一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，涉及生物学技术领域，其根据中药地黄中分离提取的，该毛蕊花糖苷的分离方法包括以下步骤：准备材料和试剂；进行样品处理；毛蕊花糖苷的分离及纯化。本发明专利技术通过不使用价格昂贵、来源困难的β－葡萄糖苷酶作为酶解试剂，工艺路线更简洁，更容易实现工业化生产，采用本发明专利技术制备的毛蕊花糖苷含量比现有技术制备的毛蕊花糖苷含量高，能够满足申报新药对含量的要求，本发明专利技术所述的毛蕊花糖苷产品来源于玄参科植物，拓展了毛蕊花糖苷的植物来源、药源丰富，优化并改进了毛蕊花糖苷的提取制备方法，操作简便、成本低廉，操作中仅使用乙醇作为有机试剂，不采用甲醇、丙酮等毒性试剂，绿色环保。绿色环保。

【技术实现步骤摘要】
一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法


[0001]本专利技术涉及生物学
，具体涉及一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法。

技术介绍

[0002]地黄（学名：Rehmannia glutinosa）为玄参科植物地黄的新鲜或干燥块根，为玄参科植物。广泛分布于中国河南、湖北、山西、四川、浙江、内蒙古、湖南、山东、辽宁和其他省市。鲜地黄性寒，味甘、苦，有清热生津、凉血、止血效果；生地黄性寒，味甘，具有清热凉血、养阴、生津的功效；熟地黄性微温，味甘，具有滋阴补血、益精填髓的效果。熟地黄中主要含有环烯醚萜类成分、苯乙醇苷类、单萜、氨基酸、糖类、5
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羟基野菰酸、琥珀酸、二羟基
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β
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紫罗兰酮、尿嘧啶等。现代研究证明具有促进造血、降血糖、增强记忆、增强免疫等作用，被广泛用于药品和保健食品中。经过近30年的研究总结，已大致确定地黄的主要成分有苷类、糖类及氨基酸三大类，苷类含量最多且种类丰富，其中毛蕊花糖苷属于苯乙醇苷类，是地黄药材质控指标之一，毛蕊花糖苷的别名为麦角甾苷、毛蕊花苷、类叶升麻苷，其英文名为Acteoside、Verbascoside、Kusaginin，其分子式为C29H36O15，分子量为624.59，结构式为如式1所示：式1毛蕊花糖苷化学结构式查阅文献发现已经有很多分离纯化毛蕊花糖苷化合物的方法，例如从裸花紫珠、肉苁蓉、桂花、毛泡桐花中提取分离毛蕊花糖苷，这些分离纯化过程主要采用反复柱层析的方法来获取高纯度的毛蕊花糖苷样品，反复层析过程存在耗时长、溶剂耗费量大等缺陷；另外，有多篇文献报道采用高效液相色谱分析这些植物中的毛蕊花糖苷含量。
[0003]毛蕊花糖苷（Verbascoside）又称类叶升麻苷，麦角甾苷，阿克苷等，是一种苯丙素苷类化合物，属于天然多酚类成分，分子式为C29H36O15，分子量为624.59。其主要存在于肉苁蓉属、紫株属、凌霄属和地黄属等属中，现代研究发现毛蕊花糖苷具有抗菌抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、神经保护等多种较强的生物活性。如Funari等人发现毛蕊花糖苷具有抗新生隐球菌的作用，zhao等人发现毛蕊花糖苷能抑制肺炎球菌溶血素介导的细胞毒性，消除肺炎球菌性肺炎症状。
[0004]毛蕊花糖苷是苯乙醇苷类成分，现代研究证明苯乙醇苷类成分与熟地黄药理作用密切相关，目前的毛蕊花糖苷提取物主要通过加热提取、膜分离、树脂纯化、生物转化、化学催化等方法处理，这些方法有工艺复杂、操作不方便、周期长、效率低等缺点。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，以解决上述
技术介绍
中的问题。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其根据中药地黄中分离提取的，其特征在于：该毛蕊花糖苷的分离方法包括以下步骤：步骤一、准备材料和试剂；步骤二、进行样品处理；
步骤三、毛蕊花糖苷的分离及纯化。
[0007]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述步骤一中准备材料和试剂还包括：80%乙醇、吸附树脂、5％～25％体积浓度的乙醇水溶液。
[0008]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述步骤二中进行样品处理还包括：A.将生地黄药材进行预处理，切成小块放置于提取罐内；B.从罐底通蒸汽40分钟，用饱和蒸汽烫熟地黄小块；C.用乙醇提取，提取液浓缩除去乙醇，浓缩液加水稀释；D.合并稀释之后的提取液并进行过滤，得到滤液。
[0009]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述步骤三中毛蕊花糖苷的分离及纯化，还包括以下步骤，A.制备毛蕊花糖苷粗品；B.毛蕊花糖苷粗品纯化；C.纯化后的毛蕊花糖苷存储。
[0010]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述制备毛蕊花糖苷粗品的过程为：A1、合并稀释之后的滤液通过聚酰胺树脂进行吸附；A2、聚酰胺树脂吸附之后用乙醇洗脱，收集富含毛蕊花糖苷的洗脱液浓缩，洗脱的方式采用梯度洗脱，其程序依次为：纯水、5％、10％、20％体积浓度的乙醇水溶液；A3、将富含毛蕊花糖苷的洗脱液浓缩干燥得到毛蕊花糖苷粗品。
[0011]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述毛蕊花糖苷粗品纯化的过程为：B1、将粗品用水溶解，再上大孔吸附树脂吸附；B2、乙醇洗脱，收集富含毛蕊花糖苷的洗脱液浓缩；B3、干燥得到毛蕊花糖苷精品。
[0012]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述纯化后的毛蕊花糖苷存储的过程为：C1：对药用塑料袋消毒，将纯化后的毛蕊花糖苷装入药用塑料袋称重，C2：在药用塑料袋中充入定量的氮气，用塑封机封口，贴标签，将其放于常温干燥区即可。
[0013]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述c中用乙醇提取是回流提取或超声提取；提取次数为2
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5次，每次提取时间为2
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5小时，每次提取乙醇加入量为生药重量的1.5
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12倍，乙醇浓度是0％
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95％，本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述大孔树脂型号选自：D101树脂，AB
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8大孔吸附树脂，HPD100树脂，HPD
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200树脂，HPD
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200A树脂，HPD
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400树脂的一种或多种的组合。
[0014]由于采用了上述技术方案，本专利技术相对现有技术来说，取得的技术进步是：1、本专利技术提供一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，本专利技术不使用价格昂贵、来源困难的β－葡萄糖苷酶作为酶解试剂，工艺路线更简洁，更容易实现工业化生产，避免了目前的毛蕊花糖苷提取物主要通过加热提取、膜分离、树脂纯化、生物转化、化学催化等方法存在的工艺复杂、操作不方便、周期长、效率低等缺点，同时明确各中间体的操作工序的关键工艺参数以及各中间体的质量标准，保证中间体的合成质量，利于提高最终地佐辛纯化后成品的质量，且分类包装可以方便对毛蕊花糖苷成品的质量进行抽检，明确产品状体以保证产品的质量，从而更有利于大规模的生产。
[0015]2、本专利技术提供一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，通过制备毛蕊花糖苷粗品、毛蕊花糖苷粗品纯化和纯化后的毛蕊花糖苷存储，优化合成步骤以及反应条件，合成周期缩短，明确关键工艺参数以及产品的质量标准，使得地佐辛纯化工艺过程能够快速把握关键控制点，有助于纯化后的毛蕊花糖苷制备高效稳定进行，给操作带来便捷，而且采用本专利技术制备的毛蕊花糖苷含量比现有技术制备的毛蕊花糖苷含量高，能够满足申报新药对含量的要求。
[0016]3、本专利技术提供一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，本专利技术所述的毛蕊花糖苷产品来源于玄参科植物，拓展了毛蕊花糖苷的植物来源、药源丰富，优化并改进了毛蕊花糖苷的提取制备方法，操作简便，所用成本较为低廉，操作中仅使用乙醇作为有机试剂，不采用甲醇、丙酮等毒性试剂，无毒无害、绿色环保，毛蕊花糖苷的得率和纯度均较高，易于推广和使用、值得推荐。
具体实施方式
[0017]下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明：实施例1本专利技术提供了一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其根据中药地黄中分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其根据中药地黄中分离提取的，其特征在于：该毛蕊花糖苷的分离方法包括以下步骤：步骤一、准备材料和试剂；步骤二、进行样品处理；步骤三、毛蕊花糖苷的分离及纯化。2.根据权利要求1所述的一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤一中准备材料和试剂还包括：80%乙醇、吸附树脂、5％～25％体积浓度的乙醇水溶液。3.根据权利要求1所述的一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤二中进行样品处理还包括：A.将生地黄药材进行预处理，切成小块放置于提取罐内；B.从罐底通蒸汽40分钟，用饱和蒸汽烫熟地黄小块；C.用乙醇提取，提取液浓缩除去乙醇，浓缩液加水稀释；D.合并稀释之后的提取液并进行过滤，得到滤液。4.根据权利要求1所述的一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤三中毛蕊花糖苷的分离及纯化，还包括以下步骤，A.制备毛蕊花糖苷粗品；B.毛蕊花糖苷粗品纯化；C.纯化后的毛蕊花糖苷存储。5.根据权利要求4所述的一种毛蕊花糖苷的分离纯化方法，其特征在于：所述制备毛蕊花糖苷粗品的过程为：A1、合并稀释之后的滤液通过聚酰胺树脂进行吸附；A2、聚酰胺树脂吸附之后用乙醇洗脱，收集富含毛蕊花糖苷的洗脱液浓缩；A3、将富含毛蕊花糖苷的洗脱液浓缩干燥得到毛蕊花糖苷粗品。6.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾正兵，常义生，徐丽丽，
申请(专利权)人：泰州丹鼎生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：