hsa_circ_0006420环状RNA及其在胶质瘤诊断、预后评估中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种hsa_circ_0006420环状RNA及其在胶质瘤诊断、预后评估中的应用，属于癌症诊断领域。hsa_circ_0006420环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术得到一个新的hsa_circ_0006420环状RNA基因，胶质瘤肿瘤组织以及患者血液样本中的hsa_circ_0006420环状RNA表达显著升高，可应用于胶质瘤诊断、替莫唑胺治疗后响应以及患者生存期预测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
hsa_circ_0006420环状RNA及其在胶质瘤诊断、预后评估中的应用


[0001]本专利技术属于癌症诊断
，具体涉及一种hsa_circ_0006420环状RNA及其在胶质瘤诊断、预后评估中的应用。

技术介绍

[0002]脑胶质瘤是成年人最为频发的脑肿瘤疾病，占颅内肿瘤的40.49％。从确诊开始，脑胶质瘤患者平均生存寿命不超过五年。目前而言胶质瘤的诊断和治疗方法虽处于不断改进阶段，但是胶质瘤患者生存率并没有明显提高。胶质瘤诊断仍然处于以临床、病理学和影像学信息为基础的经验性阶段，而且一经诊断，绝大多数均为中晚期，手术后的生存率不容乐观。因此，寻找胶质瘤早期诊断标志物对患者进行“早发现，早治疗”，以及提高胶质瘤患者的生存期，并相应地选择合理的后续治疗方案，是神经科学领域亟待解决的研究任务。
[0003]CircRNA是近年来发现的非编码RNA家族重要成员，其形成没有极性和聚腺苷酸尾的环化结构，由于circRNA分子呈封闭环状结构，具有更高的核酸酶稳定性，不受RNA外切酶影响，不易降解，这使得它们成为临床应用新型生物标记具有很大的优势。高通量测序和生物信息学方法揭示了circRNA在真核生物中广泛表达。研究发现大多数circRNA参与一些肿瘤的发生发展，在病理条件下以组织特异性异常表达。研究发现circRNA在肿瘤发生发展中发挥关键作用，其作用机制上主要包括方面：(1)circRNA作为miRNA的吸附物(sponge)，通过吸附miRNA调控其靶基因和下游通路的表达，进而影响胶质瘤的发生发展；(2)circRNA通过翻译成肽段或者蛋白发挥作用；(3)通过结合母基因(host gene)DNA序列介导母基因mRNA的转录调控，这些特性使得circRNA成为肿瘤诊断和治疗的重要靶点和潜在标志物。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有胶质瘤诊断的缺陷，提供一种用于胶质瘤诊断和预后评估的新靶标，即hsa_circ_0006420环状RNA基因，并提供该靶标的新应用，特别是在其检测试剂、胶质瘤诊断、肿瘤药物对胶质瘤的治疗效果以及胶质瘤预后评估中的应用。
[0005]本专利技术通过以下技术方案实现：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种hsa_circ_0006420环状RNA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]hsa_circ_0006420环状RNA分子是由AEBP2基因的第2和3号外显子首位相接连接而成的环状RNA分子(AEBP2基因全长79,021nt，共由9个外显子组成。hsa_circ_0006420环状RNA全长序列为：
[0008]CATAAGCAGTACTATAATGGATGTAGACAGCACAATTTCCAGTGGGCGTTCAACTCCAGCAATGATGAATGGACAAGGAAGCACTACTTCTTCAAGCAAAAATATTGCCTATAATTGTTGTTGGGACCAGTGCCAGGCTTGCTTCAACTCTAGCCCAGATCTGGCAGATCACATCCGTTCCATACATGTAGATGGTCAGCGAGGAGGGGTATTTGTTTGCTTATGGAAAGGTTGTAAAGTATATAACACTCCATCTACCAGTCAAAGTTGGTTACAAAGGCATATGCTGACACACA
GTGGAGACAAACCTTTCAAG(SEQ ID NO.1)
[0009]第二方面，本专利技术提供一种用于检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的检测引物，所述检测引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述检测引物可用于制备胶质瘤诊断或预后评估试剂盒。
[0010]正向引物(Primer F)的核苷酸序列为TCTGGCAGATCACATCCGTT(SEQ ID NO.2)；
[0011]反向引物(Primer R)的核苷酸序列为GAACGCCCACTGGAAATTGT(SEQ ID NO.3)。
[0012]在具体的应用中，还包括内参GAPDH的正向引物和反向引物：
[0013]内参GAPDH Primer F:GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT(SEQ ID NO.4)；
[0014]内参GAPDH Primer R：GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG(SEQ ID NO.5)。
[0015]第三方面，本专利技术提供一种hsa_circ_0006420环状RNA基因作为分子标志物在制备用于诊断胶质瘤的试剂盒中的应用。
[0016]第四方面，本专利技术一种用于检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的试剂在制备用于胶质瘤诊断或预后评估的试剂盒中的应用。
[0017]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的试剂选自：对hsa_circ_0006420环状RNA基因具有检测特异性的探针、基因芯片或如SEQ ID NO.2～3所示的检测引物；
[0018]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、逆转录反应体系和荧光定量PCR试剂。
[0019]其中，RNA提取试剂为trizol试剂；
[0020]将RNA逆转录成cDNA的逆转录反应体系如下：
[0021][0022][0023]逆转录反应体系的反应条件为：37℃、10min，42℃、20min，85℃、5min，4℃、2min。
[0024]所述荧光定量PCR试剂包括：
[0025]cDNA1μL上游引物(10μM)0.2μL下游引物(10μM)0.2μL2X PCR Master Mix10μLRNA free ddH2O补足至20μL
[0026]优选地，荧光定量PCR反应条件为：95℃、5分钟变性；95℃、10秒，60℃35秒；35个循环。
[0027]第五方面，本专利技术提供一种用于胶质瘤诊断或胶质瘤预后评估的试剂盒，所述试剂盒包括如SEQ ID NO.2～3所示检测引物。
[0028]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述试剂盒还包括荧光定量PCR试剂。
[0029]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，所述荧光定量PCR试剂总量为20μL包括：1μL的cDNA、0.2μL、10μM的如SEQ ID NO.2所示的检测引物、0.2μL、10μM的如SEQ ID NO.3所示的检测引物、10μL的2X PCR Master Mix。
[0030]第六方面，本专利技术提供一种用于检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的试剂在制备用于评估抗肿瘤药物对胶质瘤治疗效果的试剂盒中的应用；
[0031]优选地，所述抗肿瘤药物为替莫唑胺。
[0032]与现有技术相比，本专利技术至少具有如下技术效果：
[0033]专利技术人研究发现，hsa_circ_0006420环状RNA基因在胶质瘤肿瘤组织与癌旁组织样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种hsa_circ_0006420环状RNA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种用于检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的检测引物，其特征在于，所述检测引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述检测引物可用于制备胶质瘤诊断或预后评估试剂盒。3.一种hsa_circ_0006420环状RNA基因作为分子标志物在制备用于诊断胶质瘤的试剂盒中的应用。4.一种用于检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的试剂在制备用于胶质瘤诊断或预后评估的试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测hsa_circ_0006420环状RNA基因的试剂选自：对hsa_circ_0006420环状RNA基因具有检测特异性的探针、基因芯片或如SEQ ID NO.2～3所示的检测引物。6.根据权利要求4所述的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张允斌，张倩，
申请(专利权)人：上海纽仁生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：