含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒，该试剂盒中包含结合有M2巨噬细胞抗体的磁珠、结合有寡核苷酸Oligo(dT)的磁珠、M2巨噬细胞标志物的引物、肿瘤细胞标志物的引物。本发明专利技术通过富集循环血中吞噬了肿瘤细胞的M2巨噬细胞，来辨别体内肿瘤细胞，并可进一步通过具体的肿瘤细胞标志物来判断肿瘤类型，实现肿瘤早筛、早诊和肿瘤发展全过程的检测，特别是使得对肿瘤发展全过程的监控成为可能，可通过检测后针对性地制定肿瘤治疗方案，有利于提高肿瘤患者的生存率。有利于提高肿瘤患者的生存率。

【技术实现步骤摘要】
含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及一种肿瘤检测试剂盒，具体涉及一种含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]在医学领域，进行人体组织活检确定肿瘤的性质，已经成为一门社会共知的科学知识。活检的顾名思义就是获取活体组织，然后再进行病理切片，确定肿瘤的性质成为肿瘤诊断的金指标之一。病理切片也是诊断肿瘤最有效的手段，一直以来，备受医务工作者们的“青睐”。同时，组织活检也存在着巨大的缺憾，即取过活检的恶性肿瘤组织极易发生肿瘤的转移；取过活检的内脏组织也存在着出血需要处理的紧急情况以及取材未能取到肿瘤细胞，不能明确诊断的可能。
[0003]鉴于上述的问题和缺陷，研究人员一直在探索和寻求更好的办法。被国际医学界评为全球“2015年十大突破技术”的液体活检技术成为人们新的推崇对象。所谓液体活检技术是相对于人体组织活检技术而言，液体活检是指通过采集人体液体样本，如：血液、尿液、唾液、胸腔积液、脑脊液等对癌症等疾病做出分析诊断的技术。目前公认的
技术实现思路
：包括了静脉血中肿瘤细胞的检测，称之为：CTCs(circulating tumor cells)；循环血中肿瘤DNA检测技术，称之为ctDNA(circulating tumor DNA)以及外泌体检测技术。液体活检技术的优势是通过采集静脉血样本，对提取的肿瘤细胞和提取的肿瘤DNA进行检测后作出诊断，样品来源容易，创伤性小，弥补了组织活检技术的缺陷与不足。
[0004]1869年，澳大利亚病理学家John Ashworth首次发现CTCs，他在死去的肿瘤患者的尸检中发现了循环血中的肿瘤细胞，并且推测其对于肿瘤本身具有影响：1960年科学家发现了多个CTCs聚集在一起的CTC簇。而随着1994年Cell Search系统的研发成功，大量的临床实验展现了CTCs在癌症预后复发效用上的应用，随着单细胞测序技术的进展，对于CTCs单细胞测序的研究也大量开展，而未来CTCs及相关检测技术将应用于肿瘤个体化精准医疗方案的制定。
[0005]到目前为止，CTCs检测技术的优势明显，在5ml肿瘤患者的静脉血中，肿瘤细胞的最低检出量达到2个(人体全血量以5000ml计算)，对于开展肿瘤的早筛、早诊以及肿瘤的治疗前后、耐药性和远端转移的发展全过程的检测有重要的意义。
[0006]但是，CTCs的检测目前存在着几个主要的问题：
[0007]第一、费用高
[0008]CTCs检测对单一瘤种的检测的精准度和效果最好，如现在已能准确的完成乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、大肠癌、胰腺癌的精准检测。CTCs检测可根据不同瘤种的不同基因变异特点逐步进行研发。但是每次的CTCs检测只能确定一个瘤种，对于早筛早诊，单一瘤种CTCs检测只能确定或排除是否带有该肿瘤细胞，而不能确定或排除是否带有其他种类肿瘤细胞，要进行全部瘤种的CTCs检测，需要一个瘤种一个瘤种地进行CTCs检测，这给检测者带来非常大的经济负担，不利于肿瘤的早筛早诊工作的开展。
[0009]第二，精准度受限
[0010]CTCs涉及上皮组织来源的肿瘤检出的精准度高，但其出现的上皮细胞间质化的问题、对EpCAM标记蛋白不敏感的上皮细胞，都容易出现一定的假阴性率，虽然较低，但还是有，这给患者预后检测带来了风险。
[0011]第三，治疗的广泛性受到影响
[0012]如果根据瘤种研发针对不同瘤种的个性化治疗药物，需要研发的药物种类太多，因此很难为患者做到设计个性化治疗方案。换句话说，在开展早筛、早诊和全程监控肿瘤发展的过程以及肿瘤的基因变化情况都掌握的条件下，开展针对性更强、提供更为有效的个性化治疗方案，将会增加研发药物的难度。
[0013]因此，亟待研发出一种可以同时检测多个瘤种的检测方案，以降低检测成本，实现早筛、早诊和全程监控肿瘤发展的过程。

技术实现思路

[0014]为了解决上述问题，本专利技术的目的在于提供一种含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒，该试剂盒可以通过从循环血中富集吞噬了肿瘤细胞的M2巨噬细胞，从而实现肿瘤细胞的早筛、早诊。
[0015]本专利技术的另一目的还在于提供一系列含有相应瘤种的肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒，通过对不同瘤种的肿瘤标志物的检测可以鉴定出肿瘤的具体类型，从而分析肿瘤的原发位置，实现全程监控肿瘤发展的过程和基因变化。
[0016]为了实现上述目的，本专利技术提供一种含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒，该试剂盒包括：
[0017]结合有M2巨噬细胞抗体的磁珠；
[0018]结合有寡核苷酸Oligo(dT)的磁珠；
[0019]M2巨噬细胞标志物的引物；
[0020]肿瘤细胞标志物的引物；
[0021]其中，所述M2巨噬细胞标志物为CD163、CD68、CD204中的一种或多种；
[0022]所述肿瘤细胞标志物为TP53和P16；
[0023]所述CD163引物序列为：
[0024]上游引物如SEQ ID NO：1所示；
[0025]下游引物如SEQ ID NO：2所示；
[0026]所述CD68引物序列为：
[0027]上游引物如SEQ ID NO：3所示；
[0028]下游引物如SEQ ID NO：4所示；
[0029]所述CD204引物序列为：
[0030]上游引物如SEQ ID NO：5所示；
[0031]下游引物如SEQ ID NO：6所示；
[0032]所述P16引物序列为：
[0033]上游引物如SEQ ID NO：7所示；
[0034]下游引物如SEQ ID NO：8所示；
[0035]所述TP53引物序列为：
[0036]上游引物如SEQ ID NO：9所示；
[0037]下游引物如SEQ ID NO：10所示；
[0038]所述M2巨噬细胞抗体为抗CD68单克隆抗体和抗CD163单克隆抗体。
[0039]本专利技术还提供用于检测特定肿瘤组织的M2巨噬细胞检测试剂盒，是在上述试剂盒基础上进一步包括一种或多种特定肿瘤细胞标志物的引物。
[0040]其中，所述特定肿瘤组织包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌、胰腺癌、结肠癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、甲状腺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、恶性胶质瘤、骨肉瘤中的一种或多种。
[0041]其中，所述特定肿瘤细胞标志物的引物包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌、胰腺癌、结肠癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、甲状腺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、大肠癌、恶性胶质瘤、骨肉瘤中的肿瘤细胞标志物的引物。
[0042]本专利技术还提供上述的试剂盒作为在肿瘤早筛、早诊和全程监控肿瘤发展的试剂盒的应用。
[0043]现有CTCs检测由于单独采用上皮细胞(如上皮细胞黏附分子EpCAM)作为标记物，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：结合有M2巨噬细胞抗体的磁珠；结合有寡核苷酸Oligo(dT)的磁珠；M2巨噬细胞标志物的引物；肿瘤细胞标志物的引物；其中，所述M2巨噬细胞标志物为CD163、CD68、CD204中的一种或多种；所述肿瘤细胞标志物为TP53和P16；所述CD163引物序列为：上游引物如SEQ ID NO：1所示；下游引物如SEQ ID NO：2所示；所述CD68引物序列为：上游引物如SEQ ID NO：3所示；下游引物如SEQ ID NO：4所示；所述CD204引物序列为：上游引物如SEQ ID NO：5所示；下游引物如SEQ ID NO：6所示；所述P16引物序列为：上游引物如SEQ ID NO：7所示；下游引物如SEQ ID NO：8所示；所述TP53引物序列为：上游引物如SEQ ID NO：9所示；下游引物如SEQ ID NO：10所示；所述M2巨噬细胞抗体为抗CD68单克隆抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛刚，谭焕然，
申请(专利权)人：谭焕然，
类型：发明
国别省市：