中国桔梗RPL13内参基因序列及其引物与应用制造技术

本发明专利技术涉及一个中国桔梗RPL13内参基因序列及其引物与应用，属于基因工程技术领域。所述RPL13内参基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该RPL13基因可以做为对中国桔梗以及与其亲缘关系较近的桔梗科其它植物中的类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因在中国桔梗及其同科其它植物的蓝、紫、白3种不同花色花器官中进行基因表达谱分析研究的内参基因。也可以做为对中国桔梗及其同科其它植物中的茎、叶及蓝、紫、白3种不同花色花器官共5种不同组织部位中的目标基因进行表达谱分析研究时所用的内参基因。所用的内参基因。所用的内参基因。

【技术实现步骤摘要】
中国桔梗RPL13内参基因序列及其引物与应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及中国桔梗类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因以及中国桔梗不同组织部位间目标基因进行表达分析的RPL13内参基因序列及其引物与应用。

技术介绍

[0002]中国桔梗(Platycodon grandiflorus)为桔梗科(Campanulaceae)桔梗属(Platycodo n L.)多年生草本植物，别名包袱花、铃铛花、僧帽花等，原产我国，广布华南至东北。桔梗属仅中国桔梗一种。作为卫生部公布的第一批药食同源目录品种，中国桔梗具有很高的药用和食用价值。除了药食以外，中国桔梗因其花开似铃铛，有蓝、紫、白等花色，单瓣、重瓣等花型，植株挺拔优美，花朵色彩清新淡雅，作为一种很好的园林观赏植物。对中国桔梗的研究主要集中在栽培应用、药用成分检测及功能分析等方面，近年来随着生物技术的迅猛发展，开展了诸如目标基因筛选克隆、转录组分析、基因组测序等分子生物学领域的研究工作，但与其做为一种药、食、观赏兼用的多用途经济作物的重要性来比，分子方面的研究相对还较少，关于中国桔梗目标基因表达分析内参基因的相关研究更是鲜见报道。
[0003]基因表达分析是阐明植物生命周期中的遗传、信号传导及代谢途径等复杂调控过程的重要工具。目前，转录组测序技术已成为分析生物体基因转录表达水平的普遍方法之一。实时定量PCR(quantitative real
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time PCR，qRT
‑
PCR)由于具有定量准确，特异性强，敏感度高，重复性好等特点，被广泛应用于基因表达定量和转录组数据验证等研究工作。然而，由于在试验中受RNA质量、反转录效率、引物特异性、样品量以及扩增效率等因素的影响，容易造成qRT
‑
PCR结果与目标基因的真实表达量之间存在一定误差。为了提高qRT
‑
PCR结果的准确性，需利用内参基因进行标准校正，内参基因的稳定性对qRT
‑
PCR结果的准确性具有决定性影响。一般以在生物体的各个组织及各个生长阶段表达水平都较为稳定的看家基因(house
‑
keeping Gene)如：肌动蛋白基因(actin，ACT)、亲环蛋白基因(cyclophilin，CYP)、转录延伸因子基因(elongation factor，EF)、甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶基因(glycer aldehyde
‑3‑
phosphate dehydrogenase，GAPDH)、组蛋白基因(histone，HIS)、18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA，18SrRNA)、微管蛋白基因(tubulin，TUB)、多聚泛素酶基因(polyubiquitin，UBQ)等作为内参基因。理想的内参基因应该是在所有的细胞、生理特性和样品类型中都稳定表达，但是目前尚未发现这样理想化的内参基因。大量的实验研究表明，在不同的植物、组织及生理状态条件下，内参基因的表达量并不是始终稳定表达。而且选择不适当的内参基因往往会导致错误结论。因此，根据具体的物种、材料及试验条件筛选合适的内参基因至关重要。
[0004]对于植物类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因的表达谱分析，由于不同研究者分析所用的物种、样品组织及实验条件等的差异较大，所选用的内参基因也有较大差异，另外关于适用于中国桔梗的内参基因鲜见报道。所以有必要筛选出适合用来对中国桔梗类黄酮/花青素色素合成途径中的色素合成相关基因或其它目标基因进行基因表达
谱分析的内参基因。

技术实现思路

[0005]本专利技术主要目的是为了解决在对现有野生中国桔梗中的类黄酮/花青素合成途径中色素合成相关基因进行表达情况分析时，缺少合适且稳定的内参基因及qRT
‑
PCR分析用内参引物的问题。本专利技术提供一个长为570bp的中国桔梗RPL13基因序列，可以做为内参基因，根据研究需要设计相应的RT
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PCR、qRT
‑
PCR及Northern blot等分析对应的扩增引物来对中国桔梗以及与其亲缘关系相近的同科其它植物的不同花色材料的类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因的表达情况进行分析。同时，该内参基因也可用做对中国桔梗及其亲缘关系较近同科的其它植物的茎、叶及花等不同组织部分中的目标基因表达情况进行分析时的内参基因。所提供的一对qRT
‑
PCR分析用内参引物可以直接用做对中国桔梗的蓝、紫、白3种不同花色花器官之间的类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因的表达情况进行分析的qRT
‑
PCR内参引物，也可做为中国桔梗茎、叶及蓝、紫、白不同花色花器官等不同组织部分中的目标基因表达情况进行分析的qRT
‑
PCR内参引物。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术第一方面提供中国桔梗RPL13内参基因，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0008]本专利技术第二方面提供中国桔梗RPL13内参基因在中国桔梗茎、叶及蓝色、紫色、白色不同花色、不同组织部位的目标基因进行表达谱分析研究中的应用。
[0009]进一步，优选的是，该内参基因做为分析中国桔梗类黄酮/花青素合成途径中色素合成相关基因表达情况的内参基因。
[0010]进一步，优选的是，分析采用qRT
‑
PCR法。
[0011]进一步，优选的是，采用qRT
‑
PCR法分析时，所用的内参引物如下：
[0012]正向引物：5
’‑
gtccaaggctggtgattc
‑3’
；
[0013]反向引物：5
’‑
cgcggactattggtaaataag
‑3’
。
[0014]进一步，优选的是，qRT
‑
PCR法分析时，扩增体系为：
[0015]cDNA 1μL，Green qPCR SuperMix 5μL，上游引物10μmol
·
L
‑
1 0.2μL，下游引物10μmol
·
L
‑
1 0.2μL，Nuclease
‑
free H2O 3.6μL，总计10μL；
[0016]扩增程序为：94℃预变性30s；95℃变性6s，60℃退火+延伸30s，共45个循环。
[0017]本专利技术第三方面提供中国桔梗类花色素合成基因表达情况分析的内参引物，所述的内参引物如下：
[0018]正向引物：5
’‑
gtccaaggctggtgattc
‑3’
；
[0019]反向引物：5
’‑
cgcggactattggtaaataag
‑3’
。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.中国桔梗RPL13内参基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.权利要求1所述的中国桔梗RPL13内参基因在中国桔梗茎、叶及蓝色、紫色、白色不同花色、不同组织部位的目标基因进行表达谱分析研究中的应用。3.根据权利要求2所述的中国桔梗RPL13内参基因在中国桔梗不同花色形成基因研究中的应用，其特征在于：该内参基因做为分析中国桔梗类黄酮/花青素合成途径中色素合成相关基因表达情况的内参基因。4.根据权利要求3所述的中国桔梗RPL13内参基因在中国桔梗不同花色形成基因研究中的应用，其特征在于：分析采用qRT
‑
PCR法。5.根据权利要求4所述的中国桔梗RPL13内参基因在中国桔梗不同花色形成基因研究中的应用，其特征在于：采用qRT
‑
PCR法分析时，所用的内参引物如下：正向引物：5
’‑
gtccaaggctggtgattc
‑3’
；反向引物：5
’‑
cgcggactattggtaaataag
...

【专利技术属性】
技术研发人员：马璐琳，王继华，贾文杰，段青，杜文文，王祥宁，李想，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：