一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法及其应用，涉及医学工程技术领域。该模型的构建方法是通过基因工程技术使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因不表达或表达受抑制。由此可以使得非人目标动物体表现出视网膜退行性病变相关特征，也基于此，可以将该动物体作为视网膜退行性病变的动物模型，以期为探究视网膜退行性病变的疾病机制以及药物筛选，提供良好的模型研究基础。本发明专利技术为视网膜退行性病变的研究以及筛选治疗该疾病的药物或者疗法提供了一种新的非人动物模型，极大程度上丰富了视网膜退行性病变研究的模型。模型。模型。

【技术实现步骤摘要】
一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医学工程
，具体而言，涉及一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]视网膜退行性病变(或称视网膜变性，Retinal degeneration)是一类能导致不可逆视力损伤甚至失明的严重疾病，其典型特征是神经性视网膜中诸如光感受器或视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium)等高度分化细胞的丢失。光感受器损伤是此类疾病中其中重要的一类，是因光感受器细胞异常死亡导致的视网膜功能下降，视力不可逆受损，甚至失明。目前，用于研究视网膜退行性病变的动物模型较少。
[0003]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法及其应用以解决上述技术问题。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]本专利技术提供了一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法，其包括：通过基因工程技术使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因不表达或表达受抑制。
[0007]Tmem184b基因的中文名为跨膜蛋白184b，人类的Tmem184b基因位于人类22号染色体22q13.1基因座位，包含13个外显子，其转录本经可变剪接可形成a、b、X1、X2、X3
…
X12等14个可变剪接体。该基因由1999年人类基因组计划测序发现，由Dunham等人对人类22号染色体测序后发表于Nature杂志PMID:10591208。Tmem184b的同源基因存在于318种已知物种中，已有研究表明其序列在人和多种模式生物中均十分保守。Tmem184b在各组织中均表达，尤其是在脑、脂肪和胎盘中具有高水平表达。Tmem184b基因编码一个7重跨膜的膜蛋白，相关功能研究很少，仅有少量几篇组学研究涉及到其可能的通路及与癌症的相关性分析。目前对Tmem184b基因的研究还处于初期阶段，其在小鼠以及其他哺乳动物体内的具体作用机制尚不清楚，限制了其开发应用。
[0008]专利技术人发现，使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因不表达或表达受抑制，可以使得非人目标动物体表现出视网膜退行性病变相关特征，基于此，可以将该动物体作为视网膜退行性病变的动物模型，以期为探究视网膜退行性病变的疾病机制以及药物筛选，提供良好的模型研究基础。本专利技术为视网膜退行性病变的研究以及筛选治疗该疾病的药物或者疗法提供了一种新的非人动物模型，极大程度上丰富了视网膜退行性病变研究的模型。
[0009]上述表达受抑制包括不限于：Tmem184b基因的表达水平与正常目标动物体中的表达水平相比，表达水平略显下降或表达水平明显下降。
[0010]在本专利技术应用较佳的实施方式中，通过基因工程技术使得非人目标动物基因组中
的Tmem184b基因的全部外显子或部分外显子不表达或表达受抑制。
[0011]需要说明的是，不同非人目标动物基因组中的Tmem184b基因的外显子数目不同，根据需求选择全部外显子或部分外显子不表达或表达受抑制，均在本专利技术的保护范围内。
[0012]部分外显子的数目可以是一个，两个，三个或多个。无论敲除那种类型(部分或全长)的序列，只要是被敲除动物的细胞中沉默Tmem184b基因的表达，使动物表现出视网膜退行性病变相应特征即属于本专利技术的保护范围。
[0013]在本专利技术应用较佳的实施方式中，非人目标动物为具有Tmem184b同源基因的非人目标动物；
[0014]非人目标动物为哺乳动物，可以是小鼠、大鼠、兔、牛、狗、猪、马、羊、猴或猿；优选地，非人目标动物为小鼠。
[0015]在本专利技术应用较佳的实施方式中，使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因的第1
‑
17号外显子中的至少一个外显子不表达或表达受抑制。可选的，使得第4
‑
7号外显子、第4
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10号外显子不表达或表达受抑制。
[0016]在本专利技术应用较佳的实施方式中，当非人目标动物为小鼠时，使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因的第4
‑
6号外显子序列不表达或表达受抑制。小鼠Tmem184b基因(Transmembrane protein184b，MGI:2445179)位于小鼠15号染色体79244884
‑
79287503bp，全长46.62kb，其cDNA全长3431bp，包含17个外显子。
[0017]需要说明的是，当选用其他非小鼠哺乳动物作为疾病模型时，本领域技术人员容易获得与小鼠Tmem184b基因同源的基因，敲除该同源基因即可得到视网膜退行性病变疾病模型。
[0018]在本专利技术应用较佳的实施方式中，基因工程技术为：基因编辑技术、基因敲除技术和RNA干扰技术中的任意一种技术或多种技术的组合。
[0019]在本专利技术应用较佳的实施方式中，基因编辑技术选自ZFN技术、TALEN技术、CRISPR/Cas9技术和DNA同源重组技术中的至少一种；
[0020]基因敲除技术选自完全基因敲除技术或条件型基因敲除技术。
[0021]在本专利技术应用较佳的实施方式中，构建方法包括将Tmem184b基因敲除的非人目标动物进行相互交配，获得Tmem184b基因敲除的纯合子视网膜退行性病变疾病模型。
[0022]Tmem184b基因敲除鼠从赛业生物科技有限公司购买，品系号码：C57BL/6N
‑
Tmem184b
em1cyagen
。
[0023]上述敲除策略是采用CRISPR/Cas9技术敲除Tmem184b基因。但在其他的实施例中，在明确了所敲除基因的前提下，采用本领域常规的基因编辑技术是容易实现基因敲除目的的。因此，在其他的实施例中采用CRISPR/Cas9技术或其他的技术手段敲除Tmem184b基因，也是属于本专利技术的保护范围。
[0024]本专利技术还提供了一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法构建得到的视网膜退行性病变疾病模型在视网膜退行性病变疾病研究中的应用，研究是以非疾病的诊断或治疗为目的。
[0025]通过本专利技术的构建方法得到的非人动物模型具有典型视网膜退行性病变疾病特征，其具有非常广阔的应用前景，例如将其用于研究视网膜退行性病变性疾病的发病过程、发病机制，为深入了解研究视网膜退行性病变性疾病提供基础。又或者将其用于筛选用于
预防或治疗视网膜退行性病变性疾病药物、用于评价药物的疗效或预后等。
[0026]本专利技术还提供了一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法构建得到的视网膜退行性病变疾病模型在早期分子筛查药物或在筛选靶向治疗视网膜退行性病变疾病药物中的应用。
[0027]在本专利技术应用较佳的实施方式中，视网膜退行性病变疾病表现为：神经性视网膜中诸如光感受器或视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium)等高度分化细胞的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种视网膜退行性病变疾病模型的构建方法，其特征在于，其包括：通过基因工程技术使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因不表达或表达受抑制。2.根据权利要求1所述的视网膜退行性病变疾病模型的构建方法，其特征在于，通过基因工程技术使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因的全部外显子或部分外显子不表达或表达受抑制。3.根据权利要求1或2所述的视网膜退行性病变疾病模型的构建方法，其特征在于，所述非人目标动物为具有Tmem184b同源基因的非人目标动物；优选地，所述非人目标动物为小鼠、大鼠、兔、牛、狗、猪、马、羊、猴或猿；优选地，所述非人目标动物为小鼠。4.根据权利要求3所述的视网膜退行性病变疾病模型的构建方法，其特征在于，使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因的第1
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17号外显子中的至少一个外显子不表达或表达受抑制；优选地，当非人目标动物为小鼠时，使得非人目标动物基因组中的Tmem184b基因的第4
‑
6号外显子序列不表达或表达受抑制。5.根据权利要求1或2所述的视网膜退行性病变疾病模型的构建方法，其特征在于，所述基因工程技术为：基因编辑技术、基因敲除技术和...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱献军，刘果，杨业明，
申请(专利权)人：四川省医学科学院，
类型：发明
国别省市：