外植体，其中培养基A包括WPM基本培养基、1～3mg/L的6
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BA和25～35g/L的蔗糖；采用培养基B对白梅花外植体进行愈伤组织诱导培养及继代培养，得到白梅花愈伤组织，其中培养基B包括WPM基本培养基、1.5～4.5mg/L的2,4
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D、0.05～2mg/L的IBA和25～30g/L的蔗糖。2.根据权利要求1所述的一种梅花愈伤组织的制备方法，其特征在于：所述培养基A为WPM基本培养基、1.5mg/L的6
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BA和30g/L的蔗糖。3.根据权利要求1所述的一种梅花愈伤组织的制备方法，其特征在于：所述培养基B为WPM基本培养基、3mg/L的2,4
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D、0.1mg/L的IBA和30g/L蔗糖。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大勇，毕永贤，孔德承，周浩淼，胡雪情，唐萌，杜雨涵，
申请(专利权)人：浙江宜格企业管理集团有限公司，
类型：发明
国别省市：