同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法技术

本发明专利技术提供了一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，包括先配制空白溶液，再配制含吡喹酮、氯芬新、米尔贝肟的供试品溶液，最后配制系统适用性试验溶液，分别注入液相色谱仪中，记录紫外波长下的色谱图；稀释剂为乙腈，液相色谱仪中使用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，紫外检测波长为230nm，进样量20μL；流动相A为磷酸溶液，含量为10

【技术实现步骤摘要】
同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法


[0001]本专利技术属于化学分析
，具体涉及一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法。

技术介绍

[0002]吡喹酮是一种具有驱虫活性的吡嗪诺喹啉衍生物，在20世纪70年代由拜耳公司研发，是一种广谱抗吸虫和绦虫药。
[0003][0004]吡喹酮作用机制未被完全阐明，主流的说法认为吡喹酮可能改变虫体对Ca
2+
的渗透性，促使其内流导致虫体活动兴奋、肌肉挛缩，从而不能很好吸附于血管壁；另一方面，虫体皮层的损伤也会使得虫体表面的抗原决定簇暴露，从而被宿主免疫系统识别，吸引免疫细胞对其进行攻击。因此，吡喹酮的杀虫机制可概括为药物对虫体的直接作用以及宿主的免疫效应两部分。
[0005]氯芬新为苯甲酰脲类杀虫剂，是苯甲酰脲类杀虫剂中的第一大产品。氯芬新的主要市场在动物健康领域，用于防治猫、狗身上的跳蚤。
[0006][0007]此类杀虫剂为昆虫生长调节剂，通过抑制几丁质合成来阻止昆虫外骨骼的进一步生长。该类产品无内吸性，具有胃毒作用。虽然外皮脱落伴随昆虫的整个生命周期，而苯甲酰脲类杀虫剂对幼虫蜕皮阶段最有效。这类产品速效性差，通常与其他传统杀虫剂复配，以提高产品的速效性，增加产品的持效作用。
[0008]米尔贝肟为半合成大环内酯类抗寄生虫药物，是米尔贝霉素A3和米尔贝霉素A4的肟的衍生物的复合物(比率A4:A3＝80:20)，由Sankyo和Ciba
‑
Geigy(现在的诺华)共同研发，临床最初用于预防犬心丝虫病和其他体内寄生虫感染的控制。
[0009][0010]米尔贝肟作用机制与其他大环内酯类抗寄生虫药物类似，米尔贝肟作为神经细胞中GABA(γ
‑
氨基丁酸)神经递质的激动剂，还可与无脊椎动物的神经和肌肉细胞中的谷氨酸门控Cl
–
通道结合。在这两种情况下，会阻断寄生虫的神经信号传递，使虫体瘫痪麻痹，导致虫体死亡。米尔贝肟还通过减少虫体产卵或诱导产生异常卵子来影响一些寄生虫的繁殖。但由于绦虫和吸虫虫体内缺少GABA传导介质和谷氨酸门控的Cl
–
通道，所以米尔贝肟对绦虫和吸虫无效。
[0011]以上3个成分杀虫谱互补，联合应用于宠物驱虫有非常良好且广谱的效果。目前海外市场上已出现了以此3个成分配伍的口服宠物驱虫药，但其含量的检测方法并未公开。目前公开的资料中，这三个成分需要用三个不同的HPLC方法来检测。

技术实现思路

[0012]针对现有技术中的不足，本专利技术的目的是提供一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法。
[0013]为达到上述目的，本专利技术的解决方案是：
[0014]一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，其包括如下步骤：
[0015](1)、量取稀释剂作为空白溶液，注入液相色谱仪中，记录210nm、230nm和255nm波长下的色谱图；
[0016](2)、分别称取三组分吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟，加稀释剂配制成每1mL含26μg吡喹酮、73μg氯芬新、4.8μg米尔贝肟溶液作为供试品溶液，注入液相色谱仪中，记录210nm、230nm和255nm波长下的色谱图；
[0017](3)、取吡喹酮、吡喹酮杂质A、吡喹酮杂质B、吡喹酮杂质C、氯芬新、氯芬新杂质B、氯芬新杂质C、氯芬新杂质G、米尔贝肟及米尔贝肟杂质D的对照品各适量，加稀释剂溶解并
制成每1mL中含上述对照品均为1mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液，注入液相色谱仪中，记录230nm和255nm波长下的色谱图。
[0018]优选地，步骤(2)中，吡喹酮的浓度为283.20
‑
654.64μg/mL，氯芬新的浓度为570.44
‑
1171.20μg/mL，米尔贝肟的浓度为27.57
‑
64.32μg/mL。
[0019]优选地，步骤(3)中，吡喹酮杂质A为(11bRS)
‑2‑
苯甲酰基
‑
1,2,3,6,7,11b
‑
六氢
‑
4H
‑
吡嗪基[2,1
‑
a]异喹啉
‑4‑
酮，吡喹酮杂质B为2
‑
(环己甲酰基)
‑
2,3,6,7
‑
四氢
‑
4H
‑
吡嗪并[2,1
‑
a]异喹啉
‑4‑
酮，吡喹酮杂质C为N
‑
甲酰基
‑
N
‑
[2
‑
氧
‑2‑
(1
‑
氧
‑
3,4
‑
二氢异喹啉
‑
2(1H)
‑
yl)乙基]环己甲酰胺。
[0020]优选地，步骤(3)中，氯芬新杂质B为N
‑
[(2,5
‑
二氯
‑4‑
对羟基苯)氨甲酰基]‑
2,6
‑
二氟苯甲酰胺，氯芬新杂质C为N
‑
[3
‑
氯
‑4‑
(1,1,2,3,3,3
‑
全氟丁二烯丙氧基)苯基
‑
氨甲酰基]‑
2,6
‑
二氟苯甲酰胺，氯芬新杂质G为2,5
‑
二氯
‑4‑
[3
‑
(2,6
‑
二氟苯甲酰)脲基]碳酸二苯酯。
[0021]优选地，步骤(3)中，米尔贝肟杂质D为(1
′
R,2R,4
′
S,5S,6R,8
′
R,10
′
E,13
′
R,14
′
E,16
′
E,20
′
R,21
′
Z,24
′
S)
‑
24
′‑
羟基
‑
21
′‑
(肟基)
‑6‑
(丙烷
‑2‑
yl)
‑
5,11
′
,13
′
,22
′
四甲基
‑
3,4,5,6
‑
四氢螺环[吡喃
‑
2,6
′‑
[3,7,19]三氧四环[15.6.1.14,8.020,24]二十五烷[10,14,16,22]四烯]‑2′‑
酮。
[0022]优选地，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中，稀释剂为乙腈。
[0023]优选地，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中，液相色谱仪中用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂NUCLEO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，其特征在于：其包括如下步骤：(1)、量取稀释剂作为空白溶液，注入液相色谱仪中，记录210nm、230nm和255nm波长下的色谱图；(2)、分别称取三组分吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟，加稀释剂配制成每1mL含26μg吡喹酮、73μg氯芬新、4.8μg米尔贝肟溶液作为供试品溶液，注入液相色谱仪中，记录210nm、230nm和255nm波长下的色谱图；(3)、取吡喹酮、吡喹酮杂质A、吡喹酮杂质B、吡喹酮杂质C、氯芬新、氯芬新杂质B、氯芬新杂质C、氯芬新杂质G、米尔贝肟及米尔贝肟杂质D的对照品各适量，加稀释剂溶解并制成每1mL中含上述对照品均为1mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液，注入液相色谱仪中，记录230nm和255nm波长下的色谱图。2.根据权利要求1所述的同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述吡喹酮的浓度为283.20
‑
654.64μg/mL，所述氯芬新的浓度为570.44
‑
1171.20μg/mL，所述米尔贝肟的浓度为27.57
‑
64.32μg/mL。3.根据权利要求1所述的同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述吡喹酮杂质A为(11bRS)
‑2‑
苯甲酰基
‑
1,2,3,6,7,11b
‑
六氢
‑
4H
‑
吡嗪基[2,1
‑
a]异喹啉
‑4‑
酮，所述吡喹酮杂质B为2
‑
(环己甲酰基)
‑
2,3,6,7
‑
四氢
‑
4H
‑
吡嗪并[2,1
‑
a]异喹啉
‑4‑
酮，所述吡喹酮杂质C为N
‑
甲酰基
‑
N
‑
[2
‑
氧
‑2‑
(1
‑
氧
‑
3,4
‑
二氢异喹啉
‑
2(1H)
‑
yl)乙基]环己甲酰胺。4.根据权利要求1所述的同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述氯芬新杂质B为N
‑
[(2,5
‑
二氯
‑4‑
对羟基苯)氨甲酰基]
‑
2,6
...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋毓，
申请(专利权)人：上海汉维生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：